СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЛАРВАЛЬНОГО И СТРОБИЛЯРНОГО ЭХИНОКОККОЗОВ "ЧЕБЛИН СК-1" Российский патент 1999 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к медицине, в частности к средствам для лечения эхинококкозов.

Для подавления развития ларвального эхинококкоза у животных предложен медамин [1].

Недостатком препарата является, что после проведения курса лечения остаются жизнеспособные элементы эхинококка, которые после прекращения курса лечения начинают снова развиваться. Кроме того, максимальная нелетальная доза (МНЛД) медамина 2,5 г/кг, предлагаемый нами препарат Чеблин СК-1 менее токсичен, МНЛД для белых аутбредных мышей нашего препарата 19 г/кг.

Известен препарат Г-1697 /2/, являющийся 4-[(бензо-2,1,3-тиадиазолин-4)амино] -5,6,7, нелетальная доза /МНЛД/, установленная авторами в эксперименте на белых аутбредных мышах составила 4 г/кг.

Недостатком средства /2/ является более высокая токсичность по сравнению с нашим препаратом.

Задача изобретения - отыскание средства растительного происхождения, обладающего высокой противоэхинококкозной активностью и меньшей токсичностью по сравнению с известными препаратами.

Поставленная задача достигается получением средства Чеблин - СК-1 путем экстрагирования очищенным керосином плодов грецкого ореха молочной спелости.

Способ осуществляется следующим образом.

Пример 1. 100 кг плодов грецкого ореха в стадии молочной зрелости измельчаются, полученная масса заливается 100 кг очищенного авиационного керосина. Выдерживают в течение 40 дней в темном месте при комнатной температуре не выше 21^oC с периодическим перемешиванием. Полученную смесь отфильтровывают, из оставшейся части отжимают жидкую часть, которую вновь фильтруют, первую и вторую порцию экстракта объединяют. Затем проводят спектрофотометрические, хроматографические анализы, обеспечивающие количественное определение каротина, хлорофилла, орехового масла.

Пример 2. 100 кг плодов грецкого ореха в стадии молочной зрелости измельчаются, полученная масса заливается 150 кг керосина для медицинского использования. Выдерживают 40 дней при комнатной температуре в темном месте. Полученную смесь отфильтровывают, из оставшейся части отжимают жидкую часть, которую вновь фильтруют, первую и вторую порцию экстракта объединяют.

Пример 3. 100 кг плодов грецкого ореха в стадии молочной зрелости измельчаются, полученная масса заливается 80 кг керосина для медицинского использования. Выдерживают 40 дней при комнатной температуре в темном месте. Полученную смесь отфильтровывают, из оставшейся части отжимают жидкую часть, которую вновь фильтруют, первую и вторую порцию экстракта объединяют.

Сырье заготавливается в мае, отмывается от грязи, пыли, посторонних включений, отделяется от плодоножек, проветривается на воздухе н мелко измельчается.

Чеблин СК-1 оказался эффективным при стробилярном эхинококкозе собак и эхинококкозе поросят. Трехнедельный курс лечения предлагается и для людей, больных эхинококкозом. При стробилярном эхинококкозе разовая доза препарата Чеблин-СК-1 составила 1 г/кг, при альвеолярном эхинококкозе крыс, гидатидозном эхинококкозе поросят и человека, первая неделя лечения соответственно 0,1 г/кг для крыс и 0,05 г/кг для поросят и людей, вторая неделя лечения - 0,26 г/кг и 0,1 г/кг, третья неделя 0,34 г/кг и 0,25 г/кг.

Противоэхинококкозная (антигельминтная) эффективность установлена в эксперименте, 22 собаки, зараженные стробилярным эхинококкозом, подтвержденным специальными гельминтологическими исследованиями, разделены на две группы: 8 контрольных, 14 получили внутрь по 4 г/кг препарата Чеблина СК-1. Через 5 дней после дачи препарата собаки вскрыты, их кишечники обследованы методом полных гельминтологических вскрытий по К.И.Скрябину. В кишечнике контрольных собак обнаружено от 64 до 620 экземпляров эхинококков (все заражены) в среднем 274,8 ± 69.8 экземпляров половозрелых эхинококков. Антигельминтная эффективность достигла 100%.

