2,6- N,N′ -БИС[1-(ДИМЕТИЛАМИНО)ЭТИЛИДЕН]- 5 -О-( 4,4′ -ДИМЕТОКСИТРИФЕНИЛМЕТИЛ)-2-АМИНО- 2′ -ДЕЗОКСИАДЕНОЗИН- 3′ -О-АЛКИЛ- N,N′-ДИИЗОПРОПИЛАМИДОФОСФИТЫ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 1995 года по МПК C07H19/20 

Изобретение относится к области химии нуклеозидов и нуклеотидов, а именно к 2,6-N, N'-бис-[1-(диметиламино)этилиден]-5-0(4,4'-диметокситрифенилметил)-2-а мино2'-дезоксиаденозин-3'-O-алкил-N,N -диизопропиламидофосфитам, используемым для синтеза модифицированных олигодезоксинуклеотидов, которые находят широкое применение в молекулярной биологии и медицине в качестве высокоспецифичных зондов и праймеров, и способу их получения.

Известен ряд защищенных производных 2-амино-2'-дезоксиаденозина, применявшихся для синтеза модифицированных олигодезоксинуклеотидов. Наилучшим из них является 2,6-N, N'-бис-изобутирил-5'-O-(4,4'-диметокситрифенилметил)-2-амино- 2'-дезоксиаденозин-3'-O-метил-N,N-диизопро- пиламидофосфит (1) [1] Однако известно, что 2,6-диацилпроизводные 2-амино-2'-дезоксиаденозина очень легко подвергаются депуринизации при кислотном деблокировании 5'-диметокситритильных производных [2] и хотя в работе [1] утверждается, что 2,6-бис-изобутирильное производное устойчиво в условиях кислотного деблокирования, однако никакие данные не приводятся и остается неизвестным, возможно ли практическое использование таких производных 2-амино-2'-дезокси- аденозина для синтеза практически важных олигонуклеотидов, содержащих хотя бы 20-30 звеньев.

Целью изобретения является создание полностью защищенного производного 2-амино-2'-дезоксиаденозина, пригодного для получения практически важных олигонуклеотидов в стандартных условиях автоматического синтеза.

Цель изