ПРОИЗВОДНЫЕ 3,3`-ДИТИОБИС(ПРОПИОНОВОЙ КИСЛОТЫ) ИЛИ ИХ СТЕРЕОИЗОМЕРЫ И СОСТАВ, ОБЛАДАЮЩИЙ ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИМ ДЕЙСТВИЕМ Российский патент 1995 года по МПК C07C323/60 A61K31/105 

Изобретение относится к новым производным цистина, обладающим иммуномодулирующей активностью, и фармацевтическим составам, содержащим эти производные.

Цель изобретения состоит в создании производных цистина с иммуномодулирующей активностью, которые могут быть полезны в лечении различных заболеваний.

Известен N-ацетил-L-цистеин, широко используемый для лечения хронических заболеваний, связанных с обструкцией дыхательных путей и хронических бронхитов. См. Eur. I. Respir. Dis. 1980, 61 (доп.111), 93-108; Boman, G. Backer, U. Larson, S. Melander B. и Wahlander, L. Оральный ацетилцистеин снижает частоту обострения хронических бронхитов, см. например, Eur. I. Respir. Dis. 1983, 64, 405-415.

Известен также и N, N'-диацетил-L-цистин. Это соединение было вкратце описано в патентной литературе, а также в научной литературе (патент США 4827016, патент США 4724239, Европейский патент 300100, патент США 4708965 DE патент 2326444. Однако ничего не сообщалось и о возможности его фармакологических или/и терапевтических свойств, связанных с иммунологическими системами и воспалительными заболеваниями легких, такими как хронические бронхиты.

Согласно изобретению, найдено, что соединения общей формулы I
где R водород или группа -CO-R₁, в которой R₁ представляет метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-децил, н-унцедил, изопропил, 1-метилпропил, трет.бутил, 3-метилбутил, или 2-метилбутил; R₂ метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-децил, н-ундецил, изопропил, 1-метилпропил, трет. бутил, 3-метилбутил, или 2-метилбутил; R₃ водород, метил, этил, пропил, изопропил, бутил или изобутил, при условии, что одновременно R₁ и R₂ представляют метил и при дополнительном условии, что, когда R₃ представляет водород, то R₁ и R₂ не являются одновременно н-пропилом или н-гептилом, или их физиологически приемлемые соли и/или их стереохимические изомеры являются иммуномодулирующими, в частности иммуностимулирующими, средствами.

Таким образом соединения изобретения могут быть испльзованы для лечения заболеваний тех лиц, у которых наблюдается дефект иммунной системы и/или неэффективен механизм защиты или можно ожидать такой неэффективности защиты.

Примерами таких заболеваний являются хронические бронхиты и другие воспалительные заболевания дыхательных путей, такие как астма и риниты, а также некоторые формы заболеваний аутоиммунной системы, такие как диабеты и ревматоидный артрит и/или различные злокачественные заболевания. ВИЧ-инфекция или СПИД в разгаре болезни это те заболевания, при лечении которых могут быть использованы эти соединения. Эти соединения могут быть использованы и при лечении атеросклеротических заболеваний.

Эффективными количествами соединений изобретения для лечения указанных выше заболеваний являются дозы 0,5-500 мг, предпочтительнее 5-50 мг в день. Среди стереозомерных форм соединений настоящего изобретения, в частности, предпочтителен L-изомер, т.е. соединения, полученные из L-цистина.

Физиологически приемлемой солью соединения формулы I, когда R₃представляет водород, является, например, соль натрия, аммония, кальция или магния, наряду с нетоксичными кислотно-аддитивными солями, а также соли, полученные из аргинина, лизина, гистидина, этаноламамина, диэтаноламина, этилендиамина и холина или других подходящих органических аминов.

Физиологически приемлемой солью соединений формулы I, когда R₃водороду, а R водород, являются соли хлористоводородной, бромистоводородной кислот, гидросульфаты, оксалаты, тартраты и т.д. Соли могут также существовать в форме сольватов, например гидратов.

Соли соединений этого изобретения получают смешиванием соединения дисульфида и щелочи, как указано в описании, растворенных или диспергированных в растворителе или смеси растворителей.

При этом используются такие растворители, как вода, спирты, гликоли, кетоны, амиды, сульфоксиды или другие полярные растворители или смеси растворителей. Соль или осаждается непосредственно из взаимодействующей смеси, или получается добавлением менее полярного растворителя или испарением или лиофилизацией. Взаимодействие проводится при повышенной или комнатной температуре в зависимости от растворимости в воде.

Изобретение также относится и к фармацевтическим составам.

Описанные активные вещества могут быть включены в различных дозированные формы, например, таблетки, облатки, капсулы из желатина, растворы и аэрозоли.

Для получения таблеток, облаток и капсул из желатина активный компонент может быть объединен с фармацевтическиприемлемыми материалами, например, лактозой, крахмалом, гидрофосфатом кальция, микрокристаллической целлюлозой, поливинилпирролидоном, желатином, производными целлюлозы, коллоидным диоксидом кремния, тальком и стеариновой кислотой или ее солями.

Для приготовления растворов для перорального приема подходящими средами являются вода, сахароза, глюкоза, сорбитол, фруктоза и ксилит. Кроме упомянутых сред фармацевтические формы содержат консерванты-стабилизаторы, средства регуляции вязкости, эмульгаторы, сладкие добавки, красящие вещества, ароматизирующие добавки, средства, регулирующие тонус, буфферные растворы и антиоксиданты. Они также могут содержать другие терапевтические значимые продукты.

