СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНОГО КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА, ИНДУЦИРОВАННОГО В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 1994 года по МПК A61K31/41 

Изобретение относится к медицине, конкретно к экспериментальной вирусологии, и может быть использовано в научных исследованиях, касающихся экспериментального клещевого энцефалита, для изучения патогенеза инфекции, длительности вирусемии, органотропности штаммов вируса.

Известно противовирусное средство тилорон-2,7-бис-2(диэтиламиноэтокси)-9-флуоренон, обладающее профилактическим действием в отношении вируса клещевого энцефалита [1].

Однако данное средство не оказывает лечебного действия при уже развившейся инфекции (табл. 1) и обладает недостаточно высокой профилактической активностью.

Целью изобретения является выявление средства, обладающего лечебным эффектом, и повышение его профилактической активности при клещевом энцефалите. Указанная цель достигается тем, что в качестве противовирусного средства применяют 4-йодантипирин.

Структура 4-йодантипирина описана [2]. По нашим неопубликованным данным он обладает противовоспалительным действием и является индуктором образования видонеспецифических антивирусных ингибиторов.

Применение 4-йодантипирина по новому назначению стало возможным благодаря выявлению у него новых противовирусных свойств.

Данные свойства 4-йодантипирина в литературе не описаны.

В эксперименте на животных 4-йодантипирин показал выраженную лечебную и профилактическую активность при экспериментальном вирусном клещевом энцефалите.

Противовирусная активность 4-йодантипирина изучена на биологической модели клещевого энцефалита с помощью общепринятых методик [1, 3-5].

Определение ЛД₅₀ и максимальной переносимой дозы (МПД) для безлинейных белых мышей массой 10-12 г проводили путем введения в объеме 0,2 мл/мышь различных доз исследуемого вещества (от 125 до 2000 мг/кг) на 1% крахмальном геле, приготовленном на дистиллированной воде; для каждой из испытуемых доз использовали 5 мышей. Пути введения: а) через зонд в желудок, б) внутрибрюшинно. Наблюдение за животными - 14 сут. За МПД испытуемого соединения принимали наибольшее его количество, которое не вызывало гибели животных в течение срока наблюдения. ЛД₅₀ - доза вещества, вызывающая летательность 50% животных.

Определение противовирусной активности 4-йодантипирина проводили на безлинейных белых мышах массой 10-12 г, которых инфицировали однократно подкожно вирусом клещевого энцефалита (КЭ), штамм Абсеттаров, в количестве 10 ЛД ₅₀ в объеме 0,2 мл. Титр вируса был равен 6,6 lg ЛД₅₀/0,2 мл при подкожном введении мышам (10-12 г).

Проведено 3 серии испытаний противовирусной активности 4-йодантипирина: в I серии исследовали лечебно-профилактическое применение заявляемого соединения в сравнении с тилороном, который по данным литературы [1] обладает профилактической (но не лечебной) активностью на модели экспериментального клещевого энцефалита (табл. 1). В наших экспериментах тилорон растворяли в дистиллированной воде из расчета 1 мг в 0,2 мл (разовая доза per os на мышь массой 10-12 г), кратность введения тилорона: за 4 ч до заражения, через 4 ч после заражения, через 24 ч после заражения. Рабочее разведение 4-йодантипирина готовили на 1% крахмальном геле (с учетом возможного кумулятивного действия разовая доза была равна 0,1 МПД в объеме 0,2 мл), кратность внутрибрюшинного введения: за 4 ч до заражения, через 24 ч после заражения, затем по 1 разу в день в течение 7 дней.

II серия - исследование профилактического эффекта 4-йодантипирина в разовых дозах от 0,002 до 0,1 МПД при двукратном (за 24 ч и за 1 ч до заражения) внутрибрюшинном и внутрижелудочном (через рот) с помощью зонда введении (раздельные группы мышей).

III серия - исследование лечебного эффекта 4-йодантипирина (в тех же дозах, что в серии II) при 11-кратном (через 1 ч после заражения, затем 1 раз в день в течение 10 дней) внутрибрюшинном или внутрижелудочном введении (раздельные группы).

Все серии опытов сопровождались контролями (группы неинфицированных мышей, которым вводили испытуемое соединение, а также группы инфицированных вирусом клещевого энцефалита мышей, не подвергавшихся лечебному или профилактическому воздействию 4-йодантипирина). В каждой серии опытов использовали от 60 до 165 мышей. Срок наблюдения за всеми животными 21 день.

