СПОСОБ ПРЕДОПЕРАЦИОННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОМУТНЕНИЯ ЗАДНЕЙ КАПСУЛЫ ХРУСТАЛИКА ПРИ ЭКСТРАКЦИИ КАТАРАКТЫ Российский патент 1995 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунодиагностике, и может быть применено в офтальмологии.

Существующие офтальмологические методы обследования больных не позволяют диагностировать фиброз задней капсулы хрусталика на дооперационном этапе, вследствие непрозрачности самого хрусталика (наличие катаракты).

После проведения экстракции катаракты операция в ряде случаев не дает высоких визуальных результатов в связи с фиброзом задней капсулы (ЗК), существующем еще на дооперационном этапе. Вследствие этого таким больным необходима повторная операция - дисцизия задней капсулы.

Биохимическая структура задней капсулы хрусталика включает в себя наряду с другими соединительнотканными элементами и коллаген III типа, и мукополисахарид - гиалуроновую кислоту. (Л.Йегер "Клиническая иммунология и аллергология", М., "Медицина", 1990 г., т. 3 - 527 с.; В.В.Серов, А.Б.Шехтер "Соединительная ткань", М., "Медицина", 1981 г. - 312 с.).

В патологических процессах, индуцирующих помутнение хрусталика и фиброз его задней капсулы, принимают участие иммунологические механизмы. Капсула хрусталика является защитным барьером, препятствующим выходу антигенов их хрусталика. Однако с возрастом и при наличии патологического процесса в соединительной ткани глаза, происходит трансформация соединительнотканных структур: они приобретают антигенные свойства и вызывают образование антител (С.Н. Федоров, А.Ф. Панасюк, Е.В. Ларионов и др. "Аутоиммунная концепция катарактогенеза". - "Офтальмохирургия", 1989 г., N 1-2, с. 4-6).

Целью изобретения является иммунодиагностика фиброза ЗК хрусталика при катаракте на дооперационном этапе.

Поставленная цель достигается тем, что определяют уровень антител к коллагену III типа и к гиалуроновой кислоте, и при одновременном возрастании обеих величин по крайней мере на 30%, делают вывод о возможности наличия помутнения задней капсулы хрусталика.

Предложенный способ реализуется следующим образом.

Диагноз возрастной катаракты ставится на основании комплексного клинико-инструментального обследования больных.

1. Получение сыворотки. У больного берут кровь, 10 мл цельной крови помещают на 2 ч в термостат при 37^оС для образования кровяного сгустка. Для ретракции сгусток обводят стеклянной палочкой и помещают на 12 ч в холодильник при температуре 4^оС. Сыворотку сливают в центрифужную пробирку и 20 мин центрифугируют при 3000 об/мин для освобождения от свободных единичных эритроцитов. Сыворотку хранят при температуре -30^оС.

2. Подготовка антигенов (коллагена III типа и гиалуроновой кислоты) к постановке иммуноферментного метода.

Коммерческие препараты коллагена III типа и гиалуроновой кислоты разводят покрывающим буфером рН 7,5, содержащим 7 мМ СН₃СООН, 7 мМ К₂НРО₄, 0,17 М NaCl до конечной концентрации 50 мкг/мл.

3. Постановка иммуноферментного метода определения специфических антител к коллагену III типа и гиалуроновой кислоте.

Во все лунки полистиролового планшета для ИФА (фирмы "Лайнотек", ФРГ) вносят по 100 мкл предварительно разведенного антигена и инкубируют при температуре 37^оС в течение 18 ч. При этих условиях происходит оптимальное свертывание антигена с полистироловой поверхностью планшета.

После инкубации раствор антигена удаляют из всех лунок и вносят 100 мкл 1% -ного раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА) на 0,01М карбонат-бикарбонатном буфере рН 9,6. БСА блокирует свободные места связывания на полистироле.

После инкубации в течение 30 мин при 37^оС удаляют раствор БСА и трижды по 3 мин промывают все лунки забуферным физиологическим раствором (ЗФР) с добавлением детергента Твин-20 (0,05%).

Затем в лунки вносят исследуемую сыворотку в рабочем разведении 1:100. Планшет инкубируют в течение 1 ч при 37^оС, после чего проводят трехкратную отмывку по 3 мин ЗФР с 0,05% Твин-20, используя автоматическое устройство фирмы "Дайнотек" (ФРГ). Во все лунки планшета вносят диагностические антитела против иммуноглобулинов человека меченые пероксидазой производства НИИЭМИ им. Гамалеи (иммунопероксидазный конъюгат-ИПК). ИПК вносят по 0,1 мл в рабочем разведении, что определено экспериментальным путем. После инкубации (30 мин при 37^оС) ИПК удаляют и промывают все лунки трижды по 3 мин ЗФР с 0,05% Твин-20. Во все лунки планшета вносят 0,1 мл субстрат ортофенилендиамина (3 мг ОФДА и 0,005 мл 30%-ного Н₂О₂ на 10 мл натрий-цитратного буфера рН 4,9) по 0,1 мл. Окраска в контрольных лунках с донорскими сыворотками и в лунках контроля конъюгата не развилась. В опытных лунках при наличии специфических антител развивается красно-оранжевое окрашивание, интенсивность которого возрастала пропорционально количеству этих антител.

