ВАКЦИНА ПРОТИВ РОЖИ СВИНЕЙ Российский патент 1994 года по МПК A61K39/02 

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии и представляет собой живую вакцину для профилактики рожи свиней.

Широко известны вакцинные препараты против рожи свиней, такие как депонированная из матрикса Конева вакцина из штамма ВР-2, инактивированная гидроокись алюминиевая вакцина из штаммов возбудителей рожи свиней группы В [1].

Прототипом заявленного изобретения является живая вакцина против рожи свиней, содержащая суспензию аттенуированного штамма Erysipelothrix insidiosa ВР-2 в среде выращивания и стабилизатор из сахарозы, желатина, агара [2].

Известные вакцины против рожи свиней малоэффективны, поскольку продолжительность иммунитета после применения любой из них не превышает 3-4 месяцев.

Целью изобретения является повышение иммуногенной активности вакцины.

Это достигается тем, что живая вакцина против рожи свиней, содержащая культуру аттенуированного штамма Erysipelothrix insidiosa ВР-2 и стабилизатор сахарозы, желатина и агара, дополнительно содержит культуру штамма ВГНКИ-6/24 при следующих соотношениях компонентов, мас.%:
Бульонная культура штамма ВР-2 50-16,7
Бульонная культура штамма ВГНКИ-6/24 16,7-50
Сахароза 2,4-2,6
Желатин 0,4-0,5
Агар 0,07-0,08
Дистиллированная вода Остальное
Штаммы Erysipelothrix insidiosa ВГНКИ-6/24 (авт. св. по заявке N 4788259/13, кл. С 12 N 1/20) и ВР-2 [2] депонированы в коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратов.

П р и м е р 1. Заявленную вакцину готовят следующим образом.

Штаммы Erysipelothrix insidiosa ВР-2 и ВГНКИ-6/24 выращивают на среде Хоттингера рН 7,2-7,4 раздельно. Время выращивания штамма ВР-2 12 ч, а штамма ВГНКИ-6/24 20 ч при температуре 37оС. Затем полученные культуры смешивают и совместно доращивают при той же температуре в течение 4 ч.

К полученной смеси культур штаммов возбудителей рожи ВР-2 и ВГНКИ-6/24 добавляют 1/3 часть среды высушивания (33,3%), представляющей собой 7,5-8,0% сахарозы, 1,2-1,5% желатина и 0,2-0,24% агара на калийфосфатном буфере. Полученную смесь подвергают лиофильной сушке известным способом (ТУ "Вакцина сухая против рожи свиней" 10-09-132-91. ОКП 93-8415-0800-00).

Каждым образцом вакцины иммунизируют по 20 белых мышей в дозах с различным соотношением микробных клеток (м.кл.) штаммов ВР-2 и ВГНКИ-6/24 при общем количестве 40 микробных клеток в прививной дозе. При этом процентное соотношение компонентов среды высушивания остается постоянным, но их количество в три раза меньше (сахарозы 2,4-2,6; желатина 0,4-0,5%, агара 0,07-0,08% ), поскольку среда высушивания в общем объеме вакцины занимает 1/3 часть.

Через 20 дней белых мышей заражают сухой культурой контрольного штамма возбудителя рожи свиней N 149 в дозе 100 ЛД50.

Результаты опыта представлены в табл. 1.

Соответственно данным табл. 1 иммуногенная активность заявленной вакцины зависит от определенного соотношения штаммов возбудителей рожи, входящих в смесь, и не зависит от количества компонентов среды высушивания.

Минимальное количество микробных клеток каждого из штаммов, входящих в смесь, необходимое для образования напряженного иммунитета у белых мышей, составляет 16,7% от общего количества микробных клеток в смеси (66,6%).

Оптимальное соотношение микробных клеток штаммов, входящих в смесь составляет 1:1, т.е. 33,3% к 33,3%.

