СРЕДСТВО, ИЗБИРАТЕЛЬНО СТИМУЛИРУЮЩЕЕ ГРАНУЛОМОНОЦИТОПОЭЗ ПРИ ГИПОПЛАЗИИ КОСТНОМОЗГОВОГО КРОВЕТВОРЕНИЯ, ВЫЗВАННОГО ЦИТОСТАТИКОМ Российский патент 1994 года по МПК A61K31/185 

Изобретение относится к медицине, конкретно к клинической гематологии, и может быть использовано для фармакологической коррекции нарушений в системе крови, наблюдаемых при применении цитостатиков.

Известны средства, нормализующие кроветворение при экстремальных условиях, например зимозан, витамины группы В, используемые в качестве неспецифических общеукрепляющих протекторов миелодепресии при цитостатической терапии, элеутерококк, применяемый по тому же назначению при облучении. Однако данные препараты не обладают избирательным стимулирующим действием в отношении грануломоноцитопоэза и являются малоэффективными стимуляторами кроветворения при гипопластических состояниях костного мозга, вызванных применением цитостатиков.

Средства, способные избирательно стимулировать грануломоноцитопоэз отсутствуют, поэтому предлагаемый препарат не имеет адекватных аналогов
Целью предлагаемого изобретения является снижение токсического действия на гемопоэз цитостатиков за счет стимуляции грануломоноцитопаэза.

Поставленная цель достигается тем, что в качестве средства, стимулирующего грануломоноцитопоэз при гипоплазии костно-мозгового кроветворения, вызванного цитостатиками, применяют глюкуроновую кислоту формулы

С₆Н₁₀О₇, мол.м.194,2
Предлагаемое средство - химически чистая глюкуроновая кислота, входящая в состав гликозаминогликанов. Гликозаминогликаны являются естественной составной частью клеточной мембраны и надмембранного слоя клеток (гранулоцитов), влияют на многие процессы в клетках, в том числе и на их способность к пролиферации.

Известно применение глюкуроновой кислоты в эксперименте, в качестве составной части питательных сред и в качестве субстрата для определения активности оксидаз мочевой кислоты.

Применение глюкуроновой кислоты по новому назначению стало возможным благодаря выявленным новым свойствам. Впервые показано, что введение глюкуроновой кислоты избирательно стимулирует грануло-моноцитопоэз при гипоплазии костно-мозгового кроветворения, вызванного применением цитостатиков. Считается, что различные типы гликозаминогликанов тесно связаны с тем или иным ростком гемопоэза. Например показано, что различные типы гипоксии усиливают выработку в гемопоэтической ткани нейтральных гликозаминогликанов, в то время, как облучение усиливает действие факторов, стимулирующих лейкопоэз-кислых форм. Конкретные механизмы действия кислых гликозаминогликанов на гемопоэтические клетки неизвестны. Предполагается, что они влияют на ткани через регуляцию транспорта воды, низкомолекулярных веществ различных ионов. Кроме того, было доказано, что они способны изменять проницаемость клеточных мембран для ионов кальция, влияя тем самым на активность аденилатциклазной системы.

Свойство глюкуроновой кислоты - избирательно стимулировать грануло-моноцитопоэз, в литературе не описано.

Экспериментально установлено, что введение глюкуроновой кислоты в дозе 50 мг/кг на 3, 4, 5 сут после введения цитостатика в максимально переносимой дозе (МПД), оказывает стимулирующее действие на грануло-моноцитопоэз.

Эксперименты проведены на 200 мышах линии СВА, массой 20 г, разделенных на 2 группы. Всем животным вводили однократно внутрибрюшинно циклофосфан в дозе 250 мг/кг. Затем, одной группе 3-кратно на 3, 4, 5-е сут после введения циклофосфана вводили внутривенно глюкуроновую кислоту в дозе 50 мг/кг. Другой группе (контрольной) вводили растворитель - физиологический раствор, в эквивалентном объеме (0,5 мл). Животных забивали на 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10-е сутки методом разрушения позвоночника в шейном отделе. Определяли общее количество лейкоцитов в периферической крови, миелокариоцитов в костном мозге в расчете на бедро. На мазках крови подсчитывали гемограмму, на мазках костного мозга - миелограмму. Также были проведены культуральные исследования и определено число колоний и кластеров у исследуемых животных в различные сроки.

