ПРОИЗВОДНЫЕ ОМЕГА-ФЕНИЛАЛКАНОВЫХ КИСЛОТ, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ АНТИГЛЮКОКОРТИКОИДНЫЕ, АНТИАНДРОГЕННЫЕ И АНТИПРОГЕСТОМИМЕТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА Российский патент 1995 года по МПК C07J1/00 A61K31/56 

Изобретение относится к новым стероидным соединениям, проявляющим ценные фармакологические свойства.

Более конкретно, изобретение относится к производным омега-фенилалкановой кислоты, которые проявляют антиглюкокортикоидные, антипрогестомиметические, андрогенные или антиандрогенные свойства.

Известные стероидные соединения аналогичного действия, например описанные в патенте СССР N 1447289, на имя того же заявителя, являются практически нерастворимыми в воде продуктами. Так, соединения RU 38486 этого патента, выпускаемое во Франции под маркой Мифежин (с названием Мифепристон согласно общему международному классификатору) имеет растворимость в воде, меньшую или равную 0,5%
Цель изобретения разработка эффективных по активности стероидных соединений, которые были бы хорошо растворимы в воде, что позволило бы расширить спектр препаративных форм этого лекарства.

Поставленная цель достигается с помощью новых производных омега-фенилалкановых кислот общей формулы
где М атом натрия; R₁ гидроксигруппа, R₂ -С=С-СН₃, -С-С-ОН, -СН₂-С-СН, -СН₂-СН₂-СН₂-ОН, -СН₂-СН=СН₂ и -С-С-Сl.

Соединения формулы I могут быть получены путем взаимодействия соединения формулы II
c этиловым эфиром бромуксусной кислоты в присутствии азотного основания с получением соединения формулы III
которое затем подвергают щелочной обработке для получения продукта 1.

Используемым азотным основанием предпочтительно является триэтиламин.

Соединения согласно изобретению могут употребляться в качестве лекарств при борьбе главным образом с побочными явлениями глюкокортикоидов, они позволяют также бороться против расстройств, связанных с гиперсекрецией глюкокортикоидов и в частности против старения вообще и в особенности против гипертензии, глаукомы, атеросклероза, остеопороза, диабета, тучности, а также при депрессии иммунитета и бессоницы.

Соединения, обладающие антипрогестомиметическими свойствами могут использоваться для приготовления средств концентрации или в качестве средств прерывания беременности.

Продукты могут также употребляться в качестве менструальных циклов у женщины и вообще у теплокровных животных самок.

Кроме того, соединения, которые обладают антипрогестомиметическими свойствами, могут также использоваться при лечении гормональных расстройств, кроме того они могут представлять интерес при лечении гармонозависимых новообразований.

Их действие на гипофизарные выделения делает возможным их употребление в случае менопаузы.

Сединения могут также проявлять прогестомиматические свойства и таким образом могут употребляться при лечении аменорей, дисменорей и лутоидных недостатков.

Эти продукты, которые обладают антиандрогенными свойствами, могут употребляться при лечении гипертрофии и рака простаты, гипервоспроизведения, анемии, гирсутизма и акне.

Наконец, соединения, которые проявляют антипролиферационные, антиэстрогенные и/или эстрогенные свойства, могут употребляться при лечении гормонозависимых карпином, как например грудных карционом и их метастаз. Эти свойства делают возможным употребление продуктов при лечении доброкачественных образований груди.

Позология изменяется в зависимости от заболевания и пути введения, например, она может изменяться между 10 мг до 1 г в день для взрослого через рот.

Новые соединения хорошо растворимы в воде, что позволяет их выпускать в виде питьевых растворов, носовых или ушных растворов, глазных капель, аэрозолей, растворов для впрыскивания (внутримышечное или внутрисосудистое).

Испытания по растворимости соединений данного изобретения показали следующее.

Соединения примеров 1, 7, 8, 9 имеют растворимость выше 50% Соединения примеров 2, 4, 5 и 6 имеют растворимость выше 20% Этот процент растворимости показывате, например, что более 50 г соединений, полученных в примерах 8 и 9, растворимы в 100 см³ (или в 100 г) воды, что составляет значительное увеличение растворимости по сравнению с известным продуктом.

Следующие примеры иллюстрируют изобретения, но не ограничивают его.

