Способ получения биогенного стимулятора для лечения и профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных Российский патент 2018 года по МПК A61K35/50 A61P37/04 

Описание патента на изобретение RU2648466C1

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к применению в качестве лекарственного средства для профилактики и лечения различных заболеваний у сельскохозяйственных животных денатурированных тканей этих же животных.

Известен препарат из плаценты человека для ветеринарии, получаемый в виде эмульсии путем предварительного измельчения и последующей обработки измельченных тканей до прекращения поглощения активного хлора и нейтрализацией полученной реакционной смеси до рН-4,5.

Другой известный препарат также из плаценты человека [заявка N 4935735-14-029528], представляет собой нерасслаивающуюся суспензию, получаемую путем химической обработки плацентарных тканей хлоритом натрия в кислой среде.

Также известен препарат противовоспалительного действия для профилактики и лечения послеродовых осложнений у коров и других сельскохозяйственных животных на основе тканей плаценты. Препарат противовоспалительного действия готовят из ткани плаценты человека - пуповины - с добавлением стерильной дистиллированной воды в соотношении (1:0,8)-(1:1,2) [Патент RU 2035910, МПК 6 А61К 35/50, дата публикации формулы 1995.05.27].

Кроме того, известен способ лечения и профилактики гинекологических заболеваний у коров и свиноматок с использованием препарата - плацента денатурированная эмульгированная, который изготавливается из плаценты человека. Препарат представляет собой стерильную эмульсию белого или белого с желтоватым оттенком цвета, специфического запаха [Ветеринарные препараты в России: справочник И.Ф. Кленова, Н.А. Яременко. - М.: Сельхозиздат, 2000. - с. 446].

Существенными недостатками отмеченных выше препаратов-аналогов является труднодоступность исходного сырья (плацента человека), вследствие чего низкое удовлетворение потребностей ветеринарии, а также видовая несовместимость белковых и полисахаридных компонентов препарата.

Близким к заявленному техническому решению является способ получения препарата спленин для лечения токсикозов при ранних сроках беременности [Патент RU 111934, заявлено 5.10.1957 г., опубликовано в 1958 г.]

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому эффекту является препарат, полученный для профилактики и лечения эндометриоза у коров и свиноматок [Патент РФ №2253466, заявлено 25.12.2003 г., опубликовано 10.06.2005 г.].

Недостатком указанных препаратов является низкая эффективность действия, причиной которой служит использование устаревших технологий его получения. В основе методов получения указанного препарата лежат процессы денатурирования тканей плаценты окислителями и перекисью водорода, вследствие чего разрушается большинство ценных биологически активных веществ, содержащихся в биоматериале крупного рогатого скота.

Также значительным недостатком является сложность и длительность технологии, связанная с использованием замораживания исходного сырья, криоизмельчения и дальнейшей экстракции с помощью хладона.

Технической задачей изобретения является упрощение технологии получения биогенного стимулятора, являющегося средством для лечения и профилактики различных заболеваний животных, с максимальным сохранением биологически активных веществ.

Для решения поставленной технической задачи предложен способ получения биогенного стимулятора для лечения и профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных, включающий промывание селезенки проточной водой, очищение от соединительнотканных и жировых элементов, выдержку селезенки в асептических условиях при температуре 5-6°С в течение 72 часов, гомогенизацию с добавлением дистиллированной воды в соотношении 1:10, дальнейшую выдержку при температуре 22-23°С в течение 1 часа, ультрафильтрацию полученной смеси.

Технический результат изобретения заключается в упрощении технологии получения биогенного стимулятора, являющегося средством для лечения и профилактики различных заболеваний животных, с максимальным сохранением биологически активных веществ.

Способ получения биогенного стимулятора для лечения и профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных осуществляется следующим образом.

Селезенку крупного рогатого скота, полученную от здорового животного, прошедшую ветеринарно-санитарную экспертизу согласно требованиям технологического регламента по заготовке эндокринного сырья промывают проточной водой, очищают от соединительнотканных и жировых элементов, выдерживают в асептических условиях при температуре 5-6°С в течение 72 часов, гомогенизируют с добавлением дистиллированной воды в соотношении 1:10, выдерживают 1 час при температуре 22-23°С, затем полученную массу подвергают ультрафильтрации для концентрирования и очистки. Стерильно упакованный препарат хранят при температуре от 0 до 5°С в течение 1 года.

Для ультрафильтрации могут применяться различные керамические мембраны с размером пор от 0,05 до 0,1 мкм. При ультрафильтрации удаляются высокомолекулярные белковые соединения.