На фиг.1 представлена динамика содержания общего количества миелокариоцитов (А), незрелых (Б) и зрелых (В) нейтрофильных лейкоцитов в костном мозге мышей линии СВА: 1 - на фоне введения циклофосфана; 2 - на фоне сочетанного введения циклофосфана и глюкуроновой кислоты; по оси абсцисс - время после введения цитостатика, сут; по оси ординат - содержание клеток х 10⁶/бедро; доверительные интервалы при Р = 0,05; на фиг.2 - динамика содержания общего количества лейкоцитов (А), нейтрофильных сегментоядерных лейкоцитов (Б) и моноцитов (В): 1 - на фоне введения циклофосфана; 2 - на фоне сочетанного введения циклофосфана и глюкуроновой кислоты; по оси абсцисс время после введения цитостатика, сут; по оси ординат - содержание клеток х 10⁹/л; доверительные интервалы при Р = 0,05; на фиг.3 - динамика содержания КОE (А), КлОЕ (Б), КОЕгм (В), КОЕг (Г), КОЕм (Д): 1 - на фоне введения циклофосфана; 2 - на фоне сочетанного введения циклофосфана и глюкуроновой кислоты; по оси абсцисс - время после введения цитостатика; по оси ординат - содержание колоний и кластеров (% от контроля).

Проведенные исследования показали, что однократное введение циклофосфана в МПД приводило к развитию выраженной гипоплазии костно-мозгового кроветворения (см.табл.1). Максимальная депрессия общего числа миелокариоцитов наблюдалась при этом на 3-и сут после введения цитостатика (до 14,6% от исходного). Анализ миелограмм показал, что в указанный период имело место глубокое подавление как гранулоцитопоэза, так и эритропоэза (см.табл.1). В последующие сроки опыта у контрольных мышей, получавших циклофосфан, наблюдалось восстановление гранулоцитарного ростка гемопоэза: содержание незрелых нейтрофильных лейкоцитов на 4-е сут опыта составило 0,4 ± 0,15х10⁶, а к следующему сроку эксперимента (5-е сутки) увеличилось до 5,2± 0,46х10⁶. Абсолютное количество зрелых нейтрофильных лейкоцитов возрастало на 5 и 6-е сутки эксперимента соответственно до 3,25 ± 0,71х10⁶ и 6,12 ± 0,78х10⁶. Глюкуроновая кислота оказывала выраженный стимулирующий эффект на процессы костно-мозгового гранулоцитопоэза (см.табл.2, фиг.1). Содержание незрелых нейтрофильных лейкоцитов у мышей, получивших цитостатик и глюкуроновую кислоту, на 3-и сут эксперимента составляло 0,7 ± 0,2х10⁶, на 4-е сут увеличивалось до 5,53 ± 0,64х10⁶ и достоверно превышало их количество у здоровых животных (2,25 ± 0,09х10⁶). К следующим суткам эксперимента их число еще больше возрастало, достигая 10,64 ± 0,93х10⁶. Следует подчеркнуть, что темп восстановления содержания незрелых нейтрофильных лейкоцитов у животных опытной группы (получавшей глюкуроновую кислоту) на 4 и 5-е сут в 14 и в 2 раза превосходил отмеченный у мышей, получивших только цитостатик (см.фиг.1). Процессы восстановления гранулоцитопоэза под влиянием глюкуроновой кислоты начинались раньше (см. табл.2). Увеличение содержания незрелых форм нейтрофильных лейкоцитов предшествовало восстановлению числа их зрелых форм (см. фиг. 1). Обращал на себя внимание тот факт, что содержание зрелых нейтрофильных лейкоцитов у животных получивших глюкуроновую кислоту, на 7, 8-е сут эксперимента также достоверно превышало их количество, у животных контрольной группы получавших циклофосфан (см.табл.1, рис.1).