П р и м е р 1. Соль натрия [[4-[17бета-гидрокси-3-оксо-17альфа (1-пропинил)эстра, 4,9-диен-11бета-ил]фенил]метиламино]ук-сусной кислоты.

Стадия А. Этиловый эфир [[4-[17-бета-гидрокси-3-оксо-17альфа (1-пропинил)эстра, 4,9-диен-11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

1,66 г 17бета-гидрокси 11-[4-(метиламино)фенил] 17альфа (1-пропинил)эстра-4,9-диен-3-она растворяют с 3,2 см см³ триэтиламина в 60 см³ бензола, к раствору, нагреваемому с рефлюксом в атмосфере азота прибавляют 3,2 см³ этилового эфира бромуксусной кислоты. После охлаждения реакционную среду разбавляют водным раствором бикарбоната натрия, органический слой экстрагируют, промывают водой, сушат, а затем перегоняют. Хроматографируют на двуокиси кремния смесью циклогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (1-1) и получают 2 г продукта, которые перекристаллизовывают в смеси хлористый метилен-изопропиловый эфир, чтобы получить 1,7 целевого продукта. Т.пл. 110^оС приблизительно. (альфа) _D + 120^о (к 1% в СНСl₅).

Rf 0,36 (хроматография на тонком слое, подложка SiO₂, элюант: смесь циклогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (1-II).

Стадия Б. Соль натрия [[4-[17бета-гидрокси-3-оксо-17альфа (1-пропинил)эстра-4,9-диен-11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

0,5 г сложного эфира, полученного выше, обрабатывают 1 см³нормального раствора едкого натра в 10 см³ абсолютного этанола при комнатной температуре. После выдерживания в течение 15 ч при этой температуре раствор упаривают под уменьшенным давлением, полученный остаток растворяют в минимальном количестве 50%-ного раствора метанола в воде и хроматографируют на Лихросорб КС 18^R. Сперва элюируют с 70%-ным метанолом, а затем 50%-ным метанолом в воде. Таким образом выделяют 0,35 г целевого продукта.

(альфа)_D +137^o (к IМ в ЕтОН).

Rf 0,6 (хроматография на тонком слое. Двуокись кремния КС 18 Ватман ^R, элюант: 70%-ный водный раствор метанола).

П р и м е р 2. Соль натрия [[4-[17бета-гидрокси-17альфа-(3-гидрокси-1-пропинил) 3-оксо-эстра-4,9-диен-11бета-ил] фенил] метиламино]уксусной кислоты.

Стадия А. Этиловый эфир [[4-[3,3[1,2-этандиилбис (окси)] 5альфа, 17бета дигидрокси-17альфа [3-(тетрагидро-2-пирани- локси) 1-пропинил]эстр-9-ен-11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

7,1 г (этандиил) циклического ацеталя 5альфа, 17бета дигидрокси-11бета [4-(метиламино)фенил] 17альфа [3-(тетрагидро-2-пиранилокси)-1-пропинил] эстр-9-ен-3-она растворяют с 8 см³ триэтиламина в 140 см³ тетрагидрофурана. К раствору с рефлюксом прибавляют в течение 50 мин раствор 5 см³ этилового эфира бромуксусной кислоты в 25 см³ тетрагидрофурана; после 3-часового перемешивания с рефлюксом заново прибавляют 1 см³ триэтиламино, а затем 0,5 см³этилового эфира бромуксусной кислоты и реакционную среду нагревают 1 ч с рефлюксом, а затем после охлаждения выливают в водный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты. Органический слой промывают водой, сушат и упаривают под уменьшенным давлением; полученный остаток хроматографируют на двуокиси кремния, элюируя смесью циклогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (I-I). Таким образом получают 5,6 г целевого продукта. Rf 0,32 (хроматография на тонком слое, основа Двуокись кремния элюант: смесь циклогексан этиловый эфир уксусной кислоты (I-I)).

Стадия Б. Этиловый эфир [[4-[17бета- гидрокси-17альфа (3-гидрокси-1-пропинил) 3-оксо-эстра-4,9-диен-11-бета-ил] фенил] метиламино]уксусной кислоты.

