СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ АЛЕУТСКОЙ БОЛЕЗНИ НОРОК Российский патент 2021 года по МПК A61K35/64 A61K38/04 A61P31/12 A61P37/02 

Изобретение относится к ветеринарии, звероводству и иммунофармакологии и может найти применение для лечения алеутской болезни норок.

Алеутская болезнь норок (АБН) является вирусным заболеванием семейства куньих, которая вызывает большой падеж животных. АБН распространена в США, Канаде, Норвегии, Швеции, Финляндии, Дании, Великобритании и др. В России зарегистрирована во всех областях, где разводят норок

Алеутская болезнь норок (вирусный плазмоцитоз норок) - контагиозная, медленно развивающаяся инфекционная болезнь, характеризующаяся распространенной плазмоклеточной пролиферацией (плазмоцитозом), гипергамма-глобулинемией, явлениями геморрагического диатеза, артериитом, гепатитом, анемией и прогрессирующим истощением зверей; это иммунологическая болезнь норок, возникающая в следствии персистентной вирусной инфекции. Инкубационный период длится от 6 до 150 дней, чаще 10-15 дней. Острое течение АБН составляет от 10 до 30 дней, хроническое от 2 до 24 месяцев с медленным неизбежным прогрессирующим развитием и летальным исходом.

Вызывающий АБН вирус относится к семейству Parvoviridae и роду Parvovirus. Вирионы имеют изометрическую форму, диаметром 18-22 нм и не имеют суперкапсидной оболочки. Они состоят из капсида кубического типа симметрии и генома. Геном представлен односпиральной линейной молекулой ДНК.

Вирус устойчив во внешней среде. В необработанных тканях больных норок длительно сохраняет инфекционность. Не разрушается под действием высоких температур, формалина. Низкие температуры консервируют вирус. Устойчив к органическим растворителям и клеточным ферментам (протеазе, нуклеазе).

Заражение животных происходит как горизонтальными, так и вертикальным путями. Вирус может передаваться контактым, половым, алиментарным и аэрогенным путями, переноситься насекомыми. На шерсти и клетках сохраняет инфекционную активность в течении 40 суток.

Клинические признаки болезни обнаруживают незадолго до гибели животного через 1-24 месяца после заражения. Характерными из них являются - прогрессирующее исхудание, периодическое кровотечение из носа и рта (на слизистой оболочке ротовой полости - мелкие кровоточащие язвочки), усиливающаяся жажда (полуденная), анемия, лихорадка. Зверьки малоподвижны - "сонливый вид", шерсть взъерошена тусклая, линька задерживается. Кончик носа и мякиши пальцев у больных норок приобретают желтый цвет. У зверьков диарея, фекалии дегтеобразные. У отдельных особей наблюдают признаки поражения нервной системы - нарушается равновесие, координация движений, развиваются парезы и параличи (чаще тазовых конечностей). Возможно осложнение вторичными инфекциями.

У самок, заразившихся до периода гона, типичными считают аборты, пустование, рассасывание плодов, потерю материнского инстинкта. У некоторых зверей клинические признаки не появляются в течение нескольких лет, но показатели щенения резко снижаются.

В течении и исходе Алеутской болезни важное значение имеют поражения почек. Особенностью алеутской болезни норок является тот факт, что начавшийся первичный цикл продолжается до конца жизни норок, так как сформировавшиеся антитела не способны нейтрализовать внедрившийся вирус. Это обеспечивает персистентную циркуляцию вируса в организме и непрекращающееся формирование иммунных комплексов.

Прогноз неблагоприятный. При бессимптомной форме погибает до 20% норок: при прогрессирующей - в течение первого года после заражения - более 50%, а на второй год - до 80%. Чаще болезнь регистрируют среди молодняка норок летом или осенью.

Для АБН специфические средства профилактики и лечения отсутствуют. Практически в случае установления диагноза АБН показано только симптоматическое лечение с применением антибиотиков, витаминов, белковых гидролизатов, иммуносупрессоров, гормонов. С распространением болезни борются, в основном, путем уничтожения зараженного поголовья животных и сжигания использовавшегося инвентаря.

Таким образом, создание эффективного способа профилактики и лечения АБН, который можно было бы внедрить в звероводческую практику крайне актуально.

Количество работ по созданию препаратов для лечения АБН крайне незначительно. Так Полетаевым А.Б. и Будыкиной Т.С. предложен вакцинный препарат для профилактики АБН (патент РФ 2218354 «Способ специфической профилактики алеутской болезни норок»). В качестве вакцинного препарата используются антиидиотипические антитела или их F(ab)-фрагменты, являющиеся иммунохимическими аналогами основных антигенов вирусов АБЕ. Технический результат патента – существенное снижения заболеваемости и падежа норок.

