СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ВОЗНИКНОВЕНИЯ ВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ РЕАКЦИИ ПРИ ЭКСТРАКЦИИ КАТАРАКТЫ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунодиагностике, и может быть использовано в офтальмологии.

Известен способ диагностики степени послеоперационной воспалительной реакции при экстракции катаракты (автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Веселовской З.Ф. Прогнозирование и предупреждение развития воспалительной реакции глаза после экстракции катаракты с имплантацией искусственного хрусталика, Одесса, 1989), заключающийся в проведении анализа крови до операции, при котором определяют из иммунологических показателей общее количество Т и В лимфоцитов, активность естественных киллерных клеток периферической крови, уровень и динамику изменения иммуноглобулина E в плазме крови.

Недостатком этого способа является недостаточная точность определения вероятности возникновения послеоперационного воспаления при экстракции катаракты. Все определяемые при этом способе показатели крови относятся к общим показателям иммунного статуса, не являются специфичными для газа, т.е. не имеют к нему непосредственного отношения, и могут изменяться при многих заболеваниях (Клиническая иммунология и аллергология. Под ред. Йегера Л. в трех томах, Медицина, 1990). При наличии сопутствующих заболеваний возрастает погрешность прогнозирования воспалительной реакции глаза при экстракции катаракты. Помимо недостаточной точности определение показателей крови в известном способе очень трудоемкий процесс, требует выделения клеток, что невозможно без специальной аппаратуры и реактивов. К тому же процесс этот очень длительный, требует больших затрат времени с средств.

Цель изобретения точное прогнозирование возможности возникновения воспалительной реакции глаза при экстракции катаракты в послеопрерационном периоде, что достигается определением показателей крови, а именно уровней антител к коллагенам I и II типов.

При формировании катаракты происходит трансформация коллагеновых волокон, входящих в структуру тканей глаза, сенсибилизированного организма, которая приводит к развитию воспалительной реакции в послеопрерационном периоде. Поэтому определение специфических показателей, имеющих непосредственное отношение к структуре тканей глаза, повышает точность диагностики. Способ не требует специального оборудования и позволяет в короткий промежуток времени получить точные данные о степени выраженности послеоперационной воспалительной реакции.

Цель обеспечивается совокупностью существенных признаков предлагаемого способа, заключающегося в проведении анализа крови до операции, при исследовании которой определяют уровни антител к коллагенам I и II типов и при возрастании обоих величин свыше 40% делают вывод о степени выраженности воспалительного процесса в послеоперационном периоде.

Предлагаемый способ диагностики степени выраженности послеоперационной воспалительной реакции при экстракции катаракты реализуют следующим образом.

Производят забор крови у больного. Выявление в крови больных специфических антител к коллагену I и II типов на предоперационном этапе осуществляют иммуноферментным методом по известной методике с предварительным внесением в лунки полистироловых планшетов коллагена I или II типов. Получение сыворотки, 10 мл цельной крови, взятой у больного, помещают на два часа в термостат при 37^oC для образования кровяного сгустка. Для ретракции сгусток обводят стеклянной палочкой и помещают на 12 ч в холодильник при 4^oC. Сыворотку сливают в центрифужную пробирку и двадцать минут центрифугируют при 3000 об. /мин для освобождения от свободных единичных эритроцитов. Сыворотку хранят при температуре 30^oC. Подготовка антигенов (коллагенов I и II типов) к постановке иммуноферментного метода. Коммерческие препараты коллагенов I и II типов разводят покрывающим буфером pH 7,5, содержащим 1 M CH₃COOH, 1 M K₂HPO₄, 0,17 M NaCl до конечной концентрации 50 мкг/мл.

Постановка иммуноферментного метода определения специфических антител к коллагенам I и II типов.

Во все лунки полистиролового планшета для иммуноферментного метода (фирмы Дайнстек, ФРГ) вносят по 100 мкл предварительно разведенного антигена и инкубируют при температуре 37^oC в течение 18 ч. При этих условиях происходит оптимальное связывание антигена с полистироловой поверхностью планшета.

После инкубации раствор антигена удаляют из всех лунок и вносят 100 мкл 1% -ного раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА) на 0,01 М карбонат-бикарбонатном буфере pH 9,6. БСА блокирует свободные места связывания на полистироле.