0,5 г полученного на предыдущей стадии продукта растворяют в 5 см³метанола с 5 см³ 2н. раствора соляной кислоты и таким образом полученный раствор оставляют на 2 ч при комнатной темературе, а затем нейтрализуют водным раствором бикарбоната натрия и экстрагируют хлористым метиленом, органический слой промывают водой, сушат и упаривают. Получают сырой продукт, который перекристаллизовывают в серном эфире, чтобы дать 0,32 г целевого продукта.

Т.пл.110-140^oC.

(альфа)_D +109 ^о(к 1% в СНСl₃).

Rf 0,53 (хроматография на тонком слое, основа, двуокись кремния, элюант: этиловый эфир уксусной кислоты.

Стадия В. Соль натрия [[4-[17бета-гидрокси-17альфа-(3-гидрокси-1-пропинил) 3-оксо-эстра-4,9-диен-11бета-ил]фенил] метиламино]уксусной кислоты.

0,32 г полученного на предыдущей стадии продукта растворяют с 1,5 см³ метанола и 0,55 см³ нормального раствора едкого натра при 60^оС в атмосфере азота. После 80 мин при этой температуре смесь охлаждают, а затем хроматографируют на Бондапак С 18^R, элюируя смесью метанол-вода (25-75) а затем (30-70). Получают 280 мг целевого продукта. (альфа) _D +133^о (к 1% в ЕтОН).

П р и м е р 3. Соль натрия (Z) [[4-[17бета-гидрокси-17 альфа (3-гидрокси-1-пропенил) -3оксо-эстра-4,9 диен -11-бета-ил] фенил]метиламино] уксусной кислоты.

Стадия А. Этиловый эфир (Z) [[4-[3,3-[1,2-этандиилбис-(окси)] 5альфа, 17бета-дигидрокси-17альфа [3-(тетрагидро-2-пи- ранилокси) 1-пропенил]эстр-9-ен-11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты и его изомер (Е).

0,8 г продукта, полученного на стадии А примера 2, растворяют в 16 см³ этилового эфира уксусной кислоты с 0,3 мл пиридина, 12 см³гидроокиси палладия на сульфате бария (10%) прибавляют к раствору и проводят гидрогенизацию 40 мин (поглощение 27,1 см³ водорода). Продувают азотом, отсасывают катализатор и упаривают фильтрат. Получают 0,8 г смеси изомеров (Е) и (Z), которые разделяют хроматографией на двуокиси кремния элюируя смесью циклогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (1-1). Таким образом собирают 0,655 г изомера (Z) и 0,065 г изомера (Е).

Стадия Б. Этиловый эфир (Z) [[4-[17бета-гидрокси-17альфа (3-гидрокси-1-пропенил) 3-оксо-экстра-4,9-диен-12бета-ил] фенил] метиламино] уксусной кислоты.

6,3 г продукта (изомер Z), полученного на предыдущей стадии, растворяют в 60 см³ этанола, затем прибавляют 60 см³ 2 н. раствора соляной кислоты, раствор оставляют на 5 ч при комнатной температуре, а затем осторожно выливают в водный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют хлористым метиленом. Органический слой промывают водой, сушат, а затем упаривают под уменьшенным давлением. Получают 5,27 г смеси, которую хроматографируют на двуокиси кремния элюируя смесью циклогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (2-8). Получают 0,486 г целевого продукта. Т.пл. 163^оС. (альфа)_D +20^о (к 1% в хлороформе).

Rf 0,29 (хроматография на тонком слое, основа: двуокись кремния, элюант: смесь циклогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (2-8)).

Стадия В. Соль натрия (Z) [[4-[17бета-гидрокси-17альфа (3-гидрокси-1-пропенил) 3-оксо-эстра-4,9диен-11бета-ил] фенил]метиламино]уксусной кислоты.

0,78 г полученного на предыдущей стадии продукта растворяют в 3,5 см³ метанола и 1,5 см³ нормального раствора едкого натра при 60^оС под уменьшенным давлением. Нагревание поддерживают 1 ч, а затем раствор охлаждают и хроматографируют на Бондапак ^R КC 18, элюируя смесью метанол-вода (4-6). Элюаты диофилизируют. Получают 0,712 г целевого продукта. (альфа) _D+202^о (к 1% в ЕтОН).

