СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАТАЛАЗЫ ИЗ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА Российский патент 1995 года по МПК A61K35/18 C12N9/00 

Описание патента на изобретение RU2033170C1

Изобретение относится к технологии получения ферментов из сырья животного происхождения, в частности эритроцитов человека, и может быть использовано в фармацевтической промышленности и энзимологии.

Целью изобретения является интенсификация способа за счет сокращения числа и длительности операций.

Способ осуществляется следующим способом.

5 л эритроцитов донорской крови человека отмывают 0,85-1,0%-ным физиологическим раствором и центрифугируют 15 мин при 2500g, обрабатывают осадок эритроцитов равным объемом дистиллированной воды в течение 4 ч при температуре 4оС. Осаждение гемоглобина проводят обработкой гемолизата эритроцитов смесью пропанола-2 и хлороформа в соотношении 5:3 соответственно при непрерывном помешивании в течение 40-60 мин при температуре -4оС. Затем центрифугируют 15-20 мин при 2500g, удаляют осадок гемоглобина. К полученной надосадочной жидкости (рН 7-7,2) добавляют равный объем дистиллированной воды в соотношении 1: 1, смесь перемешивают в течение 30-40 мин и к ней добавляют сернокислый аммоний из расчета 535-540 г на 1 л экстракта при тщательном перемешивании до полного растворения сернокислого аммония при температуре 25оС.

Процесс высаливания целевого продукта с последующим формированием осадка фермента проводят в течение 10-12 ч при 4оС. Осадок фермента отделяют центрифугированием при 2000g в течение 20 мин, растворяют в 50-70 мл дистиллированной воды. Раствор фермента диализуют против дистиллированной воды в течение 24 ч, подвергают стерилизующей фильтрации через мембраны "Миллипор" с диаметром пор 0,2 мкм.

Целевой продукт лиофильно высушивают под вакуумом в присутствии стабилизатора сахарозы в концентрации 0,5% в течение 42 ч.

Молекулярная масса каталазы 250000 Д, электрофоретическая чистота 98-99,9% удельная специфическая активность 35000-40000 Ед, выход 180-200 мг на 1 л эритроцитов крови.

Предложенный способ получения каталазы позволяет сократить число и длительность технологических операций с 8 сут по способу-прототипу до 3 сут 6 ч.

Похожие патенты RU2033170C1

название год авторы номер документа
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗЫ И КАТАЛАЗЫ ИЗ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА 1989
  • Свечникова Л.В.
  • Благородов С.Г.
  • Шепелев А.П.
  • Сазыкина О.В.
  • Дмитриева Н.А.
  • Кесельман Э.В.
  • Межова И.В.
RU2033169C1
СПОСОБ ЭКСТРАКЦИИ ФЕРМЕНТОВ ИЗ ЛИЗИРОВАННЫХ ЭРИТРОЦИТОВ 1992
  • Межова И.В.
  • Шепелев А.П.
  • Зеркина Е.В.
  • Межов В.Д.
RU2056850C1
Способ диагностики хронической внутриутробной гипоксии плода 1987
  • Дубинина Елена Ефимовна
  • Софронова Людмила Николаевна
  • Ефимова Лидия Федоровна
  • Сальникова Любовь Александровна
SU1651215A1
Способ определения объема эритроцитов в биологической ткани 1990
  • Малышев Вадим Геннадьевич
SU1727067A1
Способ дифференциальной диагностики гипертонической болезни и артериальной гипертензии, обусловленной хроническим пиелонефритом 1990
  • Кулагин Юлий Иванович
  • Сюрин Алексей Авраамович
  • Нескоромный Валерий Николаевич
  • Никонов Вадим Владимирович
SU1812497A1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ 1991
  • Стекольников Л.И.
  • Рыльцев В.В.
  • Виноградова М.Н.
  • Бычков Б.И.
RU2016899C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ МЕМБРАНОСВЯЗАННОЙ КАТАЛАЗЫ ЭРИТРОЦИТОВ 1992
  • Кашулина А.П.
  • Сотникова Е.Н.
  • Александрова Л.М.
RU2050004C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕМОГЛОБИНА 1996
  • Люблинский Станислав Людвигович[Ru]
  • Дзадзамия Руслан Гиглович[Ru]
  • Назаров Андрей Викторович[Ru]
  • Гобечия Анзури Борисович[Ru]
  • Софронова Ольга Владимировна[Ru]
  • Люблинская Ирина Николаевна[Ru]
  • Ермолаев Евгений Дмитриевич[Lv]
  • Каплан Михаил Александрович[Ru]
  • Орлов Николай Савельевич[Ru]
RU2080865C1
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТА СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В КРОВИ 2002
  • Сторожук П.Г.
  • Сторожук А.П.
RU2236011C2
СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗЫ ИЗ КЛЕТОК ЭУКАРИОТОВ 1992
  • Соколов Юрий Иванович[Ru]
  • Павлов Александр Алексеевич[Ru]
  • Давидов Евгений Рубенович[Ru]
  • Кошелева Алла Викторовна[Ru]
  • Савов Валентин Александров[Bg]
  • Куюмджиева-Савова Анна Вангелова[Bg]
  • Автомонова Татьяна Николаевна[Ru]
RU2039818C1

Реферат патента 1995 года СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАТАЛАЗЫ ИЗ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

Изобретение относится к биохимии, а именно к энзимологии. Цель изобретения - интенсификация способа. Поставленная цель достигается тем, что в способе, включающем отмывку эритроцитов донорской крови физраствором и центрифугированием, проводят одновременно и осаждение гемоглобина, и стабилизацию катализы смесью хлороформа и пропанола в соотношении 5 : 3, к полученному после центрифугирования супернатанту добавляют равный объем воды и растворяют сернокислый аммоний из расчета 535 - 540 г на 1 л экстракта до полного растворения соли. После формирования осадка проводят центрифугирование.

Формула изобретения RU 2 033 170 C1

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КАТАЛАЗЫ ИЗ ЭРИТРОЦИТОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА путем отмывки эритроцитов физиологическим раствором, центрифугирования, обработки осадка эритроцитов равным объемом дистиллированной воды, осаждения гемоглобина из гемолизата эритроцитов органическими растворителями при непрерывном перемешивании, удаления осадка гемоглобина, очистки целевого продукта в присутствии сернокислого аммония с последующей лиофилизацией целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью интенсификации способа за счет сокращения числа и длительности операций, гемолизат эритроцитов обрабатывают смесью пропанола-2 и хлороформа в соотношении 5 3, центрифугируют, к надосадочной жидкости добавляют равный объем дистиллированной воды в соотношении 1 1, в 1 л которой растворяют 535-540 г сернокислого аммония.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1995 года RU2033170C1

Крайнев С.И
О спектральной характеристике каталазы и гемоглобина эритроцитов человека
Биохимия, 1966, т.31, в.1, с.26-32.

RU 2 033 170 C1

Авторы

Благородов С.Г.

Свечникова Л.В.

Шепелев А.П.

Сазыкина О.В.

Даты

1995-04-20Публикация

1989-06-07Подача