ГАСТРОПРОТЕКТОРНОЕ СРЕДСТВО Российский патент 2010 года по МПК A61K36/48 A61P1/04 

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии и гастроэнтерологии, и может быть использовано для профилактики и лечения острых язвенных поражений желудка.

Для терапии гастропатий, индуцированных нестероидными противовоспалительными препаратами (НПВП), применяют две группы лекарственных средств, эффективность которых подтверждена большим числом исследований и клинической практикой, - ингибиторы протонной помпы и синтетические аналоги простагландинов (Шептулин А.А. Современные возможности лечения и профилактики НПВП-индуцированной гастропатий // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии, 2006, №1, С.15-19). Однако терапевтическое действие ингибиторов протонной помпы зависит от инфицированности слизистой оболочки Н. pylori: препараты более эффективны при наличии этого микроорганизма (Маев И.В., Вьючкова B.C., Стасева И.В. Сравнительная оценка различных схем терапии гастропатий, вызванных НПВП // Терапевтический архив, 2004, №2, С.27-30). Высокая стоимость, нежелательные эффекты и неудобная схема применения ограничили широкое использование синтетических аналогов простагландинов в нашей стране (Шварц Г.Я. Современные нестероидные противовоспалительные средства // Монография. М.: Издательство "Реафарм", 2003. - 40 с.; Juni P., Rutjes A.W.S., Dieppe P.A. Gastrointestinal ulcer complications: Are selective COX-2 inhibitors superior to traditional NSAIDs? // Br. Med. J. 2002, Vol.321, P.1287-1288). Поэтому, проблема поиска наиболее оптимальных методов защиты желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) на фоне приема НПВП весьма актуальна.

Цель изобретения: расширение арсенала гастропротекторных средств. Цель достигается применением диосмина (7-рутинозид диосметин) в качестве гастропротектора. При экспериментальных исследованиях НПВП-индуцированной гастропатии было впервые выявлено его гастропротекторное действие.

В работе использовали субстанцию диосмина, выделенную из травы вики изменчивой профессором, заведующим кафедрой органической химии Пятигорской государственной фармацевтической академии Оганесяном Э.Т. известным способом (Шаренко О.М. Химико-технологическое обоснование использования вики изменчивой, вики Гроссгейм и вики обрубленной как источников получения гепатозащитных и венотонизирующих средств: Дисс… канд. фармац. наук. - Пятигорск, 2005). Субстанция представляет собой серый порошок, плохо растворимый в воде, который обладает следующими свойствами: взаимодействовать со свободными радикалами; связываться с различными ферментами, изменяя их активность; участвовать в транспорте электронов; образовывать хелатные комплексы с различными ионами металлов. Диосмин (C₂₈H₃₂O₁₅, Т_пл 290-293°С) является основным флавоноидом надземной части вики изменчивой, представляет собой 7-рутинозид диосметина. Характерной особенностью данного биозида является высокая прочность гликозидной связи (Шаренко О.М. Химико-технологическое обоснование использования вики изменчивой, вики Гроссгейм и вики обрубленной как источников получения гепатозащитных и венотонизирующих средств: Дисс… канд. фармац. наук. - Пятигорск, 2005). Диосмин - основной компонент многих венотонизирующих препаратов.

Пример. Крысе массой 210 г внутрижелудочно через зонд вводили водный раствор предварительно суспендированной с лецитином субстанции диосмина объемом 1,5-2 мл в дозе 100 мг/кг однократно в течение 8 суток. Параллельно моделировали НПВП-индуцированную гастропатию путем внутрижелудочного введения взвеси кислоты ацетилсалициловой (АСК) в дозе 150 мг/кг однократно спустя один час после введения исследуемого вещества в течение последних 3 суток эксперимента. На 8-е сутки от начала опыта через 4 часа после последнего введения кислоты ацетилсалициловой животное было декапитировано с учетом требований этического комитета. В результате был произведен забор крови для получения сыворотки, в которой определяли активность перекисного окисления липидов (ПОЛ). После вскрытия желудка оценивали картину слизистой оболочки (количество и площадь язвенных дефектов, наличие признаков кровотечения).

Была забрана также ткань желудка для гистологического исследования и для получения гомогената, в котором также определяли активность ПОЛ.

При визуальном обследовании слизистая оболочка была слабо гиперемирована, складки не утолщены, единичные точечные кровоизлияния, площадь и количество язвенных дефектов были достоверно меньше, чем в контрольной группе животных (см. табл.1). В результате исследования активности перекисного окисления липидов светосумма в сыворотке крови данной крысы 61041, что приближается к среднему значению интактных животных и значительно ниже среднего показателя животных с НПВП-гастропатией (см. табл.2). Значение величины светосуммы в гомогенате желудка у опытного животного определено на уровне 52542, что также значительно ниже средней величины животных с НПВП-гастропатией и ближе к среднему значению интактных животных.