Полученный препарат содержит комплекс биологически активных веществ: аминокислоты, пептиды, нуклеиновые кислоты, гексуроновые кислоты, полисахариды, витамины, микроэлементы, и обладает иммуностимулирующим действием, нормализует показатели клеточного и гуморального иммунитета, оказывает противовоспалительное действие, стимулирует ферментную систему и нормализует микробный состав пищеварительного тракта, обладает адаптогенным и стресс-протекторным действием, повышает неспецифическую резистентность организма.

Биогенный стимулятор может применяться как инвазивно, так и орально, вместе с кормом.

По всем опытам и производственным испытаниям способа получены положительные результаты и хорошие отзывы.

Положительные результаты, полученные при испытании предложенного способа, свидетельствуют о перспективности его дальнейшего исследования и внедрения в производство, полученный препарат эффективен при различных заболеваниях сельскохозяйственных животных, причем его клиническая эффективность сравнима и даже несколько превосходит известные аналоги.

Эксперимент был проведен на белых мышах линии BALB/c массой 18-20 г. Биогенный стимулятор животным вводили 2-кратно, подкожно, с интервалом между инъекциями 14 суток, в дозе 0,2 мл. Изучение иммуностимулирующей активности препарата проводили на фоне вакцинации мышей инактивированной вакциной против парвовирусного энтерита собак, (животным опытной группы биогенный стимулятор вводили одновременно с вакциной). В качестве контроляиммуностимулирующей активности были использованы белые мыши, привитые только одной вакциной (контроль №1), а в качестве общего контроля (контроль №2) были использованы интактные животные (не привитые вакциной и не обработанные иммуномодулятором).

Функциональное состояние Т-клеток оценивали в реакции Е-розеткообразования и ее модификации с теофилином. Изучение иммуностимулирующего эффекта мы также проводили методом локального гемолиза по Ерне, который дает возможность определить количество и функциональную активность клеточной кооперации В-лимфоцитов, из которых дифференцируются антителообразующиеся клетки (АОК).

Уровень иммуноглобулинов в плазме крови определяли методом радиальной иммунодиффузии по Манчини. Уровень антител определяли в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) против парвовируса энтерита собак второго типа (CPV-2). Ранее нами также были проведены исследования сывороток крови мышей, в аналогичных опытах, где наличие специфических антител к парвовирусу собак (CPV) определяли методом непрямоготвердофазного ИФА. При постановке ИФА был использован стандартный вариант непрямого ИФА, основанный на взаимодействии специфических антител с антигеном (очищенный CPV-2), иммобилизованным на твердом носителе с последующим выявлением иммунного комплекса с помощью антивидового иммунопероксидазного конъюгата в ферментативной реакции.

Результаты ИФА оценивали с помощью фотометра при длине волны 492 нм по коэффициенту оптического поглощения (OD 492). Титры антител в испытуемых сыворотках определяли как последнее разведение, обеспечивающее окраску, превышающую в 2 раза интенсивность окраски в лунках с контрольной отрицательной сывороткой (сыворотка крови мышей, взятой до иммунизации).

Полученные данные показали, что введение вакцины без биогенного стимулятора вызывало достоверное снижение нейтрофилов (контроль №1-18,5%, контроль №2 - 33,1%) и повышение числа лимфоцитов (контроль №1 - 55,6%; контроль №2 - 49,0%). Количество Т-лимфоцитов оставалось практически на том же уровне. Однако увеличение общего числа лимфоцитов произошло за счет повышения количества В-клеток. Это косвенно подтверждается повышением уровня иммуноглобулинов (IgG) почти в два раза по сравнению с контролем №2.

Введение биогенного стимулятора способствовало повышению числа нейтрофилов. Одновременное введение его с вакциной вызвало повышение Е-РОК до 44%, тогда как у животных привитых только одной вакциной (контроль №1) эти показатели были ниже и составляли 30%. В группе интактных животных (контроль №2) они составляли 33,4%.

Адъювантные свойства исследуемого препарата изучали в реакции простой и радиальной иммунодиффузии, определяя содержание иммуноглобулинов в плазме крови и суспензиях спленоцитов мышей. Полученные данные показали, что иммуноадъювантный эффект наблюдался при введении биогенного стимулятора в сочетании с вакциной и без нее. Уровень IgG в опытной группе составил 3,7, тогда как в контрольной группе №1-3,2 и контрольной группе №2 - 1,6.

При определении иммуностимулирующего эффекта методом локального гемолиза по Ерне было установлено, что разница уровней Т-зависимого антителообразования у животных контрольных и опытной групп была статистически достоверна (р<0,01).Индекс стимуляции составил 1,7.

