СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СУММАРНЫХ СУБСТАНЦИЙ, ОБЛАДАЮЩИХ ЖЕЛЧЕГОННОЙ, ГЕПАТОЗАЩИТНОЙ, ГИПОХОЛЕСТЕРИНЕМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2000 года по МПК A61K35/78 A61P1/16 A61P3/00 

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способа производства лекарственных препаратов из растительного сырья.

Известны способы получения из растений рода Астрагал полифенолов, обладающих желчегонной (Способ получения суммы полифенолов, обладающих желчегонной активностью. А/С 1737796, 28.03.90) гепатозащитной, желчегонной, антиоксидантной и аналептической активностью (Способ получения суммы флавоноидов, обладающих гипоазотомическим действием. А/С 1768898/31-16, 25.01.75; Способ получения суммы полифенолов, обладающих гепатозащитной, желчегонной, антиоксидантной и аналептической активностью. Патент 2018315 от 22.01.92), а также известны способы получения суммы полифенольных соединений из других растений, обладающих желчегонной активностью. Однако сообщений о желчегонной, гипохолестеринемической, генатозащитной, антиоксидантной активности для суммарных извлечений из астрагалов не обнаружено, а вид A. Onobrychis L. не изучался совсем, хотя известно о применении его в народной медицине (Батрак Г. Е. , Е. Н. Попова, И.Н. Фурса Новые лекарственные средства растительного происхождения. Киев, 1959; Степашкина К.И. Астрагал и его применение в медицинской практике. Киев, 1960).

Описаны способы получения суммарных препаратов с гепатозащитным, желчегонным действием из других растений. Например, силибор используется как гепатозащитное средство (Способ получения полифенольных хромонов. А/С 603386), а сумма полифенольных соединений из травы Вики посевной обладает желчегонной активностью (Способ получения суммы полифенольных соединений, обладающих желчегонной активностью. А/С 1018641, 16.12.81).

Способ получения силибора заключается в экстракции расторопши пятнистой 80% этанолом, с последующим упариванием и растворением остатка 50% этанолом. Раствор обрабатывают в начале четыреххлористым углеродом, затем смесью хлороформ-спирт 2:1. Органическую фазу упаривают, сушат и получают целевой продукт с выходом 4,50 - 5,0% по сырью, однако, средство, получаемое этим способом обладает лишь гепатозащитным действием (Способ получения полифенольных хромонов. А/С 603386).

Известен способ получения суммы полифенольных соединений (флавоноидов, оксикоричных кислот, оксикумаринов), обладающих желчегонной активностью путем экстракции 30% гидролизным спиртом травы Вики посевной (Vicia Sativa L.) при 70^oC. Водно-спиртовое извлечение упаривают и обрабатывают 96% этанолом, осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме и сушат. Специфическое действие препарата одностороннее (Способ получения суммы полифенольных соединений, обладающих желчегонной активностью. А/С 1018641, 16.12.81).

В качестве прототипа выбран способ получения полифенолов из астрагала бунговского, который обладают гепатозащитной, желчегонной и актиоксидантной активностью. 1 кг воздушно-сухого измельченного сырья помещают в реактор и исчерпывающе (5 раз) экстрагируют 80%-ным этанолом в соотношении сырья и экстрагент 1: 5 при нагревании до 70^oC. Объединенные спиртовые извлечения (23,8 л) упаривают в вакууме при температуре 70 - 80^oC до 300 мл и очищают этот остаток 10 раз по 100 мл хлороформа от хлорофилла, липидов и других балластных веществ. Затем очищенную фракцию исчерпывающе экстрагируют 10 раз по 100 мл этилацетатом. Этилацетатное извлечение суммируют, сушат над безводным сульфатом натрия, раствор фильтруют и отгоняют в вакууме до объема 50 мл. Сумму полифенолов осаждают 5-кратным объемом сухого хлороформа. Осадок отделяют на стеклянном фильтре N 2 - 4, высушивают в сушильном шкафу при 60^oC в течение 12 ч. Выход составил 5,9 - 6,2% (Способ получения суммы полифенолов, обладающих гепатозащитной, желчегонной, антиоксидантной и аналептической активностью. Патент 2018315 от 22.01.92).

Однако известный способ не обеспечивает получение препарата, состоящего из полисахаридов, флавоноидов, оксикоричных кислот, сапонинов, оксикумаринов, увеличивающего скорость желчеотделения, а так же не позволяет получать достаточно высокий выход продукта.

Задачей изобретения является повышение выхода целевого продукта, увеличение его активности, снижение затрат, получение субстанций, содержащих различные группы биологически активных веществ.