Rf 0,60 (хроматография на тонком слое, основа: овуокись кремния КС 18 Ватман ^R, элюант: метанол-0,05 М водный раствор этилового эфира уксусной кислоты (65-35).

П р и м е р 4. Соль натрия [[4-[17бета-гидрокси-17альфа(3 -гидрокси-пропил) 3-оксо-эстра-4,9-диен-11бета-ил]фенил] метиламино]уксусной кислоты.

Стадия А. Этиловый эфир [[4-[3,5-[этандиилбис (окси)] 5альфа, 17бета-дигидрокси-17альфа [3-(тетрагидро-2-ппиранилок- си)пропил]эстр-9-ен -11-бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

5,6 г продукта, полученного на стадии А примера 2, растворяют в 70 см³ толуола, 1,38 г реактива Вилкинсона [хлортрис(трифенилфосфин)родий] прибавляют и гидрогенизируют до насыщения, после упаривания под уменьшенным давлением получают 7,2 г красной смолы, которые, после хроматографии на двуокиси кремния и элюируя со смесью циклогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (1-1), приводят к 5,6 г целевого продукта.

Стадия Б. Этиловый эфир [[4-[17бета-гидрокси-17альфа(3-гидрокси -пропил)-3-оксо-эстра-4,9диен-11бета-ил]фенил]-мети- ламино]уксусной кислоты.

5,6 г полученного на предыдущей стадии продукта растворяют в 50 см³метанола с 50 см³ 2 н. соляной кислоты. Раствор оставляют 2 ч при комнатной температуре, а затем выливают в водный раствор бикарбоната натрия и экстрагируют хлористым метиленом. Органический слой промывают водой, сушат и упаривают. Полученный осадок хроматографируют на двуокиси кремния, элюируя смесью циклогексанэтиловый эфир уксусной кислоты (2-8). После перекристаллизации в серном эфире получают 2,286 г целевого продукта, Т.пл. 100^оС.

(альфа)_D +175^о (к 1% в СНCl₃).

Rf 0,30 (хроматография на тонком слое, основа: двуокись кремния, элюант: этиловый эфир уксусной кислоты).

Стадия В. Соль натрия [[4-[17бета-гидрокси-17альфа(3-гидрокси-пропил) 3-оксо-эстра-4,9-диен-11бета-ил]фенил] метиламино] уксусной кислоты.

Раствор 1,5 см³ нормального раствора едкого натра в 4 см³ метанола дегазируют при барботировании азота и вводят 0,8 г полученного предыдущей стадии продукта. После нагревания при 80^оС в течение 1 ч раствор охлаждают, хроматографируют на колонке Бондапак, элюируя смесью метанол-вода (3-7). Элюаты лиофилизируют, получают 0,637 г целевого продукта. (альфа)_D+179^о (к 0,95% в ЕтОН).

П р и м е р 5. Соль натрия [[4-[3-оксо-спиро [эстра-4,9-диен-17бета, 2'(5'Н)фуран]11бета-ил]фенил] метиламино]уксусной кислоты.

Стадия А. Этиловый эфир [[4-[3-оксо-спиро [эстра-4,9-диен-17бета, 2'(5'Н)фуран]11бета-ил]фенил]метиламино]уксусной кислоты.

2,08 г продукта, полученного на стадии Б примера 3, растворяют в 40 см³ пиридина, к охлажденному раствору до 0^оС при перемешивании прибавляют 4 г хлористого тозила, доводят до комнатной температуры и реакцию ведут 4 ч. После разбавления водой при охлаждении и экстракции хлористым метиленом органический слой промывают водой, сушат и упаривают досуха под уменьшенным давлением. Сырой продукт хроматографируют на двуокиси кремния, элюируя смесью циклогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (1-1). Получают 1,74 г целевого продукта. (альфа)_D+229^о (к в СНСl₃).

Rf 0,38 (хроматография на тонком слое, основа: двуокись кремния, элюант: смесь цилкогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (6-4)).

Стадия Б. Соль натрия [[4-[3-оксо-спиро[эстра-4,9-диен-17бета, 2'(5'Н)фуран/11бета-ил]фенил]метиламино]уксусной кислоты.

