Способ дифференциальной диагностики гипертонической болезни и артериальной гипертензии, обусловленной хроническим пиелонефритом Советский патент 1993 года по МПК G01N33/52 G01N33/68 A61B10/00 

Изобретение относится к области клинической медицины, в частности к внутренним болезням, преимущественной областью его использования является дифференциальная диагностика гипертонической болезни (ГБ) и артериальной гипертензии, обусловленной хроническим пиелонефритом (ХЛ).

Цель настоящего изобретения - упрощение способа дифференциальной диагностики ГБ и ХП с артериальной гипертензией за счет сокращения трудоёмких операций путем определения у больных ГБ и ХП активности каталазы и супероксиддисмутазы (СОД) эритроцитов.

Способ осуществляется следующим образом. Из локтевой вены больного в пробирку с раствором цитрата натрия отбирают 5 мл крови, центрифугируют 10 мин (4000 об/мин) и затем отделяют зритромассу от плазмы. Эритромассу дважды промывают физиологическим раствором (перемешиванием и центрифугированием по 5 мин при 2000 об/мин). После второго центрифугирования надосадок сливается. Для определения активности каталазы 0,1 мл промытой эритромассы гемолизируют дистиллированной водой и получают гемолизат разведения 1 : 2000 0,1 мл полученного гемолизата переносится в пробирку, доводится 0.05М Трис-HCI буфером рН 7,4 до 1 мл, прибавляется 2 мл 0,03% Н202 и инкубируется в термостате при 25°С в течение 10 мин. После инкубации вносится 2 мл 4% раствора мо- либдата аммония. Полученную пробу спект- рофотометрируют при длине волны 410 нм. Экстинцию опытной пробы сравнивают с экстинцией контрольной пробы, которую получают таким же образом, только 0,1 мл гемолизата добавляется в пробирку после инкубации в термостате, непосредственно перед добавлением молибдата аммония. По разнице между экстинциями контрольной и опытной проб судят о величине каталазной

(Л

с

00

ю

4 О V4

активности. Расчеты производят, исходя из коэффициента миллимолярной экстинции перекиси водорода, и результаты выражают в мМ инактивированной Н20а 1 л эритро- массы за 1 сек.

Для определения активности СОД брали 0,1 мл отмытой эритромассы при подготовке эритроцитов для исследования СОД в системе феназинметасульфат-Н АД Н-нит- росиний тетразолий. Эти 0,1 мл отмытой эритромассы гемолизируют и разбавляют 0,9 мл 5 мМ буфера (рН 7,4), переносят в центрифужную пробирку, добавляют 0,25 мл этанола, 0,15 мл хлороформа и 0,6 г кристаллического КНаРОд. Все это перемешивается стеклянной палочкой в течение 15 мин, выдерживается в холодильнике при 4°С 30 мин и центрифугируется при 5000 об/мин 15 мин. Затем, отбирается над- осадочная жидкость. В пробирку последовательно вносят 1,7 мл фосфатного буфера (0,15 М, рН 7,8), 2 мл раствора нитросинего тетразолия (0,01 г на 100 мл 0,15 М фосфатного буфера, рН 7,8); 0,5 мл раствора фена- зинметасульфата (0,003 г на 150 мл 0,15 М фосфатного буфера, рН 7,8). 6,1 мл надоса- дбчной жидкости и 0,9 мл раствора НАД Н (0,01 г на 24 мя 0,15 М фосфатного буфера, рН 7,8). Содержимое перемешивали стеклянной палочкой, и пробирку помещали в темноту и термостэтировали при 25°С в течение 10 мин, После чего, сразу на фотоэлек- троколориметре при длине волны 540 нм определяли величину экстинции и сравнивали с экстинцией контрольной пробы, .которую получали таким же образом, только в пробирку не вносили надосадочную жидкость. О величине активности СОД судят по разнице экстинции контрольной и опытной проб и выражают в процентах (от экстинции контрольной пробы).

При рассмотрении изучаемых показателей в исследуемых группах больных было выявлено, что у 90% больных ГБ активность каталазы составила от 165 мМ НаОа/П С до 235 ММ Нг02/л с, тогда как у 90% больных ХП этот показатель находился в пределах 239-303 мМ Н202/Л-С. Активность СОД от 32% flo 44% отмечена у 90,5% больных ГБ, а от 48% до 63% - у 92.5% больных ХП.

При м е р 1. Больной М., 47 лет, был впервые госпитализирован в терапевтическое отделение по поводу повышения артериального давления (АД) для стационарного лечения и обследования. Диагноз при поступлении: гипертоническая болезнь, симптоматическая (почечная) гипертензия.

При исследовании антиоксидантных -ферментов обнаружено: активность каталазы составила 183 мМ НаОа/л-с, активность СОД-32%. На основании этих данных было высказано мнение о наличии у больного гипертонической болезни.

При проведении в дальнейшем комплексного клинического и лабораторно-инст- рументального исследования больного диагноз гипертонической болезни II стадии (криз) был подтвержден.

П р и м е р 2. Больная Г., 50 лет, была госпитализирована в терапевтическое отделение с предварительным диагнозом: гипертоническая болезнь

При исследовании антиоксидантных

ферментов обнаружено: активность каталазы составила 165 мМ HaOzArc, активность СОД-34%. Был сделан вывод о наличии у больной гипертонической болезни.

В дальнейшем комплексное и лабораторно-инструментальное исследование подтвердили диагноз: гипертоническая болезнь I стадии, криз.

П р и м е р 3. Больная М., 45 лет, была направлена на стационарное лечение и об

следование с предварительным диагнозом:

хронический пиелонефрит в гипертензив- ной стадии..