Соединения по изобретению могут быть получены несколькими раазличными способами, далее раскрытыми в примерах.

П р и м е р 1. (R,R)-N,N'-Дипентаноил-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диметиловый эфир.

Суспензию дигидрохлорида L-цистиндиметилового эфира (1,0 г; 3 ммоля) в тетрагидрофуране ТГФ 20 мл (суспензия белого цвета) перемешали и охладили до 0^оС. К реакционной смеси добавили 4 экв. (2,0 мл) N-этилдиизопропиламина и 2,2 экв. (0,8 мл, 6,6 ммолей) пентаноилхлорида. Смесь перемешивали в течение 4 часов на ледяной "бане", после чего отфильтровали белый осадок N-этилдиизопропиламмонийхлорида. Растворитель отогнали и сырой продукт вновь растворили в дихлорметане. Органическую фазу промыли водой и высушили над сульфатом натрия. После фильтрации, отгонки растворителя получили неочищенный продукт, название которого дано в заголовке, его перекристаллизовывали из этилацетата.

Физические свойства:
¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ6,42 (2H, d, NH), 4,88 (2H dt, NCH), 3,77 (6H, S, OCH₃), 3,21 (4H, m, SCH₂), 2,27 (4H, t, COCH₂), 1,63 (4H, m, CH₃CH₂CH₂), 1,36 (4H, m, CH₃CH₂), 0,92 (6H, t, CH₃), d_D²⁵ 146^o (C=0, 490, MEOH). Т.пл. 110-112^оС.

Вычислено, C 49,52; H 7,39; N 6,42; S 14,69
C₁₈H₃₂O₆N₂S₂.

Найдено, C 49,40; H 7,40; N 6,42; S 14,70
П р и м е р 2. (R,R)-N,N'-Дипропионил-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диметиловый эфир.

Соединение было получено согласно способу, описанному в примере 1, с использованием в качестве ацилирующего агента пропионилхлорида.

Физические свойства:
¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 6,44 (2H, d, NH), 4,89 (2H, dt, NCH), 3,78 (6H, S, OCH₃), 3,22 (4H, m, SCH₂), 2,31 (4H, q, CH₃CH₂CH₂), 1,81 (6H, t, CH₃).

П р и м е р 3. (R,R)-N,N'-Дипентаноил-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диэтиловый эфир.

Соединение было получено, согласно способу, описанному в примере 1, с использованием в качестве исходного продукта дигидрохлорида L-цистиндиэтилового эфира и в качестве ацилирующего реагента пентаноилхлорида.

Физические свойства:
¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 6,43 (2H, d, NH), 4,85 (2H, dt, NCH), 4,23 (4H, m, OCH₂), 3,22 (4H, m, SCH₂), 2,27 (4H, t, COCH₂), 1,63 (6H, m, CH₃CH₂CH₂), 1,37 (4H, m, CH₃CH₂), 1,30 (6H, t, OCH₂CH₃), 0,92 (6H, t, CH₃), d_D²⁵ -130^o (C=0, 154, MEOH). Т.пл. 109^оС.

Вычислено, C 51,70; H 7,81; N 6,03; S 13,30
C₂₀H₃₆O₆N₂S₂
Найдено, C 51,85; H 7,75; N 6,10; S 13,60
П р и м е р 4. (R,R)-N,N'-Дипропионил-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диэтиловый эфир.

Соединение было получено, согласно способу, описанному в примере 1, с использованием в качестве исходного продукта дигидрохлорида L-цистиндиэтилового эфира и в качестве ацилирующего агента пропионилхлорида.

Физические свойства:
¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 6,44 (2H, d, NH), 4,86 (2H, dt, NCH), 4,23 (4H, m, OCH₂), 3,22 (4H, m, SCH₂), 2,31 (4H, q, COCH₂), 1,30 (6H, t, CH₂CH₂CH₃), 1,18 (6H, t, CH₃).

П р и м е р 5. (R,R)-N,N'-дигексаноил-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диэтиловый эфир.

Соединение было получено, согласно способу, описанному в примере 1, с использованием в качестве исходного продукта дигидрохлорида L-цистиндиэтилового эфира и в качестве ацилирующего реагента гексаноилхлорида.

Физические свойства:
¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 6,44 (2H, d, NH), 4,86 (2H, dt, NCH), 4,23 (4H, m, OCH₂), 3,21 (4H, m, SCH₂), 2,26 (4H, t, COCH₂CH₂), 1,31 (4H, m, CH₃CH₂CH), 1,31 (4H, m, CH₃CH₂), 1,31 (6H, t, OCH₂CH₃), 0,90 (6H, t, CH₃).

П р и м е р 6. (R,R)-N,N'-ди(2-метилпропионил)-3,3-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диэтиловый эфир.

Соединение было получено, согласно способу, описанному в примере 1, с использованием в качестве исходного продукта дигидрохлорида L цистиндиэтилового эфира и в качестве ацилирующего реагента 2-метилпропаноилхлорида.

Физические свойства:
¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 6,42 (2H, d, NH), 4,84 (2H, dt, NCH), 4,23 (4H, m, OCH₂), 3,22 (4H, m, SCH₂), 2,46 (2H, m, (CH₃)₂CH), 1,30 (6H, t, OCH₂CH₃), 1,18 (12H, d, (CH₃)₂). d_D²⁵ -127^o (C=0, 512, MEOH). Т.пл. 140--141^оС.