1,01 г полученного на предыдущей стадии продукта растворяют в 30 см³ метанола и 2 см³ нормального раствора едкого натра, полученный раствор перемешивают под азотом 15 часов с половиной, а затем упаривают под уменьшенным давлением без нагревания. Полученный остаток хроматографируют на Бондапак КС 18^R, элюируя смесью метанол-вода (45-55). Элюат лиофилизируют и получают 0,655 г целевой соли. (альфа)_D +253^о (К 1% в СНСl₃).

П р и м е р 6: Соль натрия [[4-[4',5'-дигидро-3-оксо-спиро[эстра-4,9-диен-17бета, 2'(3'H)фуран]11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

Стадия А: Этиловый эфир [[4-[4',5'-дигидро-3-оксоспиро[эстра-4,9-диент-17-бета, 2'(3'Н)фуран]11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

1,71 г продукта, полученного на стадии Б примера 4, растворяют в 34 см³ пиридина. После охлаждения на ледяной ванне таким образом полученного раствора прибавляют 1,7 г хлористого тозила при перемешивании, а затем реакционную среду доводят до комнатной температуры и оставляют на 3 ч. Затем прибавляют несколько кусочков льда, затем воды и потом экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты. Органический слой промывают водой, сушат и упаривают до получения остатка, который хроматографируют на двуокиси кремния, элюируя смесью циклогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (7-3) и таким образом получают 1,375 г целевого продукта. (альфа)_D +174^о (к 1% в СНСl₃). Rf 0,33 (хроматография на тонком слое, основа: двуокись кремния, элюант: смесь циклогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (7-3).

Стадия Б. Соль натрия [[4-[4'5'-дигидро-3-оксо-спиро[эстра -4,9-диен-17бета, 2'(3'Н)фуран]11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

0,92 г полученного на предыдущей стадии продукта растворяют в 9 см³метанола и 1,8 см³ нормального раствора едкого натра. После нагревания 1 ч на масляной бане при 70^оС под уменьшенным давлением, раствор концентрируют и хроматографируют на Бондапак ^R(10 мкм) элюируя смесями метанол-вода (30-70), а затем (50-50). Элюат лиофилизируют и получают 0,65 г целевой соли. (альфа)_D +187^о (к 1% в этаноле).

П р и м е р 7. Соль натрия [[4-[17бета-гидрокси-3-оксо-17альфа (2-пропинил)эстра-4,9-диен-11бета-ил]фенил]метиламино]уксусной кислоты.

Стадия А. Этиловый эфир [[4-[17бета-гидрокси-3-оксо-17альфа- (2-пропинил)эстра-4,9-диен-11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

1,178 г 17бета-гидрокси-11бета-[4-(метиламино)фенил] 17альфа (2-пропинил) эстра-4,9-диен-3-она растворяют в 41 см³ толуола с 2,3 см³триэтиламина. Затем прибавляют 2,3 см³ этилового эфира бром-уксусной кислоты и раствор перемешивают 1 ч с половиной при 80^оС, охлаждают, а затем разбавляют насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Водный слой декантируют и заново экстрагируют этиловым эфиром уксусной кислоты. Органический слой промывают водой, сушат на сульфате натрия и упаривают досуха под уменьшенным давлением. Полученный остаток хроматографируют на двуокиси кремния элюируя смесью этиловый эфир уксусной кислоты эссенция G (50-50) и получают 1,038 г продукта, который перекристаллизовывают в смеси хлористый метилен изопропиловый эфир, чтобы получить 0,968 г, соответствующих целевому продукту. Т.пл. 195^оС. Rf0,25 (хроматография на тонком слое, основа: двуокись кремния F₂₅₄ Мак 60^R, элюант: смесь циклогексан-этиловый эфир уксусной кислоты (7-3)).

Стадия Б. Соль натрия [[4-[17бета-гидрокси-3-оксо-17альфа (2-пропинил)эстра-4,9-диен-11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

0,894 г полученного на предыдущей стадии продукта растворяют в 18 см³ абсолютного этанола с 1,8 см³ нормального раствора едкого натра. После 9-часового перемешивания при комнатной температуре, прибавляют 13 см³ абсолютного этанола и перемешивание продолжается 25 ч. Раствор фильтруют и фильтра упаривают досуха под уменьшенным давлением. Полученный остаток хроматографируют на Бондапак КС18^R, элюируя смесями метанол-вода (30-70), а затем (50-50). Элюат концентрируют под уменьшенным давлением, чтобы удалить метанол, фильтруют на мембране мюлтипор 0,45 мк и лиофилизируют. Таким образом получают 0,704 г целевого продукта. (альфа)_D +192 ±3^о (к 1% в ЕтОН).