Титры вируса вычисляли в lg ЛД₅₀/0,2 мл по методу Reed, Muench [6]. Оценку результатов проводили по следующим показателям: 1) процент выживаемости мышей, 2) процент защиты животных от вирусной инфекции (разница в выживаемости между опытной и контрольной группами), 3) средняя продолжительность жизни в сутках, 4) величина химиотерапевтического индекса (ХТИ), вычисляемая как отношение МПД к ЭД₅₀ (эффективной дозе), вызывающей защиту у 50% животных), руководствуясь методами, описанными В.И. Ильенко [7], А.С. Галабовым и Г. А. Галеговым [4]. Достоверность различий оценивали по В.Ю. Урбаху [8].

В результате проведенных испытаний установлено, что при внутрижелудочном и при внутрибрюшинном введении 4-йодантипирина величина ЛД₅₀ равна 1000 мг/кг, МПД - 500 мг/кг.

Комбинированое лечебно-профилактическое применение 4-йодантипирина (I серия испытания) при экспериментальной инфекции у мышей, вызванной 10 ЛД₅₀ вируса клещевого энцефалита, выявило (табл. 2) защитный противовирусный эффект в 43,7%, как у испытуемого соединения, так и тилорона, взятого в качестве эталона. Показатель средней продолжительности жизни в группе животных, получавших 4-йодантипирин (14 сут) выше, чем в группе с тилороном (10,8 сут).

Поскольку тилорон, по данным литературам (табл. 1), обладает только профилактическим действием, во II серии испытаний 4-йодантипирина исследована только его профилактическая активность. Установлено, что 4-йодантипирин при двукратном введении через рот или внутрибрюшинно проявляет дозозависимый защитный противовирусный эффект, который от дозы 50 мг/кг составляет 47% (табл. 3).

Для оценки лечебной эффективности 4-йодантипирина препарат ежедневно вводили через рот или внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг в течение 11 дней после инфицирования животных 10 ЛД₅₀ вируса клещевого энцефалита. Обнаружен при введении заявляемого соединения через рот достоверный (Р < 0,05) противовирусный защитный эффект в 60% (табл. 4). При парэнтеральном введении достоверный (Р < 0,05) защитный эффект составляет 53,4%. Показатели средней продолжительности жизни были соответственно 15,5 и 13,0 суток.

В контрольной группе животных (без введения 4-йодантипирина) при 100% смертности животных средняя продолжительность жизни была 9,8 сут.

ЭД₅₀ 4-йодантипирина при лечебном применении (определена по методу [9] ) составляет 32,5 мг/кг, МПД, как было отмечено ранее, равна 500 мг/кг. Следовательно, химиотерапевтический индекс 4-йодантипирина по формуле ХТИ = МПД/ЭД₅₀ составляет 15.

Таким образом, 4-йодантипирин обладает достоверным профилактическим и лечебным действием на модели вирусного клещевого энцефалита. По профилактической активности он превосходит эталонный препарат тилорон (защитный эффект у обоих соединений примерно равен, но средняя продолжительность жизни животных, получавших 4-йодантипирин, больше). Наиболее важный эффект заявляемого соединения, не имеющего в этом отношении аналогов, высокая лечебная активность. В дозе 50 мг/кг при ежедневном введении мышам через рот в течение 11 дней после инфициования животных 10 ЛД₅₀ вируса клещевого энцефалита 4-йодантипирин обеспечил защиту 60% животных при средней продолжительности жизни 15,5 сут. В контрольных группах (без применения 4-йодантипирина) гибель животных составила от 90,3 до 100%, при средней продолжительности жизни от 7,06 до 9,8 сут.

Таким образом, впервые выявлен препарат, обладающий значительным лечебным действием при экспериментальном вирусном клещевом энцефалите. По профилактической активности он превосходит прототип - тилорон.

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной вирусологии, и может быть использовано в научных исследованиях, касающихся экспериментального клещевого энцефалита для изучения патогенеза инфекции, длительности вирусемии, органотропности штаммов вируса. Для получения лечебного эффекта и повышения профилактической активности при клещевом энцефалите вводят 4-йодантипирин в качестве противовирусного средства. 4 табл.

Применение 4-йодантипирина для лечения и профилактики вирусного клещевого энцефалита, индуцированного в эксперименте.