Поставленная задача решается тем, что, согласно способу получения суммы аминокислот, полисахаридов, оксикумаринов, полифенолов, сапонинов обладает желчегонной, гепатозащитной, гипохолестеринемической активностью путем экстракции травы астрагала эспарцетного 30%, 50% и 70% этанолом, упариванием до 1/3 объема под вакуумом, очистка от липофильных веществ путем отстаивания при температуре 2 - 4^oC в течение 48 часов, фильтрация, упаривание фильтрата и сушки в вакуум-сушильном шкафу. Выход составляет 28,0 - 32,7%. Основные биологически активные ингредиенты целевого продукта (на 100 кг) флавоны, флавонолы и их гликозиды 15 - 17%, фенолокислоты 5 - 6%, сапонины 36 - 38%, кумарины 0,10 - 0,12%, полисахариды 8 - 10%.

Пример 1. 1 кг воздушно-сухого измельченного сырья помещали в реактор и исчерпывающе экстрагировали 30% этанолом в соотношении сырье-экстрагент 1:10 в течение 3 часов при T^oC 60 - 65^oC до полного истощения сырья. Объем спиртового извлечения составил 20 л, упаривали этанол при T^oC 75 - 80^o. Водный остаток упаривали в вакууме при температуре 40 - 50^oC при 300 - 400 мм рт. ст. до 2 л и оставляли в холодильнике при температуре 2 - 4^oC на 48 часов, фильтровали и сушили в вакуум-сушильном шкафу при температуре 40^oC и разряжении 300 - 400 мм рт.ст.

Выход составил 28,6 - 29,6%.

Пример 2. 1 кг воздушно-сухого измельченного сырья помещали в реактор с подогревом и экстрагировали 50% этанолом в соотношении фаз 1:10 при нагревании до 60 - 65^oC в течение 3 часов. Первый контакт фаз - 2 часа, второй контакт фаз - до полного истощения сырья. Объем спиртового извлечения составил 20,2 л. Этанол упаривали при T^o 70 - 75^oC, водный остаток при T^o 40 - 50^oC при 300 - 400 мм рт.ст. до 2 литров и оставляли в холодильнике при T^o 2 - 4^oC на 48 часов, затем фильтровали и сушили в вакуум-сушильном шкафу при T^o 40^oC и разряжении 300 - 400 мм рт.ст.

Выход составил 30,0 - 32,5%.

Пример 3. 1 кг воздушно-сухого измельченного сырья помещали в реактор с подогревом и экстрагировали 70% этанолом в соотношении фаз 1:10 при нагревании до 70^oC в течение 1 часа, экстракцию проводили до полного истощения сырья. Объем - составил 19,6 кг. Этанол упаривали при T^o 70 - 72^oC, водный остаток при T^o 40^oC в вакууме при разряжении 300 - 400 мм рт.ст. до 1,96 л. Оставляли в холодильнике при T^o 2 - 4^oC на 2 - 3 дня. Липофильную часть отфильтровывали, остаток сушили в вакуум-сушильном шкафу при температуре 40^oC при 300 - 400 мм рт.ст. Выход составил 29,0 - 30,0%. Данные представлены в таблице 1.

Изучение желчегонной, гепатозащитной, гипохолестеринемической активности проводилось на белых крысах массой 130 - 190 г линии Вистар. Изучение желчегонной активности проводили по методике Скакун Н.П. и Олейник A.Н. ("Фармакология и токсикология". 1967, N 3, с. 334 - 337).

Для этого белым крысам под наркозом (1% раствор барбитала внутрибрюшинно из расчета 0,8 мл/100 г массы тела) вводили канюлю и собирали желчь в течение трех часов.

Исследуемые субстанции и референс-препарат (фламин) вводили в двенадцатиперсную кишку.

Скорость секреции желчи выражали в мг/мин/100 и сравнивали с аналогичным у контрольной группы животных. Полученные данные статистически обрабатывались (Государственная фармакопея СССР. 11-е изд. М.: Медицина, 1987). Данные представлены в таблице 2.

Анализируя данные таблицы можно сделать выводы, что по желчегонной активности суммарные субстанции находятся на уровне фламина (30%-экстрагент) или превышают его действие в 1,27 - 1,28 раза, в сравнении с прототипом выше в 2,06 - 2,7 раза.

Изучение гепатопротекторного действия суммарных субстанций проводили на модели острой жировой дистрофии печени, вызванной тетрахлористаном (внутрижелудочное введение 50% масляного раствора 0,75 мл/100 г массы тела). О степени гепатозащитного действия исследуемых веществ судили по их способности уменьшить активность индикаторного фермента аланинаминотрансферазы (АЛАТ) в сыворотке крови. Концентрацию АЛАТ в сыворотке крови определяли по методу Reitmanis S. и Frankels S. 1957 (Reitman S., Frankel S. Acolorimetric method for the olete rmination of serum glutamic oxalacetic and glutamic pyrivis transaminases Am. J. Clin Path. - 1957. 28. P 56 - 59). Референс препаратом для этого вида активности был выбран силибор. Данные представлены в таблице 3.

