СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕМОСОРБЕНТА Российский патент 1995 года по МПК A61M1/36 

Изобретение относится к биохимии, в частности к способу получения селективных сорбентов, оно может быть использовано в медицине для экстракорпоральной детоксикации - гемосорбции, лимфосорбции и плазмосорбции.

Известен способ получения активированного угля на основе природного сырья (см. В.В.Стрелко и др. "Структурно сорбционные свойства активированных углей КАУ медицинского назначения". ж. - Прикладная химия N 6, с. 1225-1230, 1984).

Недостатком известного способа получения сорбента является отсутствие селективности к поглощению активных радикалов.

Наиболее близкий к предлагаемому способ получения активированного угля сферической грануляции на основе азотсодержащего полимера. Известный способ не позволяет получать угли с высокой антирадикальной активностью.

Цель изобретения - повышение емкости сорбента к поглощению активных радикалов.

Поставленная цель достигается тем, что уголь сферической грануляции модифицируют смесью монохлоруксусной кислоты и метил-п-толуолсульфонат-N-циклогексил-N'-(2-морфолинил-4-этил)карбодиимида в эквивалентных количествах с последующим химическим связыванием глутатиона.

Сущность способа в том, что глутатионтрипептид, являющийся биоантиоксидантом, ковалентно связывается с поверхностью угля методом алнилирования, являясь лигандом, он поглощает активные радикалы, что придает сорбенту антирадикальную активность.

П р и м е р 1. К 1 г активированного угля сферической грануляции добавляют 8 мл изопропилового спирта, содержащего 0,4 г монохлоруксусной кислоты, затем прибавляют раствор эквивалентного количества 1,6 г метил-п-толуолсульфонат-N-циклогексил-N'-(2- морфолинил-4-этил)карбодиимида в 10 мл изопропилового спирта. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, после чего адсорбент промывают трижды по 40 мл дистиллированной водой.

К 1 г модифицированного угля приливают 6 мл дистиллированной воды, содержащей 50 мг глутатиона. Смесь инкубируют при комнатной температуре 12 ч, после чего сорбент отмывают дистиллированной водой. Концентрация активных центров поглощения радикалов составляет 24 мг на 1 г сорбента. Кратность ингибирования радикалов в реакции Фентона 3,2.

П р и м е р 2. Способ получения сорбента осуществляют, как в примере 1, только для модифицирования используют 0,4 г монохлоруксусной кислоты и 1,92 метил-п-толуолсульфонат-N-циклогексил-N'-(2-морфоли- нил-4-этил) карбодиимида. Концентрация активных центров поглощения радикалов составляет 24 мг на 1 г сорбента, а кратность ингибирования радикалов в реакции Фентона 3,2.

П р и м е р 3. Способ получения сорбента осуществляют, как в примере 1, только для модифицирования используют 0,4 г монохлоруксусной кислоты и 1,0 г метил-п-толуолсульфонат-N- циклогексил-N'-(2-морфолинил-4-этил) карбодиимида. Концент- рация активных центров поглощения радикалов составляет 18 мг/г сорбента, а кратность ингибирования радикалов в реакции Фентона 2,4.

П р и м е р 4. Способ получения сорбента осуществляют, как в примере 1, только для модифицирования используют 0,6 г монохлоруксусной кислоты и 1,6 г метил-п-толуолсульфонат-N-циклогексил-N'-(2-морфоли- нил-4-этил) карбодиимида. Концентрация активных центров поглощения радикалов составляет 23 мг/г сорбента, а кратность ингибирования радикалов в реакции Фентона 3,1.

П р и м е р 5. Способ получения сорбента осуществляют как в примере 1, только для модифицирования используют 0,2 г монохлоруксусной кислоты и 1,6 г метил-п-толуолсульфонат-N- циклогексил-N'-(2-морфолинил-4-этил) карбодиимида. Концентра- ция активных центров поглощения радикалов составляет 15 мг/г сорбента, а кратность ингибирования радикалов в реакции Фентона 2,1.

