СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОГО ПРЕПАРАТА "ТОДИКАМП" Российский патент 1995 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается получения биологически активного препарата из зеленых грецких орехов.

Грецкий орех и препараты на его основе широко используются в народной и научной медицине.

Лекарственным сырьем главным образом являются листья, свежие незрелые плоды и околоплодник. Однако и другие части грецкого ореха, например корни дерева и кора корней, используются для заживления ран и при рахите. В Иране на их основе изготавливают мазь, используемую при геморрое. Кора корней грецкого ореха употребляется как нежное слабительное средство, не вызывающее болей. В древесине особенно ценятся сок и каны, представляющие собой ранозаживляющее и кровоостанавливающее средство. Отвары коры ствола применяются при язвах, опухолях, венерических заболеваниях, скрофулезе и рахите.

Известно получение биологически активных препаратов из незрелых грецких орехов. Настойка незрелых грецких орехов влияет на выделение почками воды и электролитов (Кучер В.И. Влияние настойки незрелых грецких орехов на выделение почками воды и электролитов. Респ. науч. конф. (21-22 окт.)/Тез. докл. Харьков, 1986, с. 252-253).

Известно приготовление спиртовых вытяжек грецкого ореха и использование их в народной медицине как внутрь, так и наружно для борьбы с опухолями.

Целью изобретения является повышение активности биологически активного препарата из незрелых грецких орехов.

Для достижения цели грецкие орехи молочно-восковой спелости в зеленом околоплоднике измельчают до размера частиц 1 мм и экстрагируют фракцией из нефтяного сырья с низким содержанием углеводородов при соотношении сырье-экстрагент (1: 3) и интенсивном перемешивании. Смесь выдерживают, экстракт отделяют, а оставшуюся суспензию повторно обрабатывают тем же растворителем при интенсивном перемешивании и соотношении сырье-экстрагент (3:1), затем смесь выдерживают, экстракт отделяют и оба экстракта объединяют, оставшийся жом высушивают и пропускают через него экстракт.

Интенсивное перемешивание на первом этапе экстрагирования проводят в течение первых 7 сут экстракции, а на втором 14 сут. После интенсивного перемешивания смесь на первом этапе экстрагирования выдерживают 5 сут, а на втором этапе 10 сут.

Биологически активный препарат, полученный предлагаемым способом, назван "Тодикамп".

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующим конкретным примером.

П р и м е р. 700 кг орехов грецких зеленых и 1000 кг экстрагента, фракция "Ленефр" (ТУ 308.401), полученная из нефтяного сырья с низким содержанием ароматических углеводородов; экстракцию проводят в 2 ступени.

1 с т у п е н ь. Орехи грецкие зеленые подвергают грубому помолу до размера частиц 1 мм. Полученную массу заливают нефтяной фракцией "Ленефр", интенсивно перемешивают первые 7 сут и выдерживают последующие 5 сут. Полученную смесь отфильтровывают с применением вакуума через нутч-фильтр и отсасывают.

2 с т у п е н ь. В оставшуюся суспензию после первичной экстракции добавляют нефтяную фракцию "Ленефр". Смесь интенсивно перемешивают в течение 14 сут и выдерживают последующие 10 сут. Дальнейшие операции, как и на 1-й ступени.

Готовые экстракты, полученные на 1-й и 2-й ступенях, объединяют, оставшийся жом высушивают и пропускают через него экстракт.

Экстракцию на 1-й и 2-й ступенях проводят при интенсивном перемешивании, в результате чего повышается температура смеси до 35-40^оС и экстракция ведется при повышенной температуре.

Сочетание экстракции при повышенной температуре и обычной температуре при выдержке позволяет увеличить извлечение биологически активных веществ из сырья.