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность каталазы составила 220 мМ НаОа/л -с, активность СОД-40%. На основании этих данных был сделан вывод о наличии у больной гипертонической болезни.

В дальнейшем при динамическом наблюдении и проведении комплексного лабораторно-инструментальногб исследования диагноз хронического пиелонефрита был снят. Окончательный диагноз: гипертоническая болезнь II стадии, кризовое течение.

П р и м е р 4. Больная Л., 43 года, поступила в терапевтическое отделение по поводу повышенного АД. Диагноз при поступлении: гипертоническая болезнь I

стадии, криз.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность каталазы составила 235 мМ Н202/Л-С, активность СОД-40%. Полученные данные позволили

сделать вывод о наличии у больной гипертонической болезни.

При проведении комплексного клинического и лабораторно-инструментального исследования диагноз гипертонической

болезни II стадии (криз) был подтвержден.

П р и м е р 5. Больной С,, 50 лет, впервые был госпитализирован в терапевтическое отделение по поводу повышения АД. Диагноз при поступлении: гипертоническая болезнь II стадии, криз.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность катала- зы составила 230 мМ Н202/лт„ активность СОД-44%. Был сделан вывод о наличии у больного гипертонической болезни.

В дальнейшем комплексное клиническое и лабораторно-инструментальное исследование подтвердили диагноз: ги- пертоническая болезнь И стадии, криз.

П р и м е р 6. Больная К., 49 лет, была направлена на стационарное лечение и обследование по поводу повышенного АД. Диагноз при поступлении: гипертоническая болезнь, хронический пиелонефрит, симптоматическая гипертензия

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность катала- зы составила 239 мМ Н202/Л -с, активность СОД-48%. На основании этих данных был сделан вывод о наличии у больной хронического пиелонефрита.

При комплексном клиническом и лабо- раторно-инструментальном исследовании диагноз хронического пиелонефрита (ги- пертензивная стадия) был подтвержден.

Пример. Больной Р., 41 год, поступил в терапевтическое отделение с предварительным диагнозом: гипертоническая болезнь II стадии, криз.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: аткивность катала- зы составила 260 мМ Н202/Л -с, активность СОД-53%. На основании полученных дан- ных был сделан вывод о наличии у больного артериальной гипертензии, обусловленной хроническим пиелонефритом.

При комплексном клиническом и лабо- рэторно-инструментальном исследовании диагноз хронического пиелонефрита (ги- пертензивная стадия) был подтвержден.

Пример 8. Больной И., 38 лет, поступил в терапевтическое отделение для лечения и обследования по поводу по- вишенного АД. Диагноз при поступлении: гипертоническая болезнь

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность катэла- зы составила 303 мМ , активность СОД-58%. На основании этих данных было высказано мнение о наличии у больного хронического пиелонефрмта.

В дальнейшем при динамическом наблюдении и проведении комплексного лабораторно-инструментального исследования диагноз гипертонической болезни был снят. Окончательный диагноз; хронический пиелонефрит, гипертензивная стадия.

П р и м е р 9. Больная С., 46 лет. поступила в терапевтическое отделение с диагнозом: хронический пиелонефрит, гипертензивная стадия.

При исследовании антиоксидантных ферментов обнаружено: активность катэла- зы составила 285 мМ Н202/Л -с, активность СОД-63%. Был сделан вывод о наличии у больной хронического пиелонефрита.

В дальнейшем на основании комплексной оценки клиники и данных лабораторно- инструментального исследования диагноз хронического пиелонефрита (гипертензивная стадия) был подтвержден.

Приме р 10. У служащего Н., 39 лет, при проведении профосмотра определена активность антиоксидантных ферментов. Обследуемый здоров, самостоятельно занимается спортом. Активность каталазы составила 310 мМ Н202/л-с, активность СОД-66%. Таким образом, отсутствие гипертонической болезни было подтверждено.

Таким образом, разработанный способ дифференциальной диагностики ГБ и ХП в гипертензивной стадии позволяет сократить время (по сравнению с прототипом) проведения методики в 11,3 раза при определении активности каталазы и - в 3,8 раза при определении активности СОД. Значительно сокращается количество трудоемких операций, таких как получение мембран, экстрагирование липидов. Кроме того, устраняется влияние токсичных веществ (гептан, серная кислота по Сава- лю) и необходимость дополнительных расчетов (вычисление диагностического коэффициента). Предлагаемый способ является простым, надежным и доступным для обычной клинико-биохимической лаборатории, при этом точность диагностики в сравнении с известным способом не снижается.

Формула изобретения

Способ дифференциальной диагностики гипертонической болезни и артериальной гипертензии, обусловленной хроническим пиелонефритом, включающий отбор венозной крови, получение эритроцитов и их биохимический анализ, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа за счет сокращения трудоемких операций, проводят гемолиз эритроцитов, в гемолизате определяют активность каталазы или супероксиддисмутэзы и при активности каталазы 165-235 мМ Н202/л-с или суперксиддисмутазы 32-44% стенки инги- бирования восстановления нитросинего тетразолиевого диагностируют гипертоническую болезнь, а при активности каталазы

239-303 мМ НаОа/л-с или супероксиддис- зию, обусловленную хроническим пиело- мутазы 48-63% артериальную гипертони- нефритом.

Использование: медицина, дифференциальная диагностика гипертонической болезни (ГБ) в периоде обострения и артериальной гипертензии, обусловленной хроническим пиелонефритом. Сущность изобретения: регистрируют величину активности катзлазы или супероксид днемутазУ эритроцитов. Способ позволяет упростить, ускорить и обезопасить процесс дифференциальной диагностики ГБ.