СРЕДСТВО ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЛИМФАТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ Российский патент 1994 года по МПК A61K49/00 

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностическим средствам, применяемым при диагностике и хирургическом лечении заболеваний лимфатической системы и позвоночника.

В связи с ростом количества заболеваний лимфатической системы, имеющих различную этиологию и, в частности онкологических, а также в связи с расширением практики хирургического лечения таких заболеваний весьма остро стоит вопрос о необходимости разработки новых препаратов, создающих контраст при рентгенографических исследованиях лимфатической системы и одновременно избирательно окрашивающих лимфатические протоки и узлы, что повышает эффективность хирургического вмешательства и серьезно облегчает работу хирурга.

Известно, что в качестве рентгеноконтрастного средства для лимфографии и миелографии применяется этиотраст (миодил), представляющий собой смесь изомерных этиловых эфиров йодфенилундекановой кислоты. Этот препарат пригоден исключительно для целей рентгенодиагностики, ибо обладает только рентгеноконтрастными свойствами, но не окрашен, поскольку не поглощает в видимой области спектра.

Известен, доступен и находит широкое применение препарат - хромолимфотраст, состоящий из жирорастворимой йодсодержащей основы - йодолипола с добавками двух красителей антрахинонового ряда: 1-бензоиламиноантрахинона и 1,4-диокси-5,8-ди(n-толуидино)антрахинона, взятых в равных количествах (по 0,0275 мас.%).

Указанный препарат, несмотря на свои достоинства, связанные с его способностью ярко окрашивать лимфатические сосуды и узлы, имеет существенные недостатки. Его применение, как и применение йодолипола, часто осложняется разрывами лимфатических путей, вызывает болевые ощущения, появление сыпи, покраснений и зуда. Препарат надолго (до полугода и более) задерживается в организме, где образует свинцовоподобные бляшки. Необходимо также отметить, что йодолипол не является индивидуальным веществом, а представляет собой смесь йодированных жирных кислот подсолнечного масла, что осложняет его стандартизацию и увеличивает вероятность побочного действия из-за недостаточной химической стабильности.

Значительно раньше, чем хромолимфотраст, были предложены и запатентованы рентгеноконтрастные средства, состоящие из этилового эфира 10-(n-йодфенил) ундекановой кислоты (миодила, этиотраста) и одного из окрашенных компонентов: 1,4-бис(n-толуидино)антрахинона, 1-окси-4-n-толуидиноантрахинона или металлической соли алканина. Важно отметить, что количество окрашенного компонента во всех случаях было равно 1 мас.% препарата.

Несмотря на исключительную важность диагностических препаратов этого класса, смеси этиотраста (миодила) с окрашенными веществами не нашли практического применения и лекарственные препараты на основе указанного патента не были созданы. По-видимому это обусловлено именно необходимостью введения в состав композиции окрашенного вещества в количестве 1%. Это естественно связано с недостаточно контрастной окраской лимфатических узлов и сосудов выбранными красящими веществами. По этой же причине указанные композиции рассматриваются только как рентгеноконтрастные средства, без указания на возможность их использования для визуализации деталей лимфатической системы при хирургических вмешательствах.

Как указывалось выше, этиотраст - бесцветный препарат и поэтому он не может быть использован с целью визуализации лимфатических узлов при хирургических операциях.

В виду того, что йодолипол разрешен лишь для рентгенографического исследования полостных органов (матка, бронхи), использование хромолимфотраста естественно ограничивается только целями визуализации лимфатических узлов при хирургических вмешательствах. Таким образом, в настоящее время отсутствуют препараты для комбинированной рентгенологической и визуальной диагностики заболеваний лимфатической системы, что обуславливается специфическими недостатками описанных композиций на основе йодолипола и этиотраста.

Целью изобретения является создание рентгеноконтрастного и визуализирующего, легко элиминирующего из организма, малотоксичного лекарственного диагностического средства с минимальным побочным действием, обеспечивающего возможность рентгенологического исследования с одновременным контрастным окрашиванием лимфатических сосудов и узлов в цвет, позволяющий уверенно отличать их от других тканей организма при проведении хирургического вмешательства (это средство условно названо хромэтиотрастом).

Указанная цель достигается использованием этиотраста (этилового эфира 10-(n-йодфенил)-ундекановой кислоты) в качестве основного рентгеноконтрастного компонента хромэтиотраста и 1-бензоиламиноантрахинона и 1,4-диокси-5,8-ди(n-толуидино) антрахинона в качестве окрашивающих компонентов и компонентов, ускоряющих процессы распределения и элиминации. Эти компоненты вводят в лекарственное средство в количестве 0,00020-0,00035 мас.%.

До настоящего времени указанные красители не использовались как ускорители процессов распределения и элиминации водонерастворимых рентгеноконтрастных препаратов. Равным образом не была исследована их совместимость с этиотрастом. Неожиданным фактом явилась также способность этиотраста удерживать указанные красители в пределах лимфоидной ткани. Поэтому существенные отличительные признаки и включают использование именно этих двух красителей из ряда антрахинона.