Полученный предлагаемым способом препарат "Тодикамп" представляет собой прозрачную жидкость от светло-желтого до желтоватого цвета с характерным запахом. Кислотность от 0,1 до 0,3 мг/г, не растворим в воде и спирте, без особого вкуса. Плотность от 0,720 до 0,750 г/см³. Стоек при хранении, не портится в течение 2 лет.

Препарат "Тодикамп" прошел экспериментальную проверку и является малотоксичным при наружном, внутрижелудочном и внутривенном, а также внутримышечном введении крысам, кроликам и мышам. Терапевтический индекс (отношение полулетальной дозы к терапевтической) более 300. При хроническом накожном применении на крысах и кроликах никаких патологических изменений не обнаружено. Отмечено в этих экспериментах наличие антиоксидантной активности тодикамп. Тодикамп не проявил мутагенной, генотоксической, аллергизирующей, тератогенной, эмбриотоксической активности.

Тодикамп при нанесении на кожу крыс и кроликам обладает выраженным местно-раздражающим действием, превосходящим феналгон. Препарат обладает выраженной противовоспалительной активностью. Ранозаживляющая активность тодикампа превосходит таковую лучшего зарубежного препарата "Солкосерил".

В опытах на обезьянах (макаки-резус) при внутримышечном введении Тодикамп не проявил каких-либо отрицательных влияний на внутренние органы и системы.

Специальными опытами было доказано следующее:
1. Тодикамп эффективно защищает иммунную систему от генотоксического действия противоопухолевых препаратов (полная защита при терапевтической курсовой дозе).

2. Стабилизирует тканевые системы у предрасположенных к опухолям высокораковых линейных животных до нормы.

Тодикамп проявил способность на порядок снижать число уродств при приеме его беременными животными по сравнению с интактными животными за счет полного отсутствия при его применении кровоизлияний во внутренних органах.

При экспериментальном изучении обнаружено, что этот препарат при местном применении оказывает выраженный сосудорасширяющий эффект, при аппликации вызывает последовательно стойкую гиперемию, эритему и по раздражающему действию превосходит мазь "Феналгон".

В условиях хронического эксперимента при многократном наружном применении Тодикамп оказывает противовоспалительное действие: при изучении влияния препарата на пролиферативную фазу воспаления показано, что прирост массы грануляционно-фибринозной ткани в ответ на имплантацию ватных шариков (тест "ватная гранулема") у животных, леченных препаратом на 50% ниже, чем в контроле.

Ранозаживляющий эффект препаратов проявлялся при длительном применении у белых крыс и морских свинок (в течение 14 дней в дозе 0,1 мл на животное трехкратное ежедневное смазывание раневой поверхности).

По данным токсикологических исследований препарат "Тодикамп" малотоксичен, неиммунотоксичен и не обладает мутагенными и тератогенными свойствами.

Препарат "Тодикамп" прошел клинические испытания.

К испытаниям было допущено 57 больных с опухолями головы и шеи, пищевода, шейки и тела матки и отдельные больные с опухолями мочевого пузыря и прямой кишки. Всем больным до начала лечения и в конце курса наряду с общепринятыми проводились и специальные исследования:
1. Измерение размеров первичной опухоли и метастазов визуально, по рентгенограммам и с помощью УЗИ;
2. Исследование периферической крови, включающее количество эритроцитов, гемоглобин, лейкоциты и СОЭ;
3. Биохимические исследования: общий белок, тимоловая проба, билирубин, мочевина, глюкоза, серомукойды, оксипролин и некоторые другие.

4. Иммунологические исследования: Т-лимфоциты, Т-киллеры, Т-супрессоры, иммунные комплексы, антиидиотипы (АПФ), иммунные лейкоциты, нейтрофилы, зозинофилы, лимфоциты, моноциты.

16 больных с опухолями головы и шеи перенесли лечение предлагаемым препаратом без каких-либо жалоб и клинических осложнений. Отдельные больные ощущали неприятный запах. Объем первичной опухоли уменьшился в 4 раза, а метастазов на 80% Показатели периферической крови при применении тодикампа остались без существенных изменений. Биохимические показатели также оказались неизменными. Наиболее важные сведения касаются иммунологических показателей.

