СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ АЛЕУТСКОЙ БОЛЕЗНИ НОРОК Российский патент 1995 года по МПК A61K35/78 A61K35/78 A61K31/00 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к средствам для профилактики и лечения алеутской болезни норок.

Цель изобретения расширение ассортимента средств для пpофилактики и лечения алеутской болезни норок.

Поставленная цель достигается применением тритерпеновых гликозидов-кукумариозидов в качестве средства для профилактики и лечения алеутской болезни норок. Предлагается применять как суммарный препарат тритерпеновых гликозидов-кукумариозидов (КМ), так и индивидуальный гликозид-кукумариозид (КМ-2).

Сумму тритерпеновых гликозидов получают из отвара голотурии Cucumaria joponica, который фильтруют для удаления механических примесей, концентрируют, затем осаждают белки 96% этиловым спиртом и отделяют осадок центрифугированием. Водно-спиртовый раствор упаривают до полного удаления спирта и экстрагируют гликозиды н-бутиловым спиртом. Сухой остаток растворяют в минимальном количестве 96% этилового спирта, помещают в реактор и осаждают гликозиды десятикратным количеством ацетона. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат. Выход гликозидов составляет 0,01% от веса исходного сырья, т.е. 0,2% в пересчете на содержание твердой фазы в отваре. Контроль за наличием третерпеновых гликозидов-кукумариозидов в полученных препаратах и фракциях проводят методом тонкослойной хроматографии на закрепленном слое силикагеля КСК в системе растворителей хлороформ-метанол 60:30 (или 65:35) вода до насыщения. Проявитель концентрированная серная кислота. На хроматограммах, как минимум проявляется 4 синих пятна R_f 0,22, R_f 0,26, R_f 0,32, R_f 0,40.

Основными компонентами суммы являются: гликозид I (КМ-2) и гликозид II, минорными компонентами соединения III и IV (cм. чертеж).

КМ-2 выделяют из спиртового экстракта голотурии Cucumaria japonica последовательно колоночной хроматографией на силикагеле в системе СНС₃ С₂Н₅ОН Н₂О (100 100 17) и полихроме (Н₂О 13% С₂Н₅ОН). Свойства КМ-2: т.пл. 245-247^о (из спирта), [α]_D²⁰- 68^о (С 2,0 пиридин).

Предлагаемое средство оказывает профилактическое и лечебное действие при алеутской болезни норок.

Действие КМ на антителообразование при алеутской болезни оценивали по динамике нарастания титра антител при экспериментальном заражении вирусом алеутской болезни. Норок весом около 1 кг заражали внутрибрюшинным введением 10⁶ИД (инфицирующих доз) штамма П-1 вируса алеутской болезни в 1 мл физиологического раствора. Тритерпеновые гликозиды-кукумариозиды вводили подкожно (в 1 мл физ. р-ра) в дозе 1 мкг на кг веса животного. Применяли следующие схемы введения:
лечебная схема: одновременное введение кукумариозидов подкожно и вируса алеутской болезни внутрибрюшинно;
профилактическая схема: однократное подкожное введение кукумариозидов за 3 дня до заражения вирусом алеутской болезни.

Титры антител к вирусу алеутской болезни определяли с помощью реакции иммуноэлектроосмофореза (РИЭОФ) в разные сроки после экспериментального заражения. Результаты представлены в табл.1.

Из таблицы видно, что несмотря на чрезвычайно высокую заражающую дозу вируса алеутской болезни, под действием кукумариозидов отмечается более быстрый антительный ответ через 7 сут после заражения, а также сдерживание выработки специфических антител на 14-е и 30-е сут после заражения.

Исследование лечебного эффекта КМ проводили на стадии норок, пораженном алеутской болезнью. Опыты проводили на 2680 самках бригады норок. В каждом из 10 отделений этой бригады формировали опытную группу самок, получавших внутримышечные инъекции КМ в дозе 1 мкг в 1 мл физиологического раствора. Препарат вводили однократно за две недели до начала гона и повторно в I-й половине беременности. Контрольные звери, находившиеся в тех же отделениях, не получали инъекций КМ. Действие препарата оценивали по показателям щенения опытных и контрольных групп (табл.2). В 9-ти из 10-ти отделений бригады отмечено повышение плодовитости и регистрационного выхода щенков на одну самку. Под плодовитостью понимают отношение количества родившихся жизнеспособных щенков к общему количеству самок отделения, под регистрационным выходом отношение количества щенков на срок регистрации к общему количеству самок в данном отделении. Как правило регистрация проводится на 1 июля. Суммарный эффект по бригаде выражается повышением обоих показателей на 1,3 щенка. Также отмечено снижение на 5% дорегистрационного отхода, т.е. отношения павших щенков в период с рождения до времени их регистрации к числу родившихся щенков.

Исследование лечебного эффекта КМ-2 проводили на четырех группах норок: в I-ую и 2-ую группы входили по 100 больных самок, имеющих положительную реакцию на наличие антител к вирусу алеутской болезни, в 3-ю и 4-ю группы на 100 здоровых самок. Зверям I-й и 3-й группы вводили КМ-2 в дозе 1 мкг на норку в 1 мл физиологического раствора однократно, подкожно за 2 недели до гона. Норки 2-ой и 4-ой групп не получали инъекций КМ- 2, т.е. были взяты в качестве контроля. Благополучные звери из 3-й и 4-й групп взяты с целью выяснения, действует ли препарат только на больных вирусным плазмоцитозом норок, либо он имеет влияние на репродуктивные способности норок. Эффект действия тритерпенового гликозида КМ-2 по сравнению с контролем приведен в табл.3.

Применение данного препарата в группе больных норок увеличило регистрационный выход на 1,5 щенка при незначительном увеличении 0,05 щенка в здоровой группе. Тем самым, выход щенков на основную самку в I-й группе, равный 4,6 щенка, практически достиг уровня соответствующего показателя здоровых норок, составляющего 4,7 щенка. В случае применения КМ-2 в I-й и 3-й группах возросла плодовитость норок по сравнению с контрольными группами, причем в группе больных самок этот показатель был более значителен 0,8 щенка, чем в группе здоровых 0,2. В группе больных норок, получивших КМ-2, отмечено снижение на 18% дорегистрационного отхода щенков, в то время, как различия в группе здоровых зверей статистически недостоверны.

Изобретение относится к ветеринарии и касается средств для профилактики и лечения алеутской болезни норок. Применяют кукумариозид - суммарную фракцию тритерпеновых гликозидов, полученных из отходов производства дальневосточной голотурии - кукумарии японской. Препарат вводят подкожно в 1 мл. физ. раствора в дозе 1 мгк/кг массы животного однократно при лечении за 2 недели до начала гона и повторно в 1-й половине беременности, при профилактике - однократное подкожное введение в той же дозе. 1 ил.

Применение тритерпеновых гликозидов-кукумариозидов в качестве средства для профилактики и лечения алеутской болезни норок.