Верхний предел концентраций красителей обусловлен их малой растворимостью в этиотрасте, нижний предел - тем, что в соответствии с законом Бера, снижение концентрации красителей вызывает уменьшение интенсивности окраски препарата и соответственно лимфоидной ткани. Понижение концентрации красителей может компенсироваться в известной степени за счет увеличения вводимой дозы препарата, однако такое увеличение нежелательно ввиду повышения вероятности побочных эффектов, характерных для самого этиотраста, являющегося основой предлагаемого препарата - хромэтиотраста. Кроме того, снижение концентрации красителей неизбежно сопровождается уменьшением положительного их влияния на процессы распределения и элиминации препарата.

Хромэтиотраст был исследован в качестве диагностического рентгеноконтрастного и визуализирующего лекарственного средства в эксперименте. Кроме того, было проведено изучение его токсичности, стабильности и фармакокинетики.

Инструктивные материалы по применению хромолимфотраста ограничивают его использование только целями визуализации лимфатических узлов при хирургических вмешательствах. Это вызвано тем, что его применение может осложняться разрывами лимфатических путей. Ввиду этого препарат приходится вводить в малых дозах, не обеспечивающих контрастирование при рентгенологических исследованиях.

Таким образом, исследования ограничились сравнением в эксперименте хромэтиотраста и этиотраста по скорости процессов распределения и элиминации, степени контрастирования и токсичности.

Исследования на кроликах породы "Шиншилла" показали, что препарат с содержанием каждого из красителей, лежащих в пределах 0,020-0,035 мас.%, обладает высокими рентгеноконтрастными свойствами, позволяет исследовать лимфатические узлы и сосуды вплоть до места впадения грудного лимфатического протока. Лимфатические узлы окрашиваются в изумрудно-зеленый цвет, что делает их хорошо видимыми при обычном свете в ходе оперативных вмешательств, при этом препарат не окрашивает окружающие ткани.

Препарат вводили в дозе 0,2 мг/кг массы. При введении в этой же дозе этиотраста было проведено сравнение скоростей распределения и элиминации. Было обнаружено, что хромэтиотраст в сравнении с этиотрастом в значительном числе случаев уже через 30 мин после введения не содержится в приводящих лимфатических сосудах. По степени контрастирования лимфоузлов хромэтиотраст и этиострат не отличались друг от друга. Красители хорошо удерживаются в пределах лимфатической системы и не окрашивают окружающие ткани. Элиминация хромэтиотраста из лимфатической системы осуществляется в течение 30 сут., в то время как хромолимфотраст удерживается в лимфатической системе до полугода. Олеопневмонии, связанные с введением хромэтиотраста, как и в случае этиотраста не являются ярко выраженными и, как правило, проходят самостоятельно. Было показано, что острая токсичность этиотраста незначительно превышает острую токсичность хромэтиотраста. По хронической токсичности оба препарата не отличались друг от друга.

П р и м е р 1. 0,0205 г 1-бензоиламиноантрахинона и 0,0205 г 1,4-диокси-5,8-ди(n-толуидино)антрахинона растирали в ступке с несколькими каплями этиотраста до получения однородной пасты. Затем полученную пасту смывали со ступки небольшим количеством этиотраста в коническую колбу с мешалкой. Доводили массу суспензии этиотрастом до 100,0 г, при перемешивании нагревали ее на водяной бане до температуры 70-80^оС и выдерживали до полного растворения красителей. Раствор фильтровали, разливали в ампулы и стерилизовали при 120^оС в течение 20 мин.

С использованием приготовленного препарата проводили сравнительное рентгенологическое исследование лимфатической системы кроликов породы "Шиншилла". После введения хромэтиотраста в лимфатические сосуды задних конечностей в дозе 0,2 мл/кг массы кролика рентгенограммы снимали через 30 мин, 3 ч, 1,2,7,14 сут и 30 сут. Уже через 30 мин в приводящих лимфатических сосудах подколенных лимфатических узлов видны лишь следы рентгеноконтрастного средства. Подколенные лимфатические узлы гомогенно контрастированы, имеют четкие контуры. Парааортальные лимфатические узлы на рентгенограммах имеют гомогенную структуру, четкие границы, хорошую плотность контрастирования.

Через 3 ч после введения хромэтиотраста структура подколенных лимфатических узлов становится менее гомогенной и приобретает вид равномерной зернистости. Парааортальные лимфатические узлы гомогенно контрастированы.

Через сутки подколенные и парааортальные лимфатические узлы имеют мелкозернистую структуру и хорошую плотность контрастирования. На вскрытии лимфатические узлы окрашены в изумрудный цвет, окрашивание других тканей и органов не наблюдается. Через двое суток плотность контрастирования подколенных и парааортальных лимфатических узлов снижается, однако остается вполне удовлетворительной, сохраняется мелкозернистость их структуры. На вскрытии окрашивание органов и тканей не лимфоидной природы не выявляется, только лимфатические узлы сохраняют зеленый цвет. Через неделю на рентгенограммах обнаруживается низкая плотность контрастирования лимфатических узлов.

Через 14 сут на рентгенограммах в лимфатических узлах видны лишь следы хромэтиотраста в виде единичных крупных капелек и мелкозернистых вкраплений.