Одновременно мы проводили исследования сывороток крови мышей опытной группы и контрольной группы №1 в реакции торможения гемагглютинации (РТГА). Реакцию ставили для каждой пробы при двойном разведении сывороток в двух вариантах: при первичном разведении 1/2 и 1/3 с целью более точного определения отличий в значениях титров при одинаковом логарифме разведений. В опыте установлено, что у животных контрольной группы №1 (мыши, иммунизированные только вакциной против парвовирусного энтерита собак) на 28 сутки после вакцинации титры специфических антител к парвовирусу собак второго типа составляли в первичном разведении 1/2 - 1:512 и вторичном разведении 1/3 - 1:384. У мышей опытной группы, привитых вакциной в сочетании с биогенным стимулятором, эти показатели составляли в первичном разведении 1:1024 и вторичном разведении 1:1536. При исследовании сывороток крови мышей методом непрямого твердофазного ИФА было установлено, что титры антител к CPV-2 в среднем по группе животных, привитых только вакциной, составляли 1:4800 (12,22 log2). Однако у мышей, вакцинированных в сочетании с биогенным стимулятором, этот показатель составил 1:14080 (13,78 log2).

Таким образом, экспериментально установлено, что при парентеральном введении 2%-ного водного раствора биогенного стимулятора у подопытных животных наблюдалась выраженная иммунная перестройка организма. Повышался уровень общего числа лимфоцитов на 44%, Т-зависимого антитело образования (индекс стимуляции 1,7), IgG до 3,7. Титры специфических антител в РТГА и ИФА в 2 и более раз превышали таковые в сыворотках крови животных контрольных групп.

Способ получения биогенного стимулятора для лечения и профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных поясняется следующим примером.

Пример 1

Получают биогенный стимулятор согласно технологической схеме, представленной на фиг. 1.

Селезенку крупного рогатого скота, полученную от здорового животного, прошедшую ветеринарно-санитарную экспертизу согласно требованиям технологического регламента по заготовке эндокринного сырья, промывают проточной водой, очищают от соединительнотканных и жировых элементов выдерживают в асептических условиях при температуре 5-6°С 72 часов, гомогенизируют с добавлением дистиллированной воды в соотношении 1:10, выдерживают 1 час при температуре 22-23°С, затем полученную массу подвергают ультрафильтрации для концентрирования и очистки. Стерильно упакованный препарат хранят при температуре от 0 до 5°С в течение 1 года.

Для ультрафильтрации могут применяться различные керамические мембраны с размером пор от 0,05 до 0,1 мкм. При ультрафильтрации удаляются высокомолекулярные белковые соединения.

Предложенный способ может использоваться как в крупных животноводческих комплексах, так и в небольших фермерских хозяйствах.

Предложенный способ получения биогенного стимулятора для лечения и профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных позволяет:

- расширить сырьевую базу для получения высокоактивных биогенных стимуляторов в ветеринарной практике;

- исключить видовую несовместимость;

- повысить эффективность препарата;

- существенно упростить технологию получения с максимальным сохранением биологически активных веществ.