Вычислено, C 49,52; H 7,39; N 6,42; S 14,69
C₁₈H₃₂O₆N₂S₂
Найдено, C 49,15; H 7,40; N 6,30; S 14,75
П р и м е р 7. (R,R)-N,N'-ди(1-оксододеканил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диметиловый эфир.

Соединение было получено, согласно способу, описанному в примере 1, с использованием в качестве исходного продукта дигидрохлорида (R,R)-3,3'-дитиобис(2-аминопропионовой кислоты) диэтилового эфира и с использованием в качестве ацилирующего агента хлорида додекановой кислоты.

Общий выход 40%
Физические свойства:
Т. пл. 98-99^оС d_D²⁵ -93^о (С 0,531, МеОН). ¹Н-ЯМР (300 МГц CDCl₃): δ 6,42 (2H, d, NH), 4,88 (2H, dt, NCH), 3,77 (6H, s, OCH₃), 3,21 (4H, m, CH₂), 2,26 (4H, t, OCH₂), 1,64 (4H, m, OCH₂CH₂), 1,26 (32H, m, (CH₂)₈), 0,88 (6H, t, CH₂CH₃).

Вычислено, C 60,72; H 9,56; N 4,43; S 10,13
C₃₂H₆₀N₂O₆S₂
Найдено, C 60,4; H 9,3; N 4,5; S 10,1
П р и м е р 8. (S,S)-N,N'-ди(2-метилпропионил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диметиловый эфир.

N, N'-Диизобутирил-D цистин (1,86 г, 4,9 ммоля) растворили в 10 мл метанола, содержащего одну каплю хлористоводородной кислоты. Триметилортоформиат (0,6 мл, 5,5 ммолей) добавили к раствору и полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 дней. После отгонки растворителя полученный продукт очистили на хроматографической колонке (растворитель-гептан:этилацетат 1:5).

Физические свойства. Т.пл.145,5-147,5^оС
¹Н-ЯМР (300 МГц CDCl₃): δ 6,39 (2H, d, NH), 4,86 (2H, dt, NCH), 3,78 (6H, s, OCH₃), 3,21 (4H, m, SCH₂), 2,47 (2H, h, CH(CH₃)₂), 1,18 (12H, d, CH(CH₃)₂). [α]_D²⁵ +135,2 (C=0, 42, MeOH).

П р и м е р 9. (R,R)-N,N'-Дигексаноил-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диметиловый эфир.

Соединение было получено в соответствии со способом, описанным в примере 1, с использованием в качестве ацилирующего агента гексаноилхлорида.

Физические свойства:
¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 6,41 (2H, d, NH), 4,88 (2H, dt, NCH), 3,76 (6H, s, OCH₃), 3,21 (4H, m, SCH₂), 2,26 (4H, t, COCH₂), 1,65 (4H, q, CH₃CH₂CH₂CH₂), 1,33 (4H, m, CH₃CH₂), 1,33 (4H, m, CH₃CH₂), 0,89 (6H, t, CH₃). d_D²⁵ 135^o (C=0, MeOH). Т.пл.90-92^оС.

Вычислено, C 51,70; H 7,81; N 6,03; S 13,80
C₂₀H₃₆N₂O₆S₂
Найдено, C 51,90; H 7,95; N 6,10; S 13,75
П р и м е р 10. (R,R)-N,N'-Ди(1-оксооктил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диметиловый эфир.

Соединение было получено, согласно способу, описанному в примере 1, с использованием октаноилхлорида в качестве ацилирующего реагента.

Физические свойства:
¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 6,41 (2H, d, NH), 4,88 (2H, dt, NCH), 3,77 (6H, s, OCH₃), 3,21 (4H, m, SCH₂), 2,26 (4H, t, COCH₂), 1,65 (4H, t, COCH₂CH), 1,29 (16H, m, CH₃CH₂)1-4), 0,88 (6H, t, CH₂CH₃). d_D²⁵ -119^o (C= 0, 490, MeOH). Т.пл. 90-91^оС.

Вычислено, C 55,36; H 8,52; N 5,38; S 12,31
C₂₄H₄₄N₂O₆S₂
Найдено, C 54,80; H 8,45; N 5,35; S 11,80
П р и м е р 11. (R,R)-N,N'-Ди(1-оксооктил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты диэтиловый эфир.

Соединение было получено согласно способу, полученному в примеру 1, с использованием в качестве исходного продукта дигидрохлорида L-цистиндиэтилового эфира и в качестве ацилирующего реагента октаноилхлорида.

Физические свойства:
¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 6,43 (2H, d, NH), 4,85 (2H, dt, NCH), 4,23 (4H, m, CH₃CH₂O), 3,21 (4H, m, SCH₂), 2,26 (4H, t, COCH₂), 1,65 (4H, t, COCH₂CH₂), 1,30 (6H, m, OCH₂CH₃), 1,30 (16H, m, CH₃(CH₂)1-4), 0,88 (6H, t, CH₂CH₃).

П р и м е р 12. (R,R)-N,N'-Ди(2,2-диметилпропионил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диэтиловый эфир.

Соединение было получено согласно способу, описанному в примере 1, с использованием в качестве исходного продукта дигидрохлорида N-дистиндиэтилового эфира и в качестве ацилирующего реагента 2,2-диметилпропаноилхлорида.

Физические свойства:
¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 6,52 (2H, d, NH), 4,80 (2H, dt, NCH), 4,22 (4H, m, CH₃CH₂O), 3,22 (4H, m, SCH₂), 1,30 (6H, t, OCH₂CH₃), 1,23 (18H, s, C(CH₃)₃).