Чеблин СК-1 проявил высокую антигельминтную эффективность при экспериментальном альвеолярном эхинококкозе хлопковых крыс. 21 хлопковая крыса использованы в эксперименте. Животные заражены по известной методике [3, 4]. К началу лечения длительность экспериментальной инвазии составила 10 дней, когда у 5 вскрытых крыс масса паразитарных ларвоцист колебалась от 0,09 до 0,49 г и в среднем составила 0,29 ± 0,07г. В дальнейшем 8 зараженных крыс получали препарат Чеблин-СК-1 в течение трех недель в постепенно возрастающих суточных дозах.

Леченных и контрольных крыс усыпили через 40 дней после заражения. Исследования и подсчеты провели по известной методике [3]. Индексы торможения роста паразитарных ларвоцист составили ИТРПЛ-1=90,23%. ИТРПЛ-2=92,15%, ИТРПЛ-3= 92,74. Деструкция всех зародышевых элементов выявлена у 75-95% паразитарных ларвоцист среди всех выявленных у каждого леченного животного. У контрольных крыс все зародышевые элементы жизнеспособны морфологически не изменены.

При гидатидозном эхинококкозе активность препарата СК-1 установлена на 26 поросятах, разделенных на 4 группы: первая и четвертая по 5, вторая третья - по 8 животных. В месячном возрасте поросята 1, 2, 3 группы были заражены протосколексами и ацефалоцистами однокамерного эхинококка от прооперированного больного. Внутрибрюшинно каждому поросенку было введено по 5000 протосколексов и ацефалоцист (вместе взятых) от однокамерного человеческого эхинококка. Поросята четвертой группы в эксперименте не заражались и не получали препарат Чеблин СК-1.

На 60-й день поросята первой группы были убиты с целью определения исходной массы развившихся к этому сроку паразитарных ларвоцист (ПЛ.), которая варьировала от 1,8 до 9,7 г и составила в среднем 6,3 ± 1,4 г. Поросята 3 группы, начиная с 61-го дня с момента заражения, получали с кормом препарат Чеблин - СК-1 в течение трех недель в постепенно возрастающих суточных дозах. Средняя суточная доза в течение всего курса лечения составила 0,31 г/кг, а общая курсовая доза препарата достигла в среднем 2,8 г/кг. 8 поросят второй группы составили контрольную группу - препарат не получали.

На 91 день после заражения животные были вскрыты. Все поросята 2 и 3 групп оказались зараженными эхинококками. Исследования животных проведены по методикам Михайлицина Ф.С. с соавт. [3]. Масса ПЛ. на одно животное у нелеченных составила 164,60 ± 22,60 г, а у леченных 15,00 ± 0,03 г (разность сравниваемых величин статистически высоко достоверна, P.<0,01). У леченных животных выраженная деструкция зародышевых элементов выявлена у 75-85% паразитарных ларвоцист. У нелеченных животных ларвоцисты были хорошо развиты, а протосколексы жизнеспособны, без проявлений деструкций.

Введение поросятам препарата Чеблин СК-1 в течение трех недель не вызвало побочных действий и проявления токсичности, наоборот, под воздействием нашего препарата шла нормализация роста и развития поросят, нормализация показателя общего анализа крови, содержания в сыворотке крови белков и белковых фракций, а также свободных аминокислот.

Токсичность препарата изучена на аутбредных 142-х мышах и 82-х крысах, на 78-х цыплятах 3-месячного возраста породы ала-тау и 30 цыплятах породы хайсигс-браун, на 30 поросятах месячного возраста, на 14 собаках 5- месячного возраста. Эмбриотоксичность и тератогенность препарата была изучена на 190 девятидневных куриных эмбрионах, на 6-ти беременных свиньях с полученным от них приплодом в 27 голов.