Из таблицы 3 видно, что по гепатозащитному действию все суммарные субстанции проявляют активность, а суммарные субстанции, полученные 50% и 70% этанолом превышает действие силибора в 1,24 - 1,47 раза.

Изучение гиполипидимического действия проводили на белых крысах с экспериментальной гипергликимией, вызванной введением тритона WR-1339 (Лисевицкая Л. И. Влияния флавоноидов на содержание липидов при экспериментальной гипохолистеринемии и атеросклерозе. //Автореферат дисс. канд. биол. наук - Л.: - 1969. - 20 с.).

Исследуемые вещества вводились внутрибрюшинной, в дозах 200 - 250 мг/кг массы тела животных дважды:
- первый раз за 24 часа,
- второй раз одновременно с тритоном WR-1339 за 15 час до декапитации.

Для сравнения гипохолестеринемического действия суммарных субстанций из астрагала эспарцетного в тех же условиях вводили официальные препараты мисклерон, полиспонин и прототип. Контролем служат с экспериментальной гипохолестеринемической патологией, вызванной внутрибрюшинным введением тритона WR-1339, 15 часов до декапитации.

В качестве показателей гиполипидемической активности вводимых суммарных субстанций из астрагала эспарцетного рассматривалось снижение общего холестерина (ХС) и триглицеридов (ТГ) в сыворотке крови экспериментальных животных.

Введение животным суммарных субстанций из астрагала эспарцетного приводят к значительному торможению развития гипохолестеринемического эффекта по сравнению с введением препарата полиспонина и мисклерона в 1,12 - 1,5 раза и находится на уровне прототипа полифенольной субстанции из астрагала бунговского. Данные представлены в таблице 4. LD₅₀, вычисленная по методу пробит-анализа В. Б. Прозоровского для заявляемых суммарных субстанций составляет 5650 - 8840 мг/кг (Прозоровский В.Б., Прозоровская М.П. //Фармакология и токсикология. - 1980. - N 6. - С. 733 - 735).

Изобретение относится к фармацевтической промышленности. Траву астрагала эспарцетного экстрагируют 30%-ным, или 50%-ным, или 70%-ным этанолом при 60 - 65°С при соотношении фаз 1:10. Упаривают до 1/3 объема под вакуумом. Очисткой от липофильных веществ ведут отстаиванием при температуре 2 - 4°С в течение 48 ч. Сушку проводят в вакуум-сушильном шкафу при 40 - 45°С и разряжении 300 - 400 мм рт.ст. Изобретение позволяет подвысить выход продукта, увеличить его активность, снизить затраты. 3 с.п. ф-лы, 4 табл.

1. Способ получения суммарных субстанций из травы астрагала эспарцетного, обладающего желчегонной, гепатозащитной, гипохолестеринемической активностью, путем экстракции этанолом с дальнейшим упариванием под вакуумом, очисткой от липофильных веществ, сгущением под вакуумом и сушкой в вакуум-сушильном шкафу, отличающийся тем, что в качестве экстрагента используют 30%-ный этанол, экстракцию ведут при 60 - 65^oC, при соотношении фаз 1 : 10, очистку проводят отстаиванием при 2 - 4^oC, сушку при 40 - 45^oC и разряжении 300 - 400 мм рт.ст. 2. Способ получения суммарных субстанций из травы астрагала эспарцетного, обладающих желчегонной, гепатозащитной, гипохолестеринемической активностью, путем экстракции этанолом с дальнейшим упариванием под вакуумом, очисткой от липофильных веществ, сгущением под вакуумом и сушкой в вакуум-сушильном шкафу, отличающийся тем, что в качестве экстрагента используют 50%-ный этанол, экстракцию ведут при 60 - 65^oC, при соотношении фаз 1 : 10, очистку проводят отстаиванием при 2 - 4^oC, сушку при 40 - 45^oC и разряжении 300 - 400 мм рт.ст. 3. Способ получения суммарных субстанций из травы астрагала эспарцетного, обладающих желчегонной, гепатозащитной, гипохолестеринемической активностью, путем экстракции этанолом с дальнейшим упариванием под вакуумом, очисткой от липофильных веществ, сгущением под вакуумом и сушкой в вакуум-сушильном шкафу, отличающийся тем, что в качестве экстрагента используют 70%-ный этанол, экстракцию ведут при 60 - 65^oC, при соотношении фаз 1 : 10, очистку проводят отстаиванием при 2 - 4^oC, сушку при 40 - 45^oC и разряжении 300 - 400 мм рт.ст.