Rf 0,73 (хроматография на тонком слое, основа: КС 18 Ватман ^R, элюант: смесь метанол-вода (70-30)).

П р и м е р 8. Соль натрия [[4-[17-бета-гидрокси-3-оксо-17альфа (2-пропенил)эстра-4,9-диен-11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

Стадия А. Этиловый эфир [[4-[17бета-гидрокси-3-оксо-17альфа (2-пропенил)эстра-4,9-диен-11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

Получение продукта ведут исходя из 1,068 г 17бета-гидрокси-11бета [4-(метиламино)фенил] 17 альфа (2-пропенил)эстра-4,9-диен-3-она в 37 см³толуола с 2,1 см³ триэтиламина и 2,1 см³ этилового эфира бромуксусной кислоты, действуя как на стадии А примера 7. После перекристаллизации в смеси хлористый метилен-изопропи- ловый эфир, получают 1,151 г целевого продукта в виде белых кристаллов. Т.пл.191^оС.

Rf 0,27 (хроматография на тонком слое, основа: двуокись кремния F₂₅₄ Марк 60^R, элюант: смесь этиловый эфир уксусной кислоты ассенции G (50-50)).

Стадия Б. Соль натрия [[4-[17-бета-гидрокси-3-оксо-17альфа (2-пропенил) эстра-4,9-диен-11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

1,079 г полученного на предыдущей стадии продукта растворяют в 22 см³ этанола и 2,17 см³ нормального раствора едкого натра. После 3 ч перемешивания при комнатной темературе прибавляют 3 см³ этанола и перемешивание продолжается 23 ч. Тогда раствор фильтруют и фильтрат упаривают под уменьшенным давлением. Таким образом полученный остаток хроматографируют на КС 18 Бандапак ^R, элюируя смесью метанол-вода (30-70), а затем (50-50). Элюат концентрируют, чтобы удалить метанол, фильтруют и лиофилизируют. Получают 0,878 г целевой соли.

(альфа)_D +203 ±3^о (к 1% в ЕтОН).

Rf 0,63 (Хроматография на тонком слое, основа КС 18 Ватман ^R, элюант: смесь метанол вода (7-3)).

П р и м е р 9. Соль натрия [[4-[21-хлор-17бета-гидрокси-3-оксо-19-нор-17альфа- прегна, 4,9-диен-20-ин-11бета-ил]фенил] метиламино] уксусной кислоты.

Стадия А. Этиловый эфир [[4-[21-хлор-17бета-гидрокси-3-оксо-19-нор-17альфа прегна-4,9-диен-20-ин-11бета-ил]фенил] метиламино] уксусной кислоты.

1,38 г 21-хлор-17-бета-гидрокси-11бета [4-(Метиламино)фенил] 19-нор-17альфа-прегна-4,9-диен-20-ин. 3-она растворяют в 47 см³ толуола с 2,5 см³ триэтиламина. После прибавки 2,5 см³ этилового эфира бром-уксусной кислоты, раствор перемешивают 2 ч при 80^оС, а затем охлаждают и прибавляют к насыщенному водному раствору бикарбоната натрия. Водный слой декантируют и органический слой промывают водой, сушат на сульфате натрия и упаривают досуха под уменьшенным давлением. Полученный сырой продукт хроматографируют на двуокиси кремния, элюируя смесью этиловый эфир уксусной кислоты ассенция (40-60) и после перекристаллизации в смеси хлористый метилен изопропиловый эфир получают 1,555 г целевого сложного эфира. Т.пл. 105^оС.

Rf 0,27 (хроматография на тонком слое, основа: двуокись кремния F₂₅₄ Мак 60^R, элюант: смесь этилового эфира уксусной кислоты эссенция G (1-1).

Стадия Б: Соль натрия [[4-[21-[хлор-17бета-гидрокси-3-оксо-19-норм-17альфа-прегна-4,9-диен -20-ин-11бета-ил]фенил]метиламино] уксусной кислоты.