П р и м е р 13. (R,R)-N,N'-Ди(2,2-диметилпропионил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диметиловый эфир.

Соединение было получено, согласно способу, описанному в примере 1, с использованием в качестве ацилирующего реагента 2,2-диметилпропаноилхлорида.

Физические свойства:
¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 6,51 (2H, d, NH), 4,83 (2H, dt, NCH), 3,78 (6H, s, OCH₃), 3,21 (4H, m, SCH₂), 1,23 (18H, s, C(CH₃)₃).

П р и м е р 14. (R,R)-N,N'-Ди(2-метилпропионил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диметиловый эфир.

Соединение было получено, согласно способу, описанному в примере 1, но 2-метилпропионилхлорид был использован вместо пентаноилхлорида.

Физические свойства:
¹Н-ЯМР (300 МГц): δ 6,40 (2H, d, NH), 4,86 (2H, dt, NCH), 3,78 (6H, s, OCH₃), 3,21 (4H, m, CH₂), 2,47 (2H, h, CH(CH₃)₂). Т.пл.142-145^оС.

П р и м е р 15. (R,R)-N-ацетил-N'-гексаноил-3,3'-дитиобис(2- аминопропионовой кислоты) диметиловый эфир.

Дигидрохлорид (R,R)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диметиловый эфир (690 мг, 2 ммоля) перемешали вместе с 1,39 мл (10 ммолей) триэтиламина в 20 мл тетрагидрофуране в 100 мл круглодонной колбе. Мутный раствор охладили до 0^оС на ледяной "бане" и затем добавили по каплям раствор ацетилхлорида (142 мкл, 2 ммоля) и гексаноилхлорида (276 мкл, 2 ммоля) в 3 мл тетрагидрофуране. Мутный раствор перемешивали в течение 1 ч при 0^оС. Отфильтровали белый осадок в количестве 1 г (С₂Н₅)₃ HNCl, а фильтрат упарили, получив в результате маслянистый остаток, который разделили между 10 мл воды и 10 мл CHCl₃. После разделения фаз, водную фазу проэкстрагировали тремя порциями по 10 мл CHCl₃. После отгнонки растворителя из объединенных хлороформенных вытяжек неочыищенный продукт (содержащий целевое соединение и симметричные производные) разделили, используя Флэш-хроматографию, согласно Still, и др. (I. Org. Chem. 1978, 43, 2923), на силикагеле 60 (Е. Merck 5735, 230-240 ASTM) со смесью этилацетат (гептан) метиловый спирт 6:3:1 в качестве элюента. Разделение продолжили с использованием метода тонкослойной хроматографии (пластичные листы силикагеля 60 WF₂ 54 s, E.Merck 16483, элюирование проводили смесью этилацетат) гептан (метиловый спирт 6:3:1, проявляли хроматограммы, используя иод). Фракции приемлемой чистоты объединили и упарили, получив в результате маслянистый остаток. Этот остаток растворили в ацетоне, раствор снова упарили и получили в результате названный продукт в виде бесцветного твердого вещества. Выход 184 мг, 25%
Физические свойства:
Тонкослойная хроматография: R_f 0,30 (этилацетат-гептан-метиловый спирт6: 3:1).

¹Н-ЯМР (300 МГц, CDCl₃): δ 6,53 (1H, d, NH), 6,43 (1H, d, NH), 4,88 (2H, m, NCH), 3,78 (6H, s, CO₂CO₃), 3,22 (4H, m, s, CH₂), 2,26 (2H, t, COCH₂), 2,07 (3H, s, COCH₃), 1,65 (2H, m, CH₂), 1,32 (4eH, m, CH₂), 0,90 (3H, t, CH₃). Пламенно-абсорбционная масс-спектрометрия (м/з): 431 [MNa]⁺, 409 [MN] ⁺, 311 [MH--C₇H₁₁₀]⁺.

П р и м е р 16. (R,R)-N,N'-ди(2-метилпропионил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовая кислота).

N-изобутирил-L-цистеин (9,5 г, 50 ммолей) растворили в 50 мл воды. Добавили пероксид водорода (30% раствор, 3,1 мл, 30 м молей), и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 6 ч. После упаривания растворителя при пониженном давлении получили белое кристаллизующееся масло (9,8 г). Перекристаллизация из этилацетата дала названный продукт в виде твердого вещества белого цвета, которое высушили в вакууме.

Выход 4,8 г.

Физические свойства: Т.пл. 143-145^оС; ¹Н-ЯМР (300 МГц, диметилсульфоксид-d₆): δ(2H, b, CO₂H), 8,16 (2H, d, NH), 4,47 (2H, m, CHN), 3,15 (2H, dd, CH₂, s, I 14 Гц), 2,92 (2Н, dd, CH₂, I 14 Гц, 9 Гц), 2,43 (2Н, h, CH(СН₃)₂= 7 Гц), 1,01 (12Н, dd, CH₂, I 14 Гц, 9 Гц), 2,43 (2H, h, CH(CH₃)₂ 7 Гц, 1,01 (12Н, d, CH₃, I 7 Гц), [d]_D²⁵= -169,8^о (МеОН, С 0,510).

П р и м е р 17. (R,R)-N-Ацетил-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовая кислота).