Результаты учитывали на спектрофотометре с вертикальным лучом (Миниредер II Дайнотек, ФРГ) при длине волны 490 нМ.

П р и м е р 1 (см.таблицу).

Клинический пример 2. Больной Семенов И.М., 65 лет, И.Б. N5781, находился на стационарном лечении в Волгоградском филиале по поводу:
ОД - перезрелая возрастная катаракта,
OS - незрелая возрастная катаpакта, макулодистрофия.

Острота зрения: ОД - светоощущение с правильной проекцией
OS - 0,2 н/к
ВГД: ОД = 23, OS = 21.

Объективно:
ОД - роговица прозрачна, радужка субатрофична, хрусталик интенсивно мутный. Глазное дно не офтальмоскопируется.

OS - роговица прозрачна. Начальные помутнения хрусталика. ДЗН розовый, границы четкие, в макулярной области дегенеративные очаги. 18.05.1989 г. Операция ЭКК на ОД - без осложнений. Послеоперационный период без особенностей. 09.06.89. Острота зрения правого глаза = 0,1 с коррекцией сфера + 10,0 Дптр. = 0,7
Клинический пример N 3. Больная Молодецкая К.И., 69 лет, И.Б. N 6041, находилась на стационарном лечении в Волгоградском филиале МНТК "Микрохирургия глаза" по поводу:
ОД - афакия ОД (криоэкстракция катаракты в 1987 году).

OS - зрелая возрастная катаракта.

Острота зрения ОД - 0,01 с коррекцией + 13,0 Дптр. = 0,8
OS - светоощущение с правильной проекцией.

ВГД: ОД = 22, OS = 22.

Объективно:
ОД - роговица прозрачна, в области зрачка и в передней камере и волокна стекловидного тела, ДЗН розовый, границы четкие, сосуды склеротизированы.

OS - роговица прозрачная, субатрофия радужки, хрусталик мутный, глазное дно не офтальмоскопируется.

22.05.1989 г. Операция ЭЭК на OS - без осложнений. После операции обнаружен фиброз задней капсулы хрусталика. Послеоперационный период - без особенностей.

13.06.89 г. Острота зрения левого глаза - 0,05 с коррекцией +11,0 Дптр. = 0,4.

После проведения операции экстракция катаракты фиброз ЗК отмечается у 7,9% больных (Н.Ф.Пашинова, Н.Н.Пивоваров и др. "Амбулаторная хирургия катаракты", ж. - "Офтальмохирургия", 1989 г, N 1-2, с. 7-9).

Предложенный способ прошел аппробацию в Волгоградском филиале МНТК "Микрохирургия глаза" с 20.03.1989 г. по 24.11.89 г. Было обследовано 73 пациента с катарактой. У 11 пациентов согласно изменениям в крови было основание предполагать помутнение ЗК хрусталика. После операции экстракции катаракты у 12 пациентов было обнаружено помутнение ЗК хрусталика (11 из них соответствуют прогнозу; у 12-го помутнение ЗК хрусталика прогнозировано не было). Таким образом, достоверность предлагаемого способа диагностики помутнения ЗК хрусталика составляет 91,7%.

Использование данного способа позволяет прогнозировать один из этапов операции: "отскабливание" передних слоев задней капсулы хрусталика, чтобы в достаточной мере удалить те элементы, которые впоследствии подвергаются перерождению, что сокращает вероятность образования вторичных катаракт.

Использование: медицина, офтальмология. Сущность изобретения: определяют уровень антител к коллагену III типа и к гиалуроновой кислоте и, при одновременном возрастании обеих величин на 30%, определяют помутнения задней капсулы хрусталика. Предлагаемый способ позволяет избежать повторной операции.

СПОСОБ ПРЕДОПЕРАЦИОННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОМУТНЕНИЯ ЗАДНЕЙ КАПСУЛЫ ХРУСТАЛИКА ПРИ ЭКСТРАКЦИИ КАТАРАКТЫ путем определения содержания антител к коллагену III типа и к гиалуроновой кислоте в сыворотке крови и при одновременном увеличении их содержания на 30% определяют помутнение задней капсулы хрусталика.