На вскрытии через 30 сут в лимфатических узлах видны вкрапления рентгеноконтрастного средства ярко-зеленого цвета. Окрашивание тканей и органов не выявлено.

Таким образом, данные рентгенологического исследования показали, что хромэтиотраст позволяет контрастировать лимфатические сосуды и лимфатические узлы, выявлять структуру лимфатических узлов, обеспечивая при этом высокую плотность контрастирования.

Хромэтиотраст довольно быстро выводится из сосудов: основное количество из приводящих лимфатических сосудов подколенных лимфатических узлов уходит через 25-30 мин через 3 ч лимфатические сосуды свободны от хромэтиотраста. Лимфатические узлы лучше всего контрастированы в течение двух суток.

П р и м е р 2. По технологии, описанной в примере 1, приготовили 100,0 г хромэтиотраста с содержанием красителей по 0,0345 г каждого.

Изучали острую токсичность на беспородных мышах и крысах при внутрибрюшинном введении. Наблюдение за животными осуществляли в течение двух недель. ЛД₅₀ хромэтиотраста (внутрибрюшинное введение, 50 животных) составила 1,46 мл/кг для мышей и 6,80 мл/кг для крыс. Следует отметить, что острая токсичность этиотраста оказалась несколько выше и составила для мышей 1,3 мл/кг.

Хроническую токсичность изучали на кроликах породы "Шиншилла" при эндолимфатическом введении препарата животным в дозе 0,2 мл/кг. Исследования проводили в сравнении с этиотрастом. Установлено, что хромэтиотраст, как и этиотраст, практически безвреден, не обладает аллергизирующим действием (см. табл. 1,2,3,4).

Исследования системы гемостаза показали, что хромэтиотраст аналогично этиотрасту практически не имеет противопоказаний (см. табл. 5,6).

Кроме того, изучение цитогенетического эффекта хромэтиотраста показало, что препарат в используемых концентрациях практически не подавляет митотическую активность лимфоцитов периферической крови в культуре и не вызывает никаких структурных повреждений (см. табл.7).

П р и м е р 3. Приготовили образцы хромэтиотраста по технологии, описанной в примере 1. Совместимость ингредиентов, входящих в состав хромэтиотраста, была проведена согласно Инструкции И-42-2-82.

Стабильность и сохраняемость йодсодержащего компонента (этиотраста) в составе хромэтиотраста в процессе технологической обработки и последующего хранения изучали, контролируя содержание органически связанного йода. Сохраняемость красителей контролировали путем непосредственного определения их содержания в хромэтиотрасте спектрофотометрическим методом без предварительного их выделения и разделения.

Качество хромэтиотраста в процессе технологической обработки и последующего хранения контролировалось по содержанию органически связанного йода, числу омыления, кислотному числу и содержанию красителей. Методика количественного определения и идентификации красителей основана на измерении оптической плотности раствора хромэтиотраста в смеси хлороформе и 95% -ного спирта (16:84) при двух длинах волн (414 и 647 нм). При длине волны 414 нм наблюдается суммарное поглощение света обоими красителями (Е₁₍₄₁₄₎ = Е₂₍₄₁₄₎ = 195,15). При длине волны 647 нм поглощает только 1,4-диокси-5,8-ди(n-толуидино)антрахинон (Е₂₍₆₄₇) = 473,49).

Результаты проверки качества хромэтиотраста представлены в табл.8. Из данных табл.8 видно, что этиотраст, 1,4-диоксит-5,8-ди(n-толуидино)антрахинона и 1-бензоиламиноатрахинон совместимы друг с другом. Методом "ускоренного старения" установлена стабильность препарата в течение двух лет.

Таким образом, предлагаемое средство является перспективным и удобным для работы с ним в такой важной области медицины, как диагностика и хирургическое лечение заболеваний лимфатической системы и позвоночника.

Использование: в медицине. Цель - увеличение скорости распределения и облегчение элиминации. Данное изобретение касается нового средства для рентгенологической и визуальной диагностики заболеваний лимфатической и визуальной диагностики заболеваний лимфатической системы, которое представляет собой смесь красителей 1-бензоиламиноантрахинона и 1,4-диокси-5,8-ди(n-толуидино)-антрахинона в количестве 0,020 - 0,035 мас.% каждого, растворенных в этиловом эфире 10-(n-йодфенил)ундекановой кислоты(этиотрасте). Положительный эффект : полученное средство является безопасным и в перспективе может найти широкое применение в диагностике и хирургическом лечении заболеваний лифматической системы. 8 табл.

СРЕДСТВО ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЛИМФАТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЫ, содержащее этиотраст, отличающееся тем, что, с целью увеличения скорости распределения по лимфатической системе и облегчения элиминации, средство дополнительно содержит 1-бензоиламиноантрахинон и 1,4-диокси-5,8-ди(п-толуидино)антрахинон при следующем содержании компонентов, мас.%:
1-Бензоиламиноантрахинон 0,020 - 0,035
1,4-Диокси-5,8-ди(п-толуидано)антрахинон 0,020 - 0,035
Этиотраст Остальное