Похожие патенты RU2648466C1

название год авторы номер документа
Способ получения биогенного стимулятора для коррекции иммунного статуса сельскохозяйственных животных 2018
  • Куцова Алла Егоровна
  • Гребенщиков Андрей Васильевич
  • Василенко Людмила Ивановна
  • Корчагина Анна Юрьевна
RU2679361C1
Ассоциированная вакцина против чумы плотоядных, парвовирусного и коронавирусного энтеритов, аденовирусной инфекции собак 2022
  • Галкина Татьяна Сергеевна
  • Комарова Анна Александровна
  • Климова Анастасия Антоновна
  • Доронин Максим Игоревич
  • Ручнова Ольга Ивановна
RU2806164C1
Ассоциированная вакцина против чумы плотоядных, парвовирусного и коронавирусного энтеритов, аденовирусной инфекции и бешенства собак 2023
  • Галкина Татьяна Сергеевна
  • Комарова Анна Александровна
  • Климова Анастасия Антоновна
  • Доронин Максим Игоревич
  • Борисов Алексей Валерьевич
  • Михалишин Дмитрий Валерьевич
RU2817255C1
ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ MUS MUSCULUS L. - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ БОЛЕЗНИ АУЕСКИ ШТАММ УНИИЭВ 18 В 1995
  • Глобенко Л.А.
  • Жбанова Т.В.
  • Камалова Н.Е.
  • Мищенко В.А.
  • Баборенко Е.П.
RU2092554C1
СПОСОБ КОМПЛЕКСНОГО ЛЕЧЕНИЯ МАСТИТА У ЛАКТИРУЮЩИХ КОРОВ 2013
  • Шабунин Сергей Викторович
  • Климов Николай Тимофеевич
  • Нежданов Анатолий Григорьевич
  • Востроилова Галина Анатольевна
  • Зимников Виталий Иванович
  • Чурсин Александр Владимирович
  • Першин Семен Семенович
  • Шевелева Елена Евгеньевна
  • Ключникова Яна Сергеевна
RU2519349C1
СПОСОБ КОМПЛЕКСНОГО ЛЕЧЕНИЯ КОРОВ ПРИ ПОСЛЕРОДОВОМ ЭНДОМЕТРИТЕ 2013
  • Шабунин Сергей Викторович
  • Нежданов Анатолий Григорьевич
  • Михалёв Виталий Иванович
  • Климов Николай Тимофеевич
  • Востроилова Галина Анатольевна
  • Скориков Владимир Николаевич
  • Филин Василий Васильевич
  • Смирнова Евгения Викторовна
  • Ческидова Лилия Валерьевна
RU2528916C1
БИОГЕННЫЙ СТИМУЛЯТОР ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ 1991
  • Шитов Геннадий Гаврилович[Ua]
  • Курило Николай Федорович[Ua]
  • Горшков Григорий Иванович[Ru]
  • Безбородов Николай Васильевич[Ru]
  • Горовецкая Виктория Валентиновна[Ua]
RU2036651C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСТРАКТА ИЗ ПЛАЦЕНТЫ КОРОВ 1996
  • Багманов М.А.
  • Хайруллин И.Н.
RU2105560C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ЭКСТРАКТА ПЛАЦЕНТЫ КОРОВ 2001
  • Багманов М.А.
  • Кооп В.В.
  • Тюкин П.А.
RU2198671C2
МУЛЬТИПОТЕНТНАЯ ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ПРЕИМУЩЕСТВЕННО ИНВАЗИОННЫХ И ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ, СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ 2014
  • Игнатов Пётр Евгеньевич
  • Фёдоров Андрей Иванович
  • Игнатова Татьяна Олеговна
  • Матвеенко Лидия Нмколаевна
RU2583886C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 648 466 C1

Реферат патента 2018 года Способ получения биогенного стимулятора для лечения и профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных

Изобретение относится к ветеринарии и касается способа получения биогенного стимулятора для лечения и профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных, включающего промывание селезенки проточной водой, очищение от соединительнотканных и жировых элементов, выдержку селезенки в асептических условиях, гомогенизацию с добавлением дистиллированной воды, дальнейшую выдержку, ультрафильтрацию полученной смеси. Изобретение обеспечивает расширение сырьевой базы для получения высокоактивных биогенных стимуляторов в ветеринарной практике, исключение видовой несовместимости, повышение эффективности препарата, упрощение технологии получения с максимальным сохранением биологически активных веществ. 1 ил., 1 пр.

Формула изобретения RU 2 648 466 C1

Способ получения биогенного стимулятора для лечения и профилактики заболеваний сельскохозяйственных животных, включающий промывание селезенки проточной водой, очищение от соединительнотканных и жировых элементов, выдержку селезенки в асептических условиях при температуре 5-6°С в течение 72 часов, гомогенизацию с добавлением дистиллированной воды в соотношении 1:10, дальнейшую выдержку при температуре 22-23°С в течение 1 часа, ультрафильтрацию полученной смеси.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 2018 года RU2648466C1

БИОГЕННЫЙ СТИМУЛЯТОР ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ 1991
  • Шитов Геннадий Гаврилович[Ua]
  • Курило Николай Федорович[Ua]
  • Горшков Григорий Иванович[Ru]
  • Безбородов Николай Васильевич[Ru]
  • Горовецкая Виктория Валентиновна[Ua]
RU2036651C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ПРЕПАРАТА ИЗ ТКАНЕЙ МОЗГА 1994
  • Мещеряков Федор Александрович
RU2071335C1
Винникова Л.Г
Технология мяса и мясных продуктов: учебник
ИНКОС
Киев
Пломбировальные щипцы 1923
  • Громов И.С.
SU2006A1
Очаг для массовой варки пищи, выпечки хлеба и кипячения воды 1921
  • Богач Б.И.
SU4A1
Устройство для сортировки каменного угля 1921
  • Фоняков А.П.
SU61A1
СЪЕМНИК ДЕТАЛИ С ШЛИЦЕВОЙ ПОВЕРХНОСТЬЮ 1999
  • Ларионов Ю.В.
  • Мясников Б.Н.
  • Тимошкин Н.И.
RU2177402C2

RU 2 648 466 C1

Авторы

Гребенщиков Андрей Васильевич

Василенко Людмила Ивановна

Куцова Алла Егоровна

Голубев Артем Игоревич

Даты

2018-03-26Публикация

2016-11-01Подача