Сотрудники СПб Государственной Академии Ветеринарной Медицины А. Ф. Кузнецов и В. М. Коротков для лечения АБН испытали противовирусный препарат Витурид, действующим началом которого является ртутьорганический комплекс. Проведенные исследования на маточном и убойном поголовье молодняка при АБН подтвердили положительное влияние Витурида (перорально) на биохимические процессы, морфологию клеток и тканей. В течение 3-4 месяцев от АБН было оздоровлено 40% норок, что свидетельствует о достаточно активной иммунологической перестройке организма зверей под действием препарата. Однако Витурид с настоящее время не производится.

Имеется патент RU 2036654, опубл.: 09.06.1995. (Гришин Ю.И., Ковалевская А.М., Стоник В.А., Авилов С.А., Влазнев В.П,. Слугин В.С. «Средство для профилактики и лечения алеутской болезни норок»). Авторами предложено использование тритерпеновых гликозидов-кукумариозидов в качестве средства для профилактики и лечения АБН. Сумму тритерпеновых гликозидов получают из природного сырья - отвара голотурии Cucumaria joponica путем ряда физико-химических процедур. Эксперименты на самках норок показали, что применение предложенного средства позволяет увеличить выход щенков в сравнении с контрольной группой. Данное решение может быть принято как прототип.

Существует большой круг противовирусных препаратов, эффективно применяемых для лечения заболеваний у людей. Однако сведений об их использовании для лечения АБН не найдено.

Одним из применяемых в клинической практике противовирусных лекарственных средств является препарат «Аллокин-альфа» (Р N002829/01-210610). «Аллокин-альфа» эффективен при терапии пациентов страдающих хронической папилломавирусной инфекцией, вызванной онкогенными вирусами папилломы человека; в комплексной терапии хронического рецидивирующего герпеса 1 и 2 типов; в составе комплексной терапии среднетяжелой (желтушной) формы острого гепатита В.

Активным началом этого препарата является линейный олигопептид гистидил-глицил-валил-серил-глицил-гистидил-глицил-глутаминил-гистидил-глицил-валил-гистидил-глицин Аллоферон. Аллоферон первоначально был выделен из природного объекта - тканей иммунной системы личинок мух-каллифорид (Calliphora vicina, семейство Calliphoridea) — так называемых «хирургических личинок», имеющих давнюю историю применения в медицине. В настоящее время Аллоферон производится синтетически, методами классического пептидного синтеза. По своей химической структуре и свойствам синтетический продукт полностью идентичен природному Аллоферону, выделяемому из тканей личинок. Аллоферон зарегистрирован в качестве фармацевтической субстанции (Р N002830/02-240510) и производится предприятиями России.

Задачей изобретения является способ лечения алеутской болезни норок с использованием олигопептида Аллоферон или препаратов на его основе.

Техническим результатом изобретения является способ, позволяющий обеспечить снижения заболеваемости и падежа норок.

Указанный технический результат достигается за счет того, что заявлен способ лечения алеутской болезни норок, при котором терапия осуществляется путем подкожных инъекций противовирусного и иммуномодулирующего средства, отличающийся тем, что в качестве противовирусного и иммуномодулирующего средства используется олигопептид Аллоферон, который вводится двукратно с интервалом 6 дней в количестве 0,5 мг на одну инъекцию.

Предпочтительно, что в качестве препарата содержащего Аллоферон используют лекарственное средство «Аллокин-альфа».

Предпочтительно, что подкожные инъекции противовирусного и иммуномодулирующего средства осуществляют норкам в возрасте от 30 дней и старше.

Осуществление изобретения

Эффективность предложенного способа подтверждено данными эксперимента, который был проведен в одном из звероводческих хозяйств Ленинградской области. Планирование работ осуществлялось сотрудниками Санкт-Петербургской Государственной Академии ветеринарной медицины (СПбГАВМ). Иммунологические исследования сыворотки крови норок проводили в клинико-биохимической лаборатории СПбГАВМ. Начало эксперимента - 27 мая 2019 года, окончание - 10 декабря 2019 года, длительность 6,5 месяца.

В опытах использовали «Голубых» норок (стандарт). Зверей содержали в двухрядных шедах, с продольным рабочим проходом, которые представляют собой навесы с двухскатной крышей, с клетками, располагающимися дверцами внутрь. Шеды оборудованы водопроводом, электрическим освещением. Кормление и поение зверей проводили, согласно существующей технологии, вручную. Кормили зверей согласно стандартным рационам.