В результате гистологического исследования срезов ткани желудка опытной крысы было выявлено значительное уменьшение выраженности повреждений слизистой оболочки желудка по сравнению с животными с НПВП-гастропатией (см. фото 2, 3).

Лабораторные исследования были выполнены на 30 крысах-самцах линии Вистар массой 200-220 г в осенне-зимний период. Все животные были разделены на контрольную (интактные крысы) и 2 опытные группы (НПВП-гастропатия; НПВП-гастропатия + лекарственное вещество).

Количество животных в каждой серии составляло 10 особей. Все экспериментальные животные содержались в обычных условиях вивария в соответствии с нормами кормления и содержания лабораторных животных.

Опытным крысам ежедневно внутрижелудочно вводили водный раствор субстанции диосмина в дозе 100 мг/кг однократно в течение 8 суток. Параллельно моделировали НПВП-индуцированную гастропатию путем внутрижелудочного введения взвеси кислоты ацетилсалициловой в дозе 150 мг/кг однократно спустя один час после введения исследуемого вещества в течение последних 3 суток эксперимента (Косолапов В.Н. Гастропротективное действие лохеина и эплира в эксперименте: Автореф. дисс.… канд. фармац. наук. - Пятигорск, 2005. - 24 с.). На 8-е сутки от начала опыта через 4 часа после последнего введения кислоты ацетилсалициловой животные подвергались одномоментной декапитации, с учетом требований этического комитета.

После вскрытия желудка оценивали картину слизистой оболочки (количество и площадь язвенных дефектов, наличие признаков кровотечения). Индекс Паулса, или индекс изъязвления, (ИП) определяли по формуле:

ИП=А×В/100,

где А - среднее количество язв на 1 животное; В - количество животных с язвами в группе (в %). Противоязвенную активность препаратов определяли как отношение ИП контрольной группы к опытной. Препарат считали активным, если противоязвенная активность в терапевтической дозе равна 2 и более (Пупыкина К.А. Лечебное действие противоязвенного сбора / К.А.Пупыкина, Н.Ж.Басченко, Н.С.Макара // Фармация. - 2006. - №3. - С.37-38).

Оценку показателей свободно-радикального окисления (СРО) проводили методом хемилюминесценции в сыворотке крови и супернатанте гомогената ткани желудка. Исследованию подвергалась сыворотка, отделяемая путем центрифугирования в течение 15 минут при 3000 об/мин цельной крови, собираемой в момент декапитации животных. В качестве оценочного показателя использовалась величина светосуммы, отражающая интенсивность образования свободных радикалов и участие в процессе СРО антиоксидантных систем.

Моделирование НПВП-гастропатии у крыс приводило к выраженному повышению активности процессов перекисного окисления липидов как в желудке, так и в сыворотке крови экспериментальных животных (см. табл.2). Применение соединения приводит к снижению активности ПОЛ в желудке и сыворотке крови животных, получавших диосмин относительно группы с НПВП-гастропатией (см. табл.2).

В результате исследования гистологических препаратов желудка животных было выявлено, что в контрольной группе морфологическое строение стенки желудка не нарушено (см. фото 1), а также значительное уменьшение выраженности повреждений слизистой оболочки желудка животных, получавших диосмин по сравнению с животными с НПВП-гастропатией (см. фото 2, 3).

В ходе экспериментального исследования было установлено, что соединение оказывает гастропротекторное действие, уменьшая площадь и количество язвенных дефектов слизистой оболочки желудка, эффективно снижая активность процессов перекисного окисления липидов, а также выраженность повреждений слизистой оболочки желудка.

Таким образом, выявлено, что диосмин:

1) уменьшает площадь и количество язвенных дефектов слизистой оболочки желудка;

2) значительно снижает активность перекисного окисления липидов в желудке и сыворотке крови;

3) уменьшает выраженность повреждения слизистой оболочки желудка.

Таблица 1 Группа Площадь Количество Среднее     наблюдения (n=10) язвенных дефектов, мм² (М±m) животных с язвенными дефектами, (%) количество язвенных дефектов на 1 крысу (Х±m) ИП ПА Контроль (АСК) 11,71±2,17 100 10,33±0,82 10,3 - Диосмин 100 мг/кг 8 дней + АСК 3,17±0,68* 100 1,67±0,52* 1,7 6,0

Таблица 2 Среды исследования Интактные животные Контрольные животные Диосмин 100 мг/кг Сыворотка крови 45228,00±1765,33 159261,00±4334,88# 84415,00±1580,80* Гомогенат желудка 42332,50±3609,24 82811,67±5977,90# 58242,50±5488,29*

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к созданию гастропротекторного средства, представляющего собой флавоноид травы вики изменчивой 7-рутинозид диосметин. Средство уменьшает площадь и количество язвенных дефектов слизистой оболочки желудка; значительно снижает активность перекисного окисления липидов в желудке и сыворотке крови; уменьшает выраженность повреждения слизистой оболочки желудка. 2 табл., 3 ил.

Применение флавоноида травы вики изменчивой 7-рутинозид диосметина в качестве гастропротекторного средства.