П р и м е р 2. Иммуногенную активность заявленной вакцины изучают на подсвинках 4-месячного возраста, не вакцинированных против рожи.

Четыре группы подсвинков (по 4 головы) иммунизируют вакциной внутримышечно в разных дозах с шагом 10:1,8 млрд., 180 млн., 18 млн., 1,8 млн. живых микробных клеток, однократно в объеме 1 млн. Пятую группу (4 головы) оставят невакцинированной в качестве контроля.

Через 16 сут. после иммунизации всех опытных и контрольных поросят заразят культурой контрольного вирулентного штамма Erysipelothrix insidiose С-17 возбудителя рожи свиней с содержанием живых бактерий рожи в инфицирующей дозе 4 млрд. Результаты опыта приведены в табл. 2.

Соответственно данным табл. 2 иммунизирующая доза заявленной вакцины
минимальная 18 млн. м.к.;
максимальная 1,8 млрд. м.к.;
средняя 180 млн. м.к.

П р и м е р 3. Длительность иммунитета заявленной вакцины определяют в хозяйстве при профилактической вакцинации свиней. При этом прививают поросят 2-2,5-месячного возраста согласно наставлению по ее применению однократно, внутримышечно в дозе 50 млн. микробных клеток. Одновременно иммунизируют аналогичных поросят в этом же хозяйстве коммерческой вакциной сухой живой против рожи свиней из штамма ВР-2, изготовленной Краснодарской биофабрикой.

Напряженность иммунитета у свиней определяют через 4,6 и 8 месяцев после вакцинации путем заражения вирулентным заражающим штаммом возбудителя рожи "С-17" в дозе 4 млрд. микробных клеток. Результаты опыта по определению длительности иммунитета у свиней представлены в табл. 3.

Соответственно данным таблицы максимальный срок иммунитета у вакцины, изготовленной из штамма ВР-2 при двухкратной иммунизации в дозе 200 млн. микробных клеток, менее 4 месяцев. У заявленной вакцины при однократной иммунизации в дозе 50 млн. микробных клеток длительность иммунитета 8 месяцев (срок наблюдения).

Заявленная вакцина сухая против рожи свиней ареактогенна для свиней в дозе, превышающей иимунизирующую дозу в 10 раз. Вакцина свободна от контаминации посторонней микрофлорой.

Использование: вакцина, рожа свиней, иммунопрофилактика. Сущность изобретения: иммуногенную активность вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2 повышают путем введения второго вакцинного штамма возбудителя рожи свиней Erysipelothix insidiosa ВГНКИ-6/24. Соотношение вакционных штаммов ВР-2 и ВГНКИ-6/24 в заявленной вакцине следующее, мас.%: бульонная культура штамма ВР-2 50 - 16,7; бульонная культура штамма ВГНКИ-6/24 16,7 - 50; сахароза 2,4 - 2,6; желатин 0,4 - 0,5; агар 0,07 - 0,08%. Иммуногенная активность заявленной вакцины по сравнению с прототипом повышается при снижении иммунизирующей дозы в 8 раз. 3 табл.

ВАКЦИНА ПРОТИВ РОЖИ СВИНЕЙ, содержащая бульонную культуру штамма Erysipelothrix in sidiosa ВР - 2, сахарозу, желатин, агар и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит бульонную культуру штамма Erysipelothrix insidiosa ВГНКИ-6/24 при следующих соотношениях компонентов, мас.%:
Бульонная культура штамма Erysipelothrix insidiosa ВГНКИ-6/24 50,0 - 16,7
Бульонная культура штамма Erysipelothrix insidiosa ВР-2 16,7 - 50,0
Сахароза 2,4 - 2,6
Желатин 0,4 - 0,5
Агар 0,07 - 0,08
Дистиллированная вода Остальное
при этом общее количество микробных клеток культур штаммов составляет (0,18 - 1,0) · 10⁹/мл вакцины.