СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ ОБЪЕКТОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ Российский патент 1995 года по МПК C12Q1/02 G01N33/18 

Изобретение относится к токсикологии и может быть использовано при оценке экологической и пищевой опасности объектов внешней среды, например токсичности кормов и воды, используемых для сельскохозяйственных животных.

Усиливающаяся во всем мире интенсификация промышленного и сельскохозяйственного производства, зачастую недостаточно хорошо технологически отлаженного, загрязняющего окружающую среду отходами производства, поставила человечество перед необходимостью жесткого контроля объектов внешней среды на токсичность.

Среди различных способов определения токсичности объектов окружающей среды (химических, биохимических, биологических) исследования с помощью культур инфузорной занимают заметное место.

Известен способ определения токсичности кормов и воды, используемых для сельскохозяйственных животных и птиц с помощью Tetrahymena pyriformis [1, 2]
Однако эта инфузория способна существовать лишь в условиях постоянного культивирования. При этом особи в культуре находятся на различных стадиях развития и могут неодинаково реагировать на токсины. Использование такой культуры может дать искаженные, недостоверные результаты. Чтобы этого не происходило, исследователи вынуждены перед использованием этой инфузории в токсикологических целях синхронизировать ее культуру путем неоднократного повышения и понижения температуры температурного шока. Способностью к цистообразованию T. pyriformis не обладает. Дополнительные операции по синхронизации культуры усложняют осуществление способа и повышают стоимость токсикологических исследований.

Известен способ определения токсичности кормов и воды, используемых для сельскохозяйственных животных с помощью культуры инфузории Paramecium caudatum [3]
Однако в процессе культивирования, необходимого для поддержания инфузорий этого вида в жизнеспособном состоянии, их физиологические свойства периодически меняются и в большой степени зависят от среды культивирования. Стадия покоя инцистирования в их жизненном цикле отсутствует. Указанные физиологические особенности инфузорий данного вида вызывают необходимость предварительной стабилизации культуры перед использованием ее для токсикологических исследований.

Целью изобретения является повышение эффективности способа определения токсичности объектов внешней среды путем стандартизуемости используемой культуры инфузорий при меньших затратах материалов и времени.

Это достигается тем, что используют культуру инфузорий, чувствительных к токсинам и обладающих способностью к цистообразованию, после их эксцистирования, например Colpoda steinii.

Способ осуществляют следующим образом.

В два флакона с сухой культурой Colpoda steinii, находящейся на стадии цисты, вносят равные количества минерального раствора, пригодного для существования инфузорий, например Лозина-Лозинского. Культуру инкубируют на протяжение не менее чем 12 ч при температуре 20-22^оС, затем проверяют посредством микроскопирования жизнеспособность и активность инфузорий. После этого в один из флаконов вносят экстракт исследуемой пробы в объеме, равном объему минерального раствора, а в другой такое же количество исходного минерального раствора. Экстракт пробы при этом приготавливают по общепринятой методике [1, 2] Учет ведут через 3, 10 мин и 3 ч посредством микроскопирования при малом увеличении.

Критерием определения токсичности служит время от начала воздействия испытуемого экстракта до гибели инфузорий, факт которой констатируют на основе полного прекращения их движения и наличия распада.

Результаты исследований оценивают следующим образом. При гибели инфузорий под воздействием исследуемой пробы за период времени менее 3 мин объект резко токсичный, до 10 мин токсичный, до 3 ч слабо токсичный. Если через 3 ч после начала исследования инфузории в исследуемой пробе остаются подвижными, объект не токсичен. Во всех случаях результаты можно считать достоверными, если в контрольной пробе подвижность инфузорий находится к концу исследований на исходном уровне.

Конкретное осуществление способа поясняется результатами токсикологических исследований различных объектов, используемых при выращивании сельскохозяйственных животных. Исследования проводили в лаборатории совхоза "Октябрьский" Рыбинского района Ярославской области. Те же самые объекты параллельно исследовали с помощью способа-прототипа, т.е. с использованием инфузории, не обладающей способностью к цистообразованию Paramecium caudatum.

С целью контроля экспресс-результатов каждую исследованную пробу отправляли в районную (Рыбинскую) ветеринарную лабораторию для повторного исследования на токсичность.

Результаты исследований приведены в таблице.

Из таблицы видно, что результаты исследований на токсичность при помощи токсикологического диагностикума совпадают с результатами, полученными в районной лаборатории на 90% а при помощи P. caudatum (прототип) на 70% Таким образом, можно сделать вывод, что заявленное решение более надежно в оценке токсичности объектов внешней среды, чем прототип.

Использование: токсикология, при оценке экологической и пищевой опасности объектов внешней среды, токсичности кормов и воды, используемых для сельскохозяйственных экспертов. Сущность применения: инкубируют инфузории Colpoda steinii с используемой пробой, синхронизацию осуществляют на стадии их эксцистирования после цистоабразования, а оценку токсичности проводят по времени от начала воздействия до гибели инфузорий. 1 табл.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ ОБЪЕКТОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ, включающий синхронизацию инфузорий, их инкубирование с исследуемой пробой с последующей оценкой токсичности по времени от начала воздействия до гибели инфузорий, отличающийся тем, что из инфузорий используют Colpoda steinii, а синхронизацию осуществляют на стадии их эксцистирования после цистообразования.