СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИФЕНОЛОВ, ОБЛАДАЮЩИХ ГЕПАТОЗАЩИТНОЙ, ЖЕЛЧЕГОННОЙ, АНТИОКСИДАНТНОЙ И АНАЛЕПТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1994 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способа производства лекарственных препаратов из растительного сырья.

Известны способы получения полифенольных суммарных препаратов с гепатозащитными или желчегонными свойствами из растений. Например, силибор используется как гапатозащитное средство [1], а сумма полифенольных соединений из травы вики посевной обладает желчегонной активностью [2].

Способ получения силибора заключается в экстракции семян расторопши пятнистой 80%-ным спиртом с последующим упариванием и растворением остатка 50% -ным этанолом. Раствор обрабатывают четыреххлористым углеродом, затем смесью хлороформ - спирт 2:1. Органическую фазу упаривают, сушат и получают целевой продукт с выходом 4,5-5% по сырью [1].

Однако средство, получаемое этим способом, обладает лишь гепатозащитным действием.

Известен способ получения суммы полифенольных соединений, обладающей желчегонной активностью, путем экстракции 30%-ным гидролизным спиртом травы вики посевной (Vicia Sativa L) при 70^оС. Водно-спиртовое извлечение упаривают и обрабатывают 96%-ным раствором этанола, осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме и сушат [2]. Специфическое действие препарата также одностороннее.

Сведений о выделении вещества из растительного сырья, обладающих одновременно гепатозащитной, желчегонной, антиоксидантной и аналептической активностью не обнаружено.

Сущность способа заключается в экстракции измельченной травы (надземная часть) астрагала бунговского A.Bungeanus Borigs) 80%-ным этанолом в реакторе, с подогревом до 60-70^оС при соотношении сырья и экстрагента (1:4)-(1: 5), с последующей очисткой извлечения этилацетатом, сгущением объединенных извлечений до минимума. Сумму полифенольных соединений осаждают сухим хлороформом.

П р и м е р 1. 1 кг воздушно-сухого измельченного сырья помещают в реактор и исчерпывающе (5 раз) экстрагируют 80%-ным этанолом в соотношении сырья и экстрагент 1:5 при нагревании до 70^оС. Объединенные спиртовые извлечения (23,8 л) упаривают в вакууме при температуре 70-80^оС до 300 мл и очищают этот остаток 10 раз по 100 мл хлороформа от хлорофилла, липидов и других балластных веществ. Затем очищенную фракцию исчерпывающе экстрагируют 10 раз по 100 мл этилацетатом. Этилацетатные извлечения суммируют, сушат над безводным сульфатом натрия, раствор фильтруют и отгоняют в вакууме до объема 50 мл. Сумму полифенолов осаждают 5-кратным объемом сухого хлороформа. Осадок отделяют на стеклянном фильтре N 2-4, высушивают в сушильном шкафу при 60^оС в течение 12 ч. Выход составил 5,9-6,2% (59,00-62,00/г).

Изучение гепатозащитной, антиоксидантной и желчегонной активности, а также токсичности суммарного полифенольного извлечения из астрагала проводилось на белых крысах массой 130-185 г линии Вистар.

Определение гепатопротекторного и антиоксидантного действия заявляемого вещества проводили на модели острой жировой дистрофии печени, вызванной тетрахлорметаном (внутрижелудочное введение 50% -ного масляного раствора 0,75 мл (100 г массы тела). О степени гепатозащитного действия исследуемых веществ судили по их способности уменьшать активность индикаторного фермента аланин-аминотрансферазы (АЛАТ) в сыворотке крови. Концентрацию АЛАТ в сыворотке крови определяли по методу Reitmans и Frankols, 1957 г. Реферанс-препаратом для этого вида активности был выбран силибор.

Изучение желчегонной активности проводили по методике Скакун Н.П. и Олейник А.Н. для этого белым крысам под наркозом (1%-ный р-р барбамила внутрибрюшинно из расчета 0,8 мл/100 г массы тела) вводили канюлю в желчный проток и собирали желчь в течение 3 ч. Исследуемое вещество и референс-препарат (фламин) вводили в двенадцатиперстную кишку. Скорость секреции желчи выражали в мг/мин/100 и сравнивали с аналогичным у контрольной группы животных. Полученные данные статистически обрабатывали.

Гепатозащитная активность суммарного полифенольного препарата из астрагала бунговского приведена в табл.1.

Желчегонная активность суммарного полифенольного препарата из астрагала бунговского дана в табл. 2.

Антиоксидантную активность оценивали по степени уменьшения концентрации конечного продукта перекисного окисления липидов малонового альдегида (МДА) в тканях печени.

Антиоксидантная активность суммарного полифенольного извлечения из астрагала бунговского приведена в табл. 3.

Концентрацию МДА определяли по методу Стальной И.Д. и Гаришвили Т.Г.

В качестве препарата сравнения использовался витамин Е.

Определение аналептической активности проводилось на модели нембуталового сна. Эталонным препаратом для сравнения аналептической активности был выбран кофеин-бензоат натрия в дозе 10 мг/кг массы тела (внутрибрюшинное введение). Определение проводилось на белых крысах-самцах. Одновременно ставилось несколько серий экспериментов на шесть животных в каждой серии: первая серия - контроль (физраствор), вторая - стандартная (кофеин-бензоат натрия), третья - опытная (соответствующая сумма полифенолов). Дозы препарата и вещества подбирались с учетом средней смертельной LD₅₀). Результаты обрабатывались статистически (табл.4).

Как видно из таблиц, желчегонная, гепатозащитная и антиоксидантная активность суммы полифенолов из астрагала бунговского несколько ниже соответствующих активностей препаратов сравнения. Однако аналептическая активность суммы полифенолов из астрагала бунговского более чем в 1,5 раза превышает действие кофеина-бензоата натрия.

LD₅₀, вычисленная по методу пробит-анализа В.Б.Прозоровского, для заявляемого вещества составляет 10650 мг/кг.

Использование: изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения полифенолов, обладающих гепатозащитной, желчегонной, антиоксидантной и аналептической активностью. Сущность заключается в экстракции травы астрагала бунговского 80%-ным этанолом, упаривании, извлечении, его обезжиривании хлороформом, извлечении этилацетатом, осаждении сухим хлороформом и высушивании. Препарат одновременно обладает четырьмя активностями. 4 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИФЕНОЛОВ, ОБЛАДАЮЩИХ ГЕПАТОЗАЩИТНОЙ, ЖЕЛЧЕГОННОЙ, АНТИОКСИДАНТНОЙ И АНАЛЕПТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ, путем экстракции травы астрагала бунговского (A.Bungeanus Boriss) 80%-ным этанолом, упаривания экстракта, его обезжиривания хлороформом, извлечения целевого продукта этилацетатом, его осаждения сухим хлороформом и высушивания.