L-цистеин (2,42 г, 20 ммолей) и N-ацетил-L-цистени (3,26 г, 20 ммолей) растворили в 25 мл воды. рН этого раствора по лакмусовой бумаге равнялось 2,6. К этому раствору добавили пероксид водорода (30% 2,3 мл, 21 ммоля) и реакционную смесь оставили стоять на ночь при комнатной температуре. Осадок белого цвета стоял при комнатной температуре в течение ночи. Затем его отфильтровывали (1,26 г). Сопоставление спектральных данных полученного осадка с спектром аутентичного образца L-цистина свидетельствовало о том, что полученный осадок представляет собой L-цистин. Фильтрат желтоватой окраски, содержащий получаемое соединение и два симметричных соединения (R,R)-N,N'-диацетилцистина и, в минимальном количестве, цистин, подвергли разделению, используя для этих целей ВЭЖХ (высокоэффективную жидкостную хроматографию) с Dyhamax C₁⁸-колонкой (8 мкм 60 А, 21,4 х 250 мм) и контрольной Dyhamax С₁⁸-колонкой (8 мкм 21,4 х 50 мм) и в качестве подвижной жидкой фазы двойной растворитель Gilson (305 насос, напорный насос 100 SC, действующий как насос для закачки подвижной фазы, 806 манометрический модуль, 811 В динамический смеситель 115 УФ детектор, 201 коллектор фракций, 201-202 устройство, регулирующее фракции). В качестве растворителя использовали А, представляющий раствор 10 ммолей уксусной кислоты в воде -НОАС/Н₂О, и В-метиловый спирт МеОН; в соотношении A: B 95:5. Скорость потока расстворителя составляла 10 мл/мин, регистрация разделенных фракций велась при 230 нм. После определения каждой фракции методом тонкослойной хроматографии (Merck, 16483 пластичные листы силикагеля 60 WF₂ 254s, элюент смесь ^нBuOH(HOAc)H₂O 1:1:1, проявитель I₂F/, фракции приемлемой чистоты были собраны вместе и после отгонки растворителя был получен маслянистый остаток. Этот остаток растворили в ацетоне (у, д, а) и после упаривания полученного раствора был получен продукт, название которого дано в заголовке, в виде кристаллов белого цвета. Выход 10%
Физические свойства: TCX: R_f 0,69 (^нBuOH) HOAc (H₂O) 1:1:1.

¹Н-ЯМР (300 МГц, D₂O): d 4,73 (1H, dd, NCH), 4,18 (1H, dd, NCH), 3,37 (2H, m, SCH₂), 3,10 (2H, m, SCH₂), 2,06 (3H, s, CH₃). TSP-MS (м/з): 283 [MH] ⁺, 164 [MH-C₃H₅NO₂]⁺.

П р и м е р 18. (R,R)-N-ацетил-N'-(2-метилпропионил)-3,3'- дитиобис(2-аминопропионовая кислота).

К перемешиваемой смеси N-ацетил-L-цистеина (0,652 г, 4 ммоля) и N-изобутирил-L-цистеина (0,764 г, 4 ммоля) в 10 мл метилового спирта по каплям добавили пероксид водорода (30% 0,60 мл, 5 ммолей). Перемешивание продолжалось в течение трех часов при комнатной температуре, после чего растворитель удалили на роторном испарителе. После добавления 25 мл ацетона и последующего испарения растворителя получили 1,5 г неочищенного продукта в виде масла, которое отверждалось при стоянии. Целевой продукт, название которого дано в заголовке примера, выделили из смеси, используя ВЭЖХ, согласно описанию, приведенному в примере 17. Выход 31% Физические свойства: ВЭЖХ, элюирование 60% А (изократический, состав растворителя см. пример 17). ТСХ R_f 0,76 (^нBuOH (H₂O) HOAc 1:1:1).

¹Н-ЯМР (300 МГц, D₂O): δ 4,73 (2H, m, NCH), 3,33 (2H, m, SCH₂), 3,03 (2H, m, SCH₂), 2,59 (1H, h, H), 2,06 (3H, s, COH₃), 1,13 (3H, d, CH₃), 1,11 (3H, s, CH₃). Пламенно-абсорбционная масс-спектрометрия м/з: 376 [MNa]⁺, 353 [MH]⁺.

П р и м е р 19. (R,R)-N-(2-Метилпропионил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовая кислота).

Соединение было получено, согласно способу, описанному в примере 17, с использованием в качестве исходных продуктов N-цистеина и L-изобутирил-L-цистеина. Выход 8%
Физические свойства: ВЭЖХ, элюирование 55% А (изократический, состав растворителя см. пример 17). ТСХ: R_f 0,67 ^нBuOH (H₂O) HOAc 1:1:1, ¹Н-ЯМР (300 МГц, D₂O): δ 4,73 (1H, dd, NCH), 4,14 (1H, dd, NCH), 3,38 (2H, m, SCH₂), 3,08 (2H, m, SCH₂), 2,06 (1H, h, CH), 1,15 (3H, d, CH₃), 1,13 (3H, d, CH₃), TSP-MS m/z: 311 [MH]⁺.

П р и м е р 20. (R,R)-N-ацетил-N'-(2,2-диметилпропионил)-3,3'- дитиобис (2-аминопропионовая кислота).

Соединение было получено с использованием в качестве исходного материала N-ацетил-L-цистеина и N-пивалиол-L-цистеина, согласно способу, описанному в примере 18. Выход 21%
Физические свойства: ВЭЖХ, градиент элюирования: 50% А 15 мин. 30% А 5 мин, R_f 0,78 ^нBuOH (H₂O) НОАС 1:1:1. ¹Н-ЯМР (300 МГц, D₂O): δ 4,72 (2H, m, NCH), 3,35 (2H, m, CH₂), 3,04 (2H, m, SCH₂), 2,06 (3H, S, CH₃), 1,21 (9H, s, CCH₃). Пламенно-абсорбционная масс-спектрометрия м/з: 411 [MNa₂]⁺, 367 [MH] ⁺, 349 [MH-H₂O]⁺, 389 [MNa]⁺.