Установлено, что МЛНД препарата Чеблин СК-1 для белых мышей 19 г/кг, для белых крыс - 22 г/кг. По сравнению с белыми мышами и крысами куры более чувствительны к препарату: ЛД 50= 14,0 ±1,4 г/кг, при Р=0,05 t=2,06. Препарат не обладает тератогенным свойством. Препарат, введенный в желточный мешок 9-дневным куриным эмбрионам в дозах 0,5 -5,0 - 50,0 мг/кг, не проявил эмбриотоксичности и тератогенности. Длительное введение подопытным животным в два, три раза превышающие курсовые дозы препарата не вызывало токсического и побочного действия, что подтверждено патогистологическими и патоморфологическими и гематологическими исследованиями.

Препарат Чеблин СК-1 является малотоксичным при внутрижелудочном введении мышам, крысам, курам, собакам, поросятам. Терапевтический индекс более 350.

В хирургических клиниках Самаркандского государственного медицинского института им. И.П.Павлова препарат прошел испытание на добровольцах. К испытанию были допущены 186 больных эхинококкозом с различной локализацией, которые до операции принимали Чеблин СК-1. В качестве контроля было 26 больных эхинококкозом, которые не принимали препарат. Всем больным до начала лечения и в конце курса наряду с общепринятыми проводились и специальные исследования:
1. Исследование сыворотки крови реакцией сколексопреципитации, постановка реакции латексагглютинации и непрямой гемагглютинации.

2. Исследование периферической крови, включающие определение количества эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, лейкоцитарную формулу и СОЭ.

3. Биохимические исследования: общий белок, тимоловая проба, билирубин, мочевина, глюкоза, серомукоиды, оксипролин, белковые фракции сыворотки крови, свободные аминокислоты сыворотки крови и мочи.

4. Иммунологические исследования: Т-лимфоциты, киллеры, - супрессоры, иммунные комплексы антиидиотипы (АПФ), иммунные лейкоциты, нейтрофилы, эозинофилы, лимфоциты, моноциты.

После проведения курса лечения больных препаратом Чеблин СК-1 проведено тщательное изучение паразитарных ларвоцист эхинококков, извлеченных хирургами во время операции. У леченных больных отмечалась в 85-95 случаях деструкция с гибелью зародышевых элементов паразитарных ларвоцист у 26 больных (контрольная группа), не получавших препарат, но оперированных по поводу эхинококкоза, в ларвоцистах содержались жизнеспособные, морфологически не измененные зародышевые элементы.

Назначение препарата больные перенесли без жалоб и клинических осложнений. Установлено, что препарат больными переносился без побочных реакций, оказывает благоприятное воздействие на больных, восстанавливает белково-аминокислотный состав у больных эхинококкозом, улучшается иммунный статус, что не отмечалось у контрольных больных
На 17-ти добровольцах, больных эхинококкозом, изучено противоэхинококкозное действие препарата Чеблин-СК-1 в возрастающих дозах в трехнедельном курсе.

Пример 1. Больная К. , 29 лет. Диагноз: эхинококкоз головного мозга и левого легкого. Длительность заболевания 2 года. В клинической картине преобладают жалобы на головные боли, тошноту, потерю аппетита, нарушение координации движения.

Реакция сколексопреципитации (РСКП), латекс-агглютинации, непрямой гемагглютинации положительные.

Компьютерной томографией головы обнаружена кольцевидная, с четкими границами зона повышенной плотности в области полюса левой лобной доли мозга диаметром в 14 мм, внутри полюса пониженная плотность, симметрично расположено подобное образование в правой лобной доле мозга диаметром в 12 мм. Кроме того, в различных участках мозга обнаружены 4 шаровидных образования с плотностью, близкой к плотности воды, диаметром 4-5 мм.