Известные активированные угли и полученные по предлагаемому способу исследовали на концентрацию активных центров поглощения гидроксильных радикалов. Инициирование образования гидроксильных радикалов проводили в системе Фентона, в которой протекает реакция по схеме Fe⁺² + H₂O₂ ->> Fe⁺³ + OH + OH^- (см. Ю.А.Владимиров, А.И.Арчаков "Перекисное окисление липидов в биологических мембранах", М., Наука, 1972). Количество активных противорадикальных центров на сорбентах определяли в реакции гидроксилирования анилина до n-аминофенола в системе Фентона. В данной реакции образуется окрашенный комплекс, концентрация которого определяется спектрофотометрически.

Результаты представлены в таблице. Гидроксильный радикал является одной из активных форм кислорода и образуется в крови при усилении патологии (усиление перекисного окисления липидов) и чрезвычайно активно воздействует на белки крови, приводя к их деструкции. Поэтому гидроксильный радикал является токсическим метаболитом, который необходимо удалять из крови для предупреждения спонтанного радикалообразования.

Осуществлена проверка противорадикальной активности сорбентов при воздействии их на человеческую сыворотку в процессе усиления перекисного окисления липидов. Антирадикальный эффект воздействия активированных углей на сыворотку крови определили по степени снижения концентрации продукта липопероксидации - малонового альдегида (МДА) по известному методу (см. О.К.Колесова и др. "Перекисное окисление липидов и методы определения продуктов липопероксидации в биологических средах". - Лаб. дело N 9, 1984, с. 540). В отличие от прототипа по предлагаемому способу предусмотрен модифицирование активированного угля смесью монохлоруксусной кислоты и метил-п-толуолсульфонат-N-циклогексил-N'-(2- морфолинил-4-этил) карбодиимида в эквивалентных количествах с последующим химическим связыванием глутатиона.

Как видно из таблицы, в отличие от прототипа сорбенты, полученные по предлагаемому способу, обладают более чем в 200 раз большей противорадикальной активностью, кратность ингибирования в реакции Фентона составляет 3,2, кроме того, сорбенты снижают в 2 раза уровень липопероксидации в сыворотке крови, приводя его к физиологической норме. Из таблицы также видно, что наибольшую противорадикальную активность имеют образцы угля, полученные модифицированием носителя смесью монохлоруксусной кислоты и карбодиимида, взятых в эквивалентных количествах. При увеличении концентрации карбодиимида противорадикальная активность сорбента не возрастает, тогда как уменьшение ее концентрации приводит к снижению активности сорбента.

Доказательство существенных отличий. В патентной и научно-технической литературе описан способ получения активированного угля (ж. Прикладная химия, N 6, с. 1225-1230, 1984). Но неизвестен способ получения сорбента путем модифицирования активированного угля смесью монохлоруксусной кислоты и метил-п-толуолсульфонат-N-циклогексил-N'-(2-морфолинил- 4-этил) карбодиимида с последующим связыванием глутатиона.

Использование предлагаемого способа дает возможность повысить эффективность лечебных мероприятий при экстракорпоральной детоксикации-гемосорбции, лимфосорбции и плазмосорбции больных, подвергшихся радиационному облучению, интоксикациям различными химическими соединениями.

Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения - повышение емкости сорбента к поглощению активных радикалов. Сущность изобретения заключается в том, что глутатионтрипептид, являющийся биоантиоксидантом, ковалентно связывается с поверхностью угля методом алкилирования, являясь лигандом, он поглощает активные радикалы, что придает сорбенту антирадикальную активность. Уголь сферической грануляции модифицируют смесью монохлоруксусной кислоты и метил-n- толуолсульфонат -N-циклогексил-N'- (2-морфолинин-4-этил) карбодиимида в эквивалентных количествах с последующим химическим связыванием глутатиона. 1 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕМОСОРБЕНТА путем отмывки активированного угля сферической грануляции, отличающийся тем, что, с целью повышения емкости сорбента для поглощения активных радикалов, активированный уголь перед отмывкой дополнительно обрабатывают смесью монохлоруксусной кислоты и метил-n-толуолсульфонат- N-циклогексил-N' -(2-морфолинил-4-этил)-карбодиимида, взятых в эквивалентных количествах, с последующей инкубацией в присутствии глютатиона.