П р и м е р 21. (R,R)-N,N'-Ди(2,2-диметилпропионил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовая кислота).

Соединение было выделено из неочищенного продукта примера 20. Выход 15%
Физические свойства: ВЭЖХ, градиент элюирования: 50% А/15 мин, 50 30% А/15 мин, 30% изократический (состав растворителя см. пример 17). ТСХ: R_f 0,88 ^нBuOH(H₂O) HOAc 1:1:1). ¹Н-ЯМР (300 МГц, D₂O): δ 4,72 (2H, dd, NCH), 3,37 (2H, dd, SCH₂), 3,06 (2H, dd, SCH₂), 1,21 (18H, s, CCH₃). Пламенно-абсорбционная масс-спектрометрия м/з: 431 [MNa]⁺, 409 [MH]⁺, 391 [MH-H₂O]⁺.

П р и м е р 22. (R,R)-N-Ацетил-N'-пентаноил-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовая кислота).

Это соединение было получено с использованием в качестве исходных материалов N-ацетилцистеина и N-пентаноилцистеина, согласно способу, описанному в примере 18. Выход: 23%
Физические свойства: ВЭЖХ, градиент элюирования: 50% А/20 мин, 25% А/5 мин, 25% А/ изократический (состав растворителя см. пример 17, ТСХ R_f 0,84 ^нBuOH(H₂O) HOAc 1:1:1. ¹Н-ЯМР (300 МГц, D₂O): δ 4,70 (2H, m, NCH), 3,30 (2H, n, SCH₂), 2,99 (2H, m, SCH₂), 2,30 (2H, t, COCH₂), 2,04 (3H, s, COCH₃), 1,57 (2H, m, CH₂), 1,30 (2H, m, CH₂), 0,86 (3H, t, CH₃). ПАБС-МС (м/з): 389 [MNa] ⁺. 367 [MH]⁺, 349 [MH-H₂O]⁺.

П р и м е р 23. (R,R)-N,N'-Дигексаноил-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовая кислота).

Суспензию 1 экв. дигидрохлорида 3,3-дитиобис-(2-аминопропионовой кислоты) диметилового эфира в тетрагидрофуране (взвесь белого цвета) перемешали и охладили до 0^оС. К реакционной смеси добавили 4 экв. N-этилдиизопропиламина и 2,2 экв. гексаноилхлорида. Смесь перемешивали на ледяной бане в течение 4 ч, после чего отфильтровали белый осадок N-этилдиизопропиламмонийхлорида. Растворитель отогнали при пониженном давлении, и полученный неочищенный продукт растворили в дихлорметане. После промывания водой органический слой высушили над сульфатом наатрия. После фильтрования и отгонки растворителя получили неочищенный диметиловый эфир (R,R)-N,N-дигексаноил-2,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты), который перекристаллизовывали из смеси метанол/вода и растерли с диэтиловым эфиром.

Суспензию белого цвета (0,1 М) полученного выше диметилового эфира и 0,5 М гидроксида натрия в метаноле 10% энергично перемешивали при комнатной температуре. После примерно 48 ч рН прозрачного раствора довели до рН 2 и выпавший осадок белого цвета отфильтровывали и перекристаллизовывали из смеси ацетон/гексан, получив в результате белые кристааллы соединения, название которого дано в заголовке. Выход 28%
Физические свойства: Т. пл. 132-135^оС. [α]_D²⁵= -164^о (С 0,501, МеОН). ¹Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d6): δ 8,22 (2H, d, NH), 4,49 (2H, m, CHN), 3,14 (2H, dd, CH₂S), 2,91 (2H, dd, CH₂S), 2,12 (4H, t, CH₂CO), 1,50 (4H, p, CH₂CH₂CO), 1,26 (8H, m, (CH₂)₂), 0,87 (6H, t, CH₃).

Вычислено, C 49,5; H 7,4; N 6,4; S 14,7
C₁₈H₃₂N₂O₆S₂
Найдено, C 49,4; H 7,2; N 6,2; S 14,3
П р и м е р 24. (R,R)-N,N'-Ди(1-оксооктил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовая кислота).

Соединение было получено, согласно способу, описанному в примере 23, с использованием в качестве ацилирующего средства хлорида октановой кислоты.

Первоначально образовавшийся (R,R)-N,N'-ди(1-оксооктил)-3,3'- дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) диметиловый эфир был перекристаллизован из этилацетата, а затем соединение, название которого дано в заголовке, перекристаллизовано из смеси гептан/ацетон и растерто с диэтиловым эфиром, в результате получили кристааллы белого цвета. Общий выход 20%
Физический состав: Т. пл. 105-107^оС. [α] _D²⁵= -147^о (С 0,541, МеОН). ¹Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): δ 8,18 (2H, d, NH), 4,48 (2H, m, CHN), 3,17 (2H, dd, CH₂S), 2,89 (2H, dd, CH₂S), 2,12 (4H, t, CH₂CO), 1,49 (4H, m, CH₂CH₂CO), 1,26 (16H, m, (CH₂)₄), 0,87 (6H, t, CH₃).