На рентгенограмме в верхней доле левого легкого четко прослеживается эхинококк шаровидной формы, диаметром около 30 мм.

Больной проведено трехнедельное лечение препаратом Чеблин СК-1. Больная препарат перенесла хорошо, лишь только ощущала неприятный запах. После проведенного курса лечения общее состояние больной начало улучшаться, тошнота и головные боли исчезли, восстановилась координация движения.

Через 6 месяцев курс лечения повторили. Общее состояние больной резко улучшилось. Через год после проведенного второго курса лечения больная родила девочку массой 3600 г, девочка нормально растет и развивается.

Через два года, после проведенного второго курса лечения сделаны компьютерная томография мозга и рентгенография легкого. На томограмме в местах выявления эхинококков обызвествленные участки, на рентгенограмме в легком спавшийся обызвествленный эхинококк.

Иммунологические реакции: РСКП, латексагглютинации, непрямой гемагглютинации отрицательные.

Пример 2. Больная М. 36 лет. Диагноз: множественный рецидивный эхинококкоз легких. Длительность заболевания 6 лет. Иммунологические реакции: РСКП, латексагглютинации, непрямой гемагглютинации положительные.

Больная сначала оперирована по поводу эхинококкоза селезенки, во время операции произошел разрыв ларвоцисты величиной 7х8 см. Через четыре года больную оперировали по поводу эхинококкоза печени. Спустя год после операции, выявлено на рентгенограмме множественное поражение эхинококками легких: в левом легком 14 эхинококков величиной 6-8 мм в диаметре, в правом легком 11 эхинококков такой же величины. Больная деморализована. Проведен курс психотерапии, организована встреча с больными, которые выздоровели. Больная самовольно увеличила дозу препарата вдвое. Курс лечения больная перенесла хорошо. Показатели общего анализа крови и мочи остались на исходном уровне. Биохимические показатели крови и мочи также остались без изменений. Через 6 месяцев проведен второй курс лечения (двойная доза препарата). Лечение прошло без осложнений. Общее состояние здоровья больной стало улучшаться.

Через два года после второго курса лечения выполнены контрольные исследования, которыми на рентгенограмме легкого обнаружены обызвествленные участки. Иммунологические реакции: РСКП, латексагглютинации, непрямой гемагглютинации, отрицательные. Наступило выздоровление больной.

На основании проведенных испытаний установлено, что препарат Чеблин СК-1 переносится больными легко, без побочных реакций, оказывает благоприятное воздействие на больных эхинококкозом, сначала происходит торможение роста паразитарных ларвоцист с деструкцией и гибелью 85-95% зародышевых элементов ларвоцист с последующей гибелью паразитов. После проведения курса лечения у больных эхинококкозом восстанавливается белково-аминокислотный обмен.

Список литературы
1. Коваленко Ф.П., Переверзева Е.И., Джабарова В.И. и др. /Патент РФ N 1813442 опубликовано в 17 бюль. за 1993 г/. Средство для подавления ларвального эхинококкоза у животных.

2. Михайлицин Ф.С., Коваленко Ф.П., Козырева Н.П. и др. Изыскание новых противопаразитарных средств. 17. Синтез и изучение противоэхинококкозной активности нового препарата Г-1697// Мед. паразитология и паразитарные болезни. - 1996. - N 3 - С. 38-42.

Изобретение относится к медицине. Экстрагируют очищенным керосином плоды грецкого ореха в стадии молочной спелости при соотношении сырье : экстрагент 1 : 0,8 - 1 : 1,5. Способ позволяет получить более активное и менее токсичное средство.

Способ получения средства для лечения ларвального и стробилярного эхинококкозов, заключающийся в экстракции очищенным керосином плодов грецкого ореха в стадии молочной спелости при соотношении сырье : экстрагент 1:0,8 - 1:1,5.