Абсолютное количество клеточных элементов лимфоидного и эритроидного ростков кроветворения в соответствующие сроки исследования у мышей после введения глюкуроновой кислоты достоверно не отличалось от описанного у контрольных животных, получавших один цитостатик. Динамике восстановления костно-мозгового гранулоцитопоэза соответствовало и содержание зрелых форм нейтрофильных лейкоцитов в периферической крови (см.табл.3, фиг.2). При этом у мышей, получавших глюкуроновую кислоту, наблюдалось более интенсивное восстановление абсолютного числа палочко- и сегментоядерных форм нейтрофильных лейкоцитов. Так, с 5 по 8 сутки опыта включительно абсолютное содержание сегментоядерных форм нейтрофильных лейкоцитов у мышей на фоне введения глюкуроновой кислоты достоверно превышало их число в группе животных, получавших цитостатик. Максимальные различия в содержании палочко- и сегментоядерных нейтрофильных лейкоцитов наблюдались соответственно на 5 и 7-е сутки опыта (см.табл.3, 4, фиг.2). Абсолютное количество палочко- и сегментоядерных нейтрофилов у мышей, получивших глюкуроновую кислоту, в 6-9 раз превосходило их содержание в периферической крови у животных, получавших циклофосфан. Принципиальное значение имеет тот факт, что введение глюкуроновой кислоты оказывало выраженное влияние не только на динамику восстановления числа нейтрофильных лейкоцитов, но и моноцитов в периферической крови (см. табл. 3, 4, фиг.2). Если у мышей, получавших циклофосфан, абсолютное количество моноцитов периферической крови достигало нижних границ нормы лишь к концу периода наблюдений (10-е сут), то у животных на фоне сочетанного применения цитостатика и глюкуроновой кислоты уже к 7-м сут эксперимента наблюдалось развитие выраженного моноцитоза (см.фиг.2).

Изучение колоние- (КОЕ) и кластерообразующей (КлОЕ) способности костного мозга позволило прийти к выводу, что интенсивное восстановление грануло- (костный мозг, периферическая кровь) и моноцитопоэза (периферическая кровь) стоит в связи со стимуляцией глюкуроновой кислотой процессов пролиферации клеток-предшественников типа колониеобразующая единица гранулоцитарно-макрофагальная (КОЕ_гм), колониеобразующая единица гранулоцитарная (КОЕ_г), колониеобразующая единица макрофагальная (КОЕ_м), дающих при культивировании в плазменном сгустке начало соответственно колониям гранулоцитарно-макрофагального, гранулоцитарного и макрофагального типов (см.табл. 5, 6; фиг.3).

Таким образом, представленные данные убедительно свидетельствуют о наличии у глюкуроновой кислоты способности избирательно стимулировать процессы грануло-моноцитопоэза, подавленные цитостатиком.

Глюкуроновую кислоту планируется использовать в клиниках, применяющих противоопухолевые препараты с целью терапии цитостатических гемодепрессий.

Изобретение относится к медицине, касается средства, избирательно стимулирующего грануло-моноцитопоэз при гопоплазии костномозгового кроветворения, вызванного цитостатиком, и может быть использовано в клиниках, применяющих противоопухолевые препараты, с целью терапии цитостатистических гемодепрессий. Изобретение заключается в применении известного вещества глюкуроновой кислоты по новому назначению в качестве средства, избирательно стимулирующего грануломоноцитопоэз при гопоплазии костномозгового кроветворения, вызванного цитостатиком, с целью снижения токсического действия на гемопоэз цитостатиков за счет стимуляции грануломоноцитопоэза. 3 ил., 6 табл.

Применение глюкуроновой кислоты в качестве средства, стимулирующего грануломоноцитопоэз при гипоплазии костномозгового кроветворения, вызванного цитостатиком.