Вычислено, C 53,6; H 8,2; N 5,7; S 13,0
C₂₂H₄₀N₂O₆S₂
Найдено, C 53,4; H 8,5; N 5,7; S 12,6
П р и м е р 25. (R,R)-N,N'-ди(1-оксододеканил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовая кислот): соединение было получено, согласно способу, описанному в примере 23, с использованием хлорида додекановой кислоты в качестве ацилирующего средства. Гидролиз был проведен в 20% метиловом спирте.

Первоначально образовавшийся диметиловый эфир (R,R)-N,N'-(1-оксододеканил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовой кислоты) перекристаллизовывали из этилацетата. Соединение, название которого дано в заготовке, было перекристааллизовано из смеси дихлорметан (толуол, в результате получили кристаллы белого цвета). Общий выход 23%
Физические свойства. Т.пл. 110-120^оС. [α]_D²⁵= 113^о (С 0,507, МеОН).

¹Н-ЯМР (30 МГц, ДМСО-d₆): δ 8,19 (2H, d, NH), 4,48 (2H, m, CHN), 3,15 (2H, dd, CH₂S), 2,89 (2H, dd, CH₂S), 2,11 (4H, t, CH₂CO), 1,49 (4H, m, CH₂CH₂CO), 1,25 (32H, m, (CH₂₎₈), 0,87 (6H, t, CH₃).

Вычислено, C 59,6; H 9,3; N 4,6; S 10,6
C₃₀H₅₆N₂O₆S₂
Найдено, C 59,2; H 9,4; N 4,6; S 10,3
П р и м е р 26. (R,R)-N,N'-Ди(2-метилпропионил)-3,3'-дитиобис (2-аминопропионовая кислота).

Карбонат калия (17,6 г, 127 ммолей) растворили в 40 мл воды и 40 мл метиленхлорида в токе азота. Раствор охладили до -10^оС и быстро добавили 2-метилпропионилхлорид (5,6 мл, 40 ммолей) и моногидрат гидрохлорида D-дистеина (8,7 г, 49,5 ммоля). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуер в течение 4 ч, после чего добавляли хлористоводородную кислоту до тех пор, пока рН смеси не стало меньше 1 по лакмусовой бумаге. Водный слой отбросили и к органическому слою добавили петролейный эфир (40-60^оС), после чего из него выпал осадок N-изобутирил-D-цистеина в виде кристаллов белого цвета.

N-изобутирил-D-цистеин (1 г, 5,2 ммоля) растворили в 10 мл метаноле. Добавили пероксид водорода и реакционную смесь переешали при комнатной температуре в течение 6 ч. После отгонки растворителя при пониженном давлении было получено белое кристаллизующееся масло. После перекристааллизации из этилацетата получили соединение, название которого дано в заголовке, в виде твердого остатка белого цвета, который высушили в вакууме. Выход 0,55 г (55% ).

Физические свойства. Т.пл. 135-137^оС.

¹Н-ЯМР (300 МГц, ДМСО-d₆): δ 8,16 (2H, d, NH), 4,47 (2H, m, CHN), 3,15 (2H, CH₂S, I 14 Гц, 5 Гц), 2,93 (2H, dd, CH₂S, I 14 Гц, 9 Гц), 2,43 (2H, dd, CH(CH₃)₂, I 7 Гц), 1,01 (12H, d, CH₃, I 7 Гц). [α]_D²⁵= +167,6 (С0,516, МеОН).

П р и м е р 27. Состав А. Таблетки содержат 10 мг активного в-ва на таблетку, мг:
Активное в-во (соединение 1) 10 Лактоза 100 Картофельный крахмал 50 Поливинилпирролидон 5
Микрокристалли- ческая целлюлоза 15 Стеарат магния 1
Состав 8.

Таблетки, полученные прямым прессованием, содержащие 5 мг активного вещества на таблеку, мг: Активное в-во 5 Лактоза, безводная 150
Микрокристалли- ческая целлюлоза 50
Коллоидный диоксид кремния 1 Стеарат магния 1
Если нужно, полученные таблетки могут быть покрыты пленкой, например, из оксипропилметилцеллюлозы, оксипропилцеллюлозы или сополимера диметил-аминометилметакрилата и эфира метакриловой кислоты.

Состав С.

Раствор для инъекций, содержащий активное вещество в количестве 1 мг/мл. Активное в-во 1,0 мг Хлорид натрия 8,8 мг Вода для инъекций До 1 мл
Состав Д.

Раствор для перорального приема, содержащий активное вещество в количестве 1 мг/мл Сорбитол 150,0 мг Активное вещество 1,0 мг Глицерин 100,0 мг Натрия эдетат дву- замещенный 0,5 мг Предохраняющие добавки q.s. сколько
требуется Отдушка q.s. сколько
требуется Вода очищенная До 1 мл
Состав Е. Порошковый аэрозоль дающий 1 мг на дозу
Микронизированное вещество может быть заполнено в порошковый ингалятор, например Turbuhaler^R дающий 1 мг/дозу.

Исследования действия соединений настоящего изобретения на модели гиперчувствительности замедленного типа у мышей.

Свойство соединений настоящего изобретения стимулировать иммунные отклики проиллюстрировано на примере их действия на модели гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) у мышей.

Самцы и самки мышей Babb/c, полученные от Bomhotsgaard Дания и Charlie Rivers (Англия), были использованы, когда их вес составлял 18-20 г 4-этоксиметилен-2-фенилоксазолон (ОХА) был приобретен от BDH (Англия) и использован в этих исследованиях как антиген.