После инкубации в течение 30 мин при 37^oC удаляют раствор БСА и трижды по 3 мин промывают все лунки забуферным физиологическим раствором (ЭФР) с добавлением детергента Твин-20 (0,05%).

Затем в лунки вносят исследуемую сыворотку в рабочем разведении 1:100. Планшет инкубируют в течение одного часа при 37^oC, после чего проводят троекратную отмывку по три минуты ЭФР с 0,05% Твин-20, используя автоматическое устройство фирмы Дайнотек (ФРГ). Во все лунки планшета вносят диагностические антитела против иммуноглобулинов человека меченные пероксидазой производства НИИЭМИ им. Гамалеи (иммунопероксидазный конъюгат- ИПК). ИПК вносят по 0,1 мл в рабочем разведении, что определено экспериментальным путем. После инкубации (тридцать минут при 37^oC) ИПК удаляют и промывают все лунки трижды по 3 мин ЗФР с 0,005 мл 30% H₂O₂ на 10 мл натрий-цитратного буфера (pH 4,9) по 0,1 мл. Окраска в контрольных лунках с донорскими сыворотками и в лунках контроля конъюгата не развилась. В опытных лунках при наличии специфических антител развивается красно-оранжевое окрашивание, интенсивность которого возрастала пропорционально количеству этих антител.

Результаты учитывали на спектрофотометре с вертикальным лучом (Миниредер II Дайнотек, ФРГ) при длине волны 490 НM.

Пример 1. Исследование антител к коллагену I и II типов у больных катарактой на дооперационном этапе.

Обследовано 30 здоровых людей (доноров) и 65 больных катарактой. Степень выраженности послеоперационной воспалительной реакции нами была условно разделена на 4 стадии: ареактивное течение, I стадия (легкая), II стадия (средняя) и III стадия (выраженная).

Результаты исследования представлены в таблице.

Клинический пример 2. Больной Поляков И.Н. 62 года, история болезни N 4970, поступил в Волгоградский филиал МНТК "Микрохирургия глаза" 09.05.89 г. на обследование.

Объективно:
Острота зрения правого глаза 0,02, не коррегирует.

Острота зрения левого глаза 0,8, не коррегирует.

Правый глаз передний отрезок без особенностей, хрусталик мутный, глазное дно не офтальмоскопируется.

Левый глаз передний отрезок без особенностей, начальные помутнения хрусталика, диск зрительного нерва розовый, границы четкие, макула без особенностей, начальная ангиопатия.

Диагноз: правый глаз возрастная катаракта; левый глаз начальная катаракта.

Сопутствующие заболевания: гипертоническая болезнь II ст.

10.05.89 на правом глазу произведена операция экстракапсулярная экстракция катаракты с имплантацией ИОЛ модели Т-26. Операция прошла без осложнений.

Перед операцией взята кровь из вены и проведено исследование по описанной выше технологии.

Результаты исследования: уровень антител к коллагену 1 типа составил 0,21; к коллагену II типа 0,08. Таким образом, уровень антител к коллагену I типа превышает норму на 1 92% уровень антител к коллагену II типа на 77%
В послеоперационном периоде у больного развилась выраженная воспалительная реакция правого глаза: отек роговицы 3 степени, десцеметит 3 степени, отек макулы, по поводу чего больной в течение 3 недель получал симптоматическую противовоспалительную терапию.

Осмотр 05.06.89: правый глаз спокоен, острота зрения 0,4, положение ИОЛ правильное.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунодиагностике, и может быть использовано в офтальмологии. Изобретение позволяет обеспечить точное прогнозирование возможности возникновения воспалительной реакции глаза при экстракции катаракты в послеоперационном периоде, что достигается определением показателей крови, а именно уровней антител к коллагенам 1 и II типов. Для реализации предлагаемого способа производят забор крови у больного. Выявление в крови больных специфических антител к коллагену 1 и II типов на предоперационном этапе осуществляют иммуноферментным методом по известной методике с предварительным внесением в лунки полистироловых планшетов коллагена 1 и II типов. 1 табл.

Способ прогнозирования возникновения воспалительной реакции при экстракции катаракты, включающий иммунологическое исследование крови до операции, отличающийся тем, что определяют уровни антител к коллагенам I и II типов и при возрастании обеих величин свыше 40% относительно нормы прогнозируют возникновение воспалительной реакции в послеоперационном периоде.