1,494 г полученного на предыдущей стадии продукта растворяют в 29 см³ абсолютного этанола и 2,9 см³ нормального раствора едкого натра. Раствор перемешивают 22 ч и 30 мин при комнатной температуре, фильтруют и фильтрат упаривают досуха. Полученный остаток хроматографируют на КС 18 Бондапак^R элюируя смесями метанол-вода (30-70), а затем (50-50). Элюат концентрируют, чтобы удалить метанол, фильтруют и лиофилизируют. Получают 1,23 г целевой соли. (альфа)_D 124 ±2,5 ^о (к1% в ЕтОН).

Rf 0,67 (хроматография на тонком слое: основа: КС 18 Ватман ^R, элюант: смесь метанол-вода (70-30).

П р и м е р 10. Рецептура глазных капель может быть следующей: Продукт примера 1 2 г Эксципиент 100 мл
(Природа эксципиента: дистиллированная вода, хлористый натрий, борат натрия, метилцеллюлоза).

Фармакологическое исследование.

Измерение относительного аффинитета связи по отношению к рецепторам стероидных гормонов.

Глюкокортикоидный рецептор загрудинной железы крысы.

У крыс-самцов, весящих 160-200 г, удаляются надпочечники, после этого удаления животные умерщвляются, загрудные железы вынимают и гомогенизируют при 0^оС при помощи Поттера тефлон-стекло в буферном растворе (ТSD) Трис 10 мМ, Сахароза 0,25 М, дитиотркйтол 2 мМ, НСl рН 7,4 (1 г ткани на 10 мл ТSD). Продукт гомогенизации подвергают затем ультрацентрифугированию (105000 г ˙90 мн) при 0^оС. Таким образом полученные аликвоты части плавающей части "цитозоля", инкубируют при 0^оС 4 ч и 24 ч при постоянной концентрации (Т 2,5 нМ) насыщенного дексаметазона тритием, в присутствии увеличи- вающихся концентраций (0-2,500 нМ), либо холодного дексаметазона или холодного исследуемого продукта. Концентрация связанного тритием насыщенного дексаметазона (В) измеряется затем в каждом продукте инкубации техникой поглощения уголь-декстран.

Прогестероновый рецептор матки кролика.

Не достигшим половой зрелости крольчихам массой около 1 кг вводят накожной аппликацией 25 мкг эстрадиола. Пять дней спустя животных умерщвляют, матку вынимают, взвешивают и гомогенизируют при 0^оС при помощи Поттер тефлон-стекла в буферном растворе (ТS) Трис 10 мМ, сахароза 0,25 М, НСl рН 7,4 (1 г ткани на 50 мл TS). Продукт гомогенизации затем ультрацентрифугируют (105000 г х 90 мн) при 0^оС. Таким образом полученные аликвотные части плавающей части "цитозоля" подвергают инкубации при 0^оС 2 ч и 24 ч при постоянной концентрации (T 5 нм) тритием насыщенного тритием соединения 17,21-диметил-19-нор-4,9-прегналиен-3,20-диона. сильного прогестомиметического средства, обладающего сильным сродством к рецептору прогестерона, в присутствии увеличивающихся концентраций (0-2500 нМ, холодного прогестерона, или исследуемого продукта.

Концентрацию связанного насыщенного тритием соединения измеряют затем в каждом продукте инкубации техникой поглощения уголь-декстран.

Андрогенный рецептор простаты крысы.

Крысы самцы в 160-200 г подвергают кастрации. 25 ч после кастрации животных умерщвляют, простаты вынимают, взвешивают и гомогенизируют при 0^оС, при помощи Поттер тефлон-стекла в буфере (ТSDPM) Трис 10 мМ, сахароза 0,25 М, фенилметансульфонилфторид 0,1 н молибдат 20 мМ, дитиотрейтол 2 мМ, НСl 7,4 (1 г ткани на 5 мл TSDPМ). Продукт гомогенизации затем ультрацентрифугируют (105000 г х 60 мн) при 0^оС. Аликвотные части плавающего продукта "цитозоля" инкубируют при 0^оС с постоянной концентрацией тестостерона насыщенного тритием, в присутствии увеличивающихся концентраций (0-1000 нМ) холодного тестостерона или исследуемого продукта. После инкубации в течение 1/2 ч и 24 ч концентрацию связанного тритий содержащего тестостерона (В) измеряют в каждом продукте инкубации техникой поглощения уголь-декстран.