Мыши были сенсабилизированы (день 0) путем накожного нанесения 150 мл раствора 3% ОХА в смеси абсолютного спирта и ацетона (3:1) на выбритую поверхность груди и живота. Лечение с использованием настоящего соединения началось сразу после сенсибилизации путем перорального введения и продолжалось 6 дней, в качестве позитивного контроля использовали DiNAC или растворитель (фосфаатный буффер, рН 7,0). На седьмой день после сенсибилизации (день 6) оба уха всех мышей были обработаны с обеих сторон путем локального введения 20 и l 1%-ного раствора ОХА в оливковом масле. Толщину уха измерили до обработки и через 24 или 48 ч после обработки, используя для этих целей Dolitest (пружинный инструмент для определения толщины кожной складки). Обработка и измерения проводились под анестезией пентабарбиталом. Интенсивность ГЗТ реакции определялась по формуле: Tt 24/48-Tto и выражалась в um, где to и t 24/48 представляют значения толщины уха до обработки и через 24 или 48 часов после обработки соответственно, в индивидуальном тесте. Полученные данные представлены в виде средних значений +/-S. Е.М. Величина разброса между значениями групп определялась по двойному ограниченному критерию Стъюдента. В табл.1 приведены представительные результаты измерений, проведенных через 24 и 48 ч, выраженные как увеличения толщины уха по отношению к необработанному уху. Цифра 100 указывает двойную толщину уха.

Преимущества соединений изобретения, по сравнению с известными соединениями, имеющими подобную структуру и подобные свойства, были выявлены относительно НЕДS (2-гидроксиэтилдисульфид), которое хорошо известно как иммуномодулирующее соединение. Полученные данные (см. табл.2) относятся к испытанию гиперчувствительности замедленного типа, выше изложенному. Из этих данных можно видеть, что соединения этого изобретения увеличивают ДТН реакцию в большинстве концентраций и точках измерений значительно больше, чем НЕДS. Имеющиеся данные таким образом ясно показывают преимущества соединений этого изобретения.

Токсичность соединений этого изобретения мала: мышам и крысам давали дневную дозу 3 мкмоль/кг per os нескольких соединений этого изобретения в течение двух недель, в течение которых не проявились какие-либо признаки вредного воздействия.

Дополнительные данные испытаний НЕДS приведены в табл.2.

Использование: в качестве лечебного средства от заболеваний, вызванных нарушениями иммунной системы. Сущность изобретения: продукт производные 3,3′-дитиобис (пропионовой кислоты) или их стереоизомеры ф лы R-NH-CH(COOR₃)-CH₂-S-C-Ch₂-CH _→ , где R водород или группа -CO-R₁, где R₁ низший алкил; R₂ низший алкил; R₃ водород или низший алкил, и фармацевтическая композиция с использованием соединений ф лы 1. Получают известным методами. 2 табл.

1. Производные 3,3′ -дитиобис(пропионовой кислоты) общей формулы

где R водород или группа CO R₁, где R₁ метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-децил, н-ундецил, изопропил, I-метилпропил, трет-бутил, 3-метилбутил или 2-метилбутил;
R₂ метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-децил, н-ундецил, изопропил, 1-метилпропил, трет-бутил, 3-метилбутил или 2-метилбутил;
R₃ водород, метил, этил, пропил, изопропил, бутил или изобутил, при условии, что R₁ и R₂ не являются одновременно метилом, а также при условии, что, когда R₃ водород, то R₁ и R₂ не являются одновременно н-пропилом или н-гептилом,
или их стереоизомеры. 2. Производные 3,3′ -дитиобис(пропионовой кислоты) общей формулы по п.1, отличающееся тем, что R водород или группа CO R₂, где R₁ метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-дейил, н-ундецил, изопропил, 1-метилпропил, трет-бутил, 3-метилбутил или 2-метилбутил; R₂ метил, этил, н-пропил, н-бутил, н-пентил, н-гексил, н-гептил, н-октил, н-нонил, н-децил, н-ундецил, изопропил, 1-метилпропил, трет-бутил, 3-метилбутил или 2-метилбутил; R₃ водород, метил или этил, при условии, что R₁ и R₂ не являются одновременно метилом, а также, что когда R₃ водород, то R₁ и R₂ не являются одновременно н-пропилом и н-гептилом. 3. Производные 3,3′ -дитиобис(пропионовой кислоты) общей формулы по п.1, отличающийся тем, что R₁ и R₂ изопропил, а R₃ - метил. 4. Производные 3,3′ -дитиобис(пропионовой кислоты) общей формулы I по п. 1, отличающийся тем, что R₁ и R₂ н-пентил, а R₃ метил. 5. Производные 3,3′ -дитиобис(пропионовой кислоты) общей формулы I по п. 1, отличающийся тем, что R₁ и R₂ н-гептил, а R₃ метил или этил. 6. Производные 3,3′ -дитиобис(пропионовой кислоты) общей формулы по п. 1, отличающийся тем, что R₁ и R₂ изопропил, а R₃ - водород. 7. Производные 3,3′ -дитиобис(пропионовой кислоты) общей формулы по п. 1, отличающийся тем, что R₁ и R₂ трет-бутил, а R₃ - водород. 8. Состав, обладающий иммуномодулирующим действием, включающий активный ингредиент и целевые добавки, отличающийся тем, что в качестве активного ингредиента используют производные 3,3′ -дитиобис(пропионовой кислоты) общей формулы по п.1 или их стереоизомеры при следующем содержании ингредиентов, мас.

Активный ингредиент 0,1 10,0
Целевые добавки Остальное