Было сформировано 2 группы норок, у которых по результатам диагностики был выявлен вирус АБН: 1 - подопытная группа - 5 самцов; 25 самок, 2 - контрольная группа - 5 самцов; 25 самок. Возраст норок 30 дней.

Норкам 1 группы вводили подкожно 0,5 мл раствора Аллоферона 2-х кратно с интервалом в 6 дней (доза Аллоферона 0,5 мг). Для приготовления раствора ампулу препарата «Аллокин-альфа», содержащую 1 мг Аллоферона разводили в 1 мл физ. раствора (0.9% NaCl).

Норкам второй группы (контроль) вводили 0,5 мл стерильного физраствора.

Оценку состояния норок проводили по клиническим, лабораторным (биохимическим, молекулярно-генетическим, морфологическим) исследованиям и хозяйственным показателям.

Клинические исследования. Учитывали клиническое состояние, подвижность зверей, аппетит, массу тела и другие показатели. Для осмотра слизистых оболочек зверей фиксировали общепринятыми методами, раскрывали ротовую полость при помощи тесемок. Исследование слизистых оболочек в динамике эксперимента проводили выборочно по 3 - 5 норок из каждой подопытной и контрольной групп. По результатам осмотра слизистые оболочки ротовой полости опытных норок имели бледно-розовую окраску. Цвет слизистых оставался без изменений в течение всего эксперимента.

Норки подопытной были очень подвижными в течение всего эксперимента по сравнению с норками контрольной группы. Они живо реагировали на внешние раздражители (появление людей у клетки, окрик, стук, раздача корма). Среди норок контрольной группы были особи со сниженной реакцией на раздражители. В целом животные из группы контроля к окончанию исследования демонстрировали признаки недомогания – вялость, сниженный аппетит, сонливость. Телосложение подопытных норок было крепким и пропорциональным, в отличие от животных контрольной группы. Масса тела контрольных норок в сравнении с подопытными была снижена. Установлено (табл. 1), что средний вес в группе самок, получавших препарат, был на 15.1% выше по сравнению с контрольной группой. У самцов средний вес в подопытной группе составил 2 570 г, по сравнению с 2 250 г в контрольной группе, что на 12.5% выше.

Таблица 1.

Показатели веса норки на 01 октября 2019 года

Контрольная группа Расцветка Самки Самцы Кол-во Общий вес Средний вес Кол-во Общий вес Средний вес Серго 25 33 750 5 11 250 2 250 Подопытная группа Серго 25 39 750 1 590 5 12 850 2 570

Сохранность животных в подопытной группе к концу эксперимента составила 100%. В контрольной группе 79%.

На основе клинических наблюдений очевидно, что введение норкам препарата Аллокин-альфа оказывало положительное влияние на их организм.

Биохимические исследования крови.

В крови у норок контрольной и подопытной групп измеряли общий белок, г/л; альбумин, г/л; глобулин, г/л; АЛТ, АСТ (табл.2, Фиг.1).

В результате биохимических исследований крови выявлены характерные изменения, заключающихся в том, что при АБ у норок контрольной группы значительно повышается уровень глобулинов, мочевины и креатинина по сравнению с группой норок получавших препарат.

Содержание общего белка в крови норок увеличилось за счет развития гипергаммаглобулинемии. При этом произошло перераспределение белков, резкое повышение уровня глобулинов и незначительное снижения альбуминов. Это говорит о том, что в крови присутствует большого количества белковых соединений – антител. Они формируют иммунные комплексы вирус-антитело, которые фиксируются в клубочках почек, вызывая развитие гломерулонефрита. В свою очередь, развитие почечной недостаточности ведет к повышению содержания конечных продуктов обмена веществ (мочевина и креатинин). При фагоцитирование иммунных комплексов ретикуло-эндотелиальной системой, вирус освобождается в ядрах макрофагов печени и вызывает ее разрушение. Деструктивные изменения в печени вызывают увеличение количество аспартатаминотранферазы (ACT) и аланинаминотрансферазы (АЛТ).

Результаты биохимических исследований крови показаны на Фиг.1.

Деструктивные изменения параметров крови, выявленные в исследовании, в значительно большей степени присущи норкам контрольной группы. Особенно велика разница между группами в концентрации мочевины и креатинина, что свидетельствует о положительном влиянии Аллоферона на функционирование организма животных.

Молекулярно-генетические исследования. Исследования ПЦР методом гель-электрофореза подтверждают наличие возбудителя Алеутской болезни норок у всех животных находящихся в эксперименте.