Вычисление относительного аффинитета связи.

Вычисление относительного аффинитета связи (ОАС) одинаковое для всех рецепторов.

Чертят 2 следующие кривые: процентное отношение связанного тритием насыщенного гормона В/Т в зависимости от логарифма концентрации холодного гормона эталона и В/Т в зависимости от логарифма концентрации холодного излучаемого продукта.

Определяют прямую уравнения J₅₀= + /2, где = процентное содержание связанного тритий содержащего гормона для инкубации этого гормона при концентрации (Т).

процентное содержание связанного тритий содержащего гормона для инкубации этого гормона при концентрации (Т) в присутствии большого избытка холодного гормона (2500 ˙10^-9 М).

Пересечения прямой I₅₀ с кривыми позволяют определить концентрацию холодного гормона-эталона (СН) и холодного изучаемого продукта (СХ) которая ингибируют 50% связи тритий содержащего гормона с рецептором.

Относительный аффинитет связи (ОАС) изучаемого продукта определяется уравнением
OAC 100
Полученные результаты приведены в табл.1.

Анти-глюкокортикоидная активность по отношению к диксаметазону.

Изучение "в пробирке".

Введение уридина в клетки зобной железы крысы.

Глюкокортикоиды вызывают на уровне лимфоидной ткани торможение введения нуклеозида. Измерение вводимого радиоактивного уридина в клетки зобной железы в присутствии изучаемого продукта, позволяет оценить его глюкокортикоидную активность.

Метод.

Метод основан на технике, описанной Досс и Колл (3). Зобную железу крысы с удаленными надпочечниками (160-180 г) вынимают, разрезают тонкими ломтиками и медленно гомогенизируют при помощи гомогенизатора тефлон-стекло в растворе Ганкса. Полученная клеточная суспензия фильтруется на марле, а затем центрифугируется при 800 г х 10 мн. Затем заново повторяют центрифугирование при 800 г х 10 мн. Полученный осадок заново суспензируют в питательной среде (М. Е. М. Жибко) и концентрацию клеток доводят до около 20 ˙10⁶ клеток на мл. Аликвотные части по 250 мкл инкубируют под карбогеном 3 ч при 37^оС концентрацией 5 ˙10^-8 М дексаметазона в присутствии или в отсутствии увеличивающихся концентраций продукта (10^-8 М 10^-6 М).

Затем прибавляют в каждый продукт инкубации 0,1 Мккюри насыщенного тритием уридина и продолжают инкубацию 1 ч. Потом продукты инкубации охлаждают и прибавляют 1 мл 5%-ного холодного раствора трихлоруксусной кислоты (масса/объем) (ТХУ). Осадки собирают на фильтрах Ватман G F/C и промывают 4 х 2 л 5%-ной ледяной ТХУ. Удержанная на фильтрах радиоактивность (представляющая насыщенный тритием уридин, введенный в клетки зобной железы) измеряется при помощи спектрометра жидкой сцинтилляции.

Клетки зобной железы
торможения введения уридина
Молярная концентрация изучаемого продукта приведены в табл.2.

Из измерений следует, что продукт примера 1, проявляет хорошую анти-глюкокортикоидную активность.

Использование: в качестве стероидных соединений, проявляющих ценные фармакологические свойства. Соединения являются производными омега-фенилалколовых кислот ф-лы I где M Na, R₁ R₂ C ≡ C-CH₃ -C ≡ C-OH, -CH₂-C ≡ CH -CH₂-CH₂-CH₂-OH -CH₂-CH=CH₂ или -C ≡ CCl Продукт 1 получают действием этилового эфира бромуксусной кислоты соответствующего метиламинопроизводного соединения 1 в присутствии азотного основания, с последующим щелочным гидролизом полученного сложного этилового эфира. 2 табл.

1. Производные омега-фенилалкановых кислот общей формулы

где M натрий;
R₁ гидроксигруппа;

-CH₂-CH₂-CH₂-OH,

проявляющие антиглюкокортикоидные, антиандрогенные и антипрогестомиметические свойства.