Таким образом, тодикамп оказывает на больных с опухолями головы и шеи, подвергшихся лучевой терапии, определенное защитное влияние, что выражается в сохранении исходных иммунологических и биохимических показателей и показателей периферической крови.

Восемь больных раком пищевода подверглись лучевой терапии в условиях радиомодификации (гипертермия, гипергликемия). Назначение предлагаемого препарата больные перенесли без каких-либо жалоб и клинических осложнений. В результате лечения объем опухоли уменьшился в 7-8 раз. Показатели периферической крови остались на исходном уровне. Биохимические показатели также оказались без изменений, что свидетельствует об отсутствии угнетения метаболизма у пациентов. Что касается иммунологических показателей, то несмотря на высокую дозу облучения, они остались на первоначальном уровне.

19 больных раком шейки и тела матки подверглись лучевой терапии с внутриопухолевым введением петронидазола или АК 2123, благодаря чему удалось достигнуть полной регрессии опухоли у 95% (18 больных). Назначение препарата больные перенесли без жалоб и клинических осложнений. Показатели периферической крови и иммунологические показатели остались без изменений, несмотря на высокую дозу облучения.

По остальным опухолям, мочевого пузыря и прямой кишки (4 чел.), наблюдались аналогичные результаты.

На основании проведенных испытаний установлено, что тодикамп переносится больными без побочных реакций, оказывает благоприятное воздействие на больных, подвергшихся лучевой терапии, что выражается в сохранении исходного уровня показателей периферической крови, исходного уровня метаболизма. Кроме того, тодикамп оказывает стабилизирующее влияние на защитные функции организма основные показатели остались такими же, как и до лечения. В то же время в результате лечения без тодикампа наступает угнетение кроветворной функции, иммунного статуса и нарушение метаболизма. Тодикамп не предотвращает воздействие радиации на лимфоциты, количество которых уменьшается в процессе проведения лучевого лечения.

Использование: в медицине, а именно в химико-фармацевтической промышленности, и касается получения биологически активных веществ из растительного сырья. Сущность: грецкие орехи молочно-восковой спелости измельчают до размера частиц 1 мм и экстрагируют фракцией из нефтяного сырья с низким содержанием углеводородов при соотношении сырья и экстрагента 1:3 и интенсивном перемешивании. Смесь выдерживают, экстракт отделяют, а оставшуюся суспензию повторно обрабатывают тем же растворителем при соотношении сырья и экстрагента 3: 1, далее экстракты объединяют, а оставшийся жом высушивают и пропускают через него экстракт. 4 з.п. ф-лы.

1. Способ получения биологически активного препарата путем экстракции незрелых плодов грецкого ореха органическим растворителем, отличающийся тем, что грецкие орехи молочно-восковой спелости в зеленом околоплоднике, измельченные до размера частиц 1 мм, экстрагируют фракцией из нефтяного сырья с низким содержанием углеводородов при соотношении сырья и экстрагента 1 3 и интенсивном перемешивании, далее смесь выдерживают и экстракт отделяют, оставшуюся суспензию повторно обрабатывают тем же экстрагентом при интенсивном перемешивании и соотношении сырья и экстрагента 3 1, затем смесь выдерживают, экстракт отделяют и оба экстракта объединяют, оставшийся жом высушивают и пропускают через него экстракт. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что на первом этапе экстрагирования интенсивное перемешивание ведут в течение первых 7 суток экстракции. 3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что на первом этапе экстрагирования после интенсивного перемешивания смесь выдерживают 5 суток. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что на втором этапе экстрагирования интенсивное перемешивание проводят в течение 14 суток. 5. Способ по п.1 или 4, отличающийся тем, что на втором этапе экстрагирования смесь после интенсивного перемешивания выдерживают 10 суток.