Морфологические исследования. При изучении морфологии органов в почках животных контрольной группы обнаружены интерстициальный нефрит, гломерулонефрит и отечность клубочков (см. Фиг.2, где показан гломерулонефрит в почках самок контрольной группы. Ув. 40х.Окраска Г-Э.). В мозговом веществе встречаются очаговые, местами сливающиеся кровоизлияния. Так же имеются микроскопические участки кальциноза (см. Фиг. 3, где показана Кровоизлияния и участок кальциноза в почках самок контрольной группы. Ув. 10х. Окраска Г-Э.). В почках выявлена лимфо-плазмоцитарная инфильтрация (см. Фиг.4, где показаны плазмоциты в почках самок контрольной группы. Ув. 1000х.Окраска Г-Э.).

В подопытной группе у самцов и самок наблюдается полнокровие кровеносных сосудов, очаги кровоизлияний отсутствуют, гломерулонефрит легкой степени, лимфо-плазматическая инфильтрация менее выражена.

В печени животных контрольной группы обнаружена тотальная гидропическая дистрофия гепатоцитов (см. Фиг.5, где показана гидропическая дистрофия гепатоцитов у самок контрольной группы. Ув. 40х. Окраска Г-Э.). Встречается умеренная гиперплазия эпителия желчевыводящих протоков. Выявлены очаговые лимфо-плазмацитарные инфильтраты не только стромы, но и желчевыводящих протоков (Фиг.6, где показаны плазмоциты в печени самок контрольной группы. Ув. 100х. Окраска Г-Э.). Синусоидные капилляры кровенаполнены.

В подопытной группе у самцов и самок изменения менее выраженные.

В яичниках основу коркового и мозгового вещества составляют интерстициальные клетки, которые по строению сходны с эпителиальными. Они располагаются тяжами, напоминая выводные протоки и концевые отделы трубчато-альвеолярных желез. В контрольной группе выявлено большое количество артретических тел (погибших ооцитов). Обнаруживаются примордиальные, первичные, вторичные и третичные фолликулы (см. Фиг. 7, где показаны примордиальные, первичные и вторичные фолликулы яичников самок контрольной группы. Ув. 10х. Окраска Г-Э.). У одного животного выявлена киста яичника.

В подопытной группе у самок возрастает число примордиальных фолликулов при снижении атретических. Лимфоцитарно-плазматическая инфильтрация менее выражена (см. Фиг.8, где показаны примордиальные и первичный фолликулы яичников самок подопытной группы. Ув. 10х. Окраска Г-Э). (Приблизительно в 2,5 – 3 раза). Присутствуют микроскопические очаги лимфо - плазмацитарной инфильтрации. В целом, яичники самок подопытной группы выглядят значительно более сохранившимися.

В результате проведенных исследований морфологии органов, можно сделать вывод, что изменение в контрольной группе характерно для алеутской болезни норок. В подопытной группе изменения менее выражены и более характерны для выздоравливающих.

В результате проведенных исследований установлено, что применение Аллоферона («Аллокин-альфа») позитивно влияет на физиологическое состояние зверей, способствует улучшению процессов пищеварения у больных норок, приближая его к физиологически нормальному, оказывает благоприятное влияние на морфологические и биохимические показатели крови у больных норок.

Хозяйственные показатели. Подопытная группа, в которой применялся Аллоферон, визуально отмечалась увеличением густоты меха, при продувке волоса на пробор свободных участков кожи не было обнаружено. Волоски были прочными и эластичными. При поглаживании отмечали шелковистость шерсти. Окрас был равномерным и однотонным по всему телу с явно выраженным блеском.

Таким образом, 2-х кратное введение 0,5 мг препарата Аллоферона по 0.5 мл подкожно через 6 дней в возрасте 30 дней положительно влияет как на симптоматику норок больных алеутской болезнью, так и на конечные хозяйственные показатели.

Настоящее изобретение относится к ветеринарии и иммунологии и касается лечения алеутской болезни норок. Для этого животным подкожно вводят олигопептид аллоферон в дозе 0,5 мг на одну инъекцию двукратно с интервалом 6 дней. Способ обеспечивает эффективное лечение заболевания и снижение падежа норок за счет противовирусных и иммуномодулирующих свойств аллоферона. 2 з.п. ф-лы, 8 ил., 2 табл.

1. Способ лечения алеутской болезни норок, при котором терапия осуществляется путем подкожных инъекций противовирусного и иммуномодулирующего средства, отличающийся тем, что в качестве противовирусного и иммуномодулирующего средства используется олигопептид Аллоферон, который вводится двукратно с интервалом 6 дней в количестве 0,5 мг на одну инъекцию.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве препарата, содержащего Аллоферон, используют лекарственное средство «Аллокин-альфа».

3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что подкожные инъекции противовирусного и иммуномодулирующего средства осуществляют норкам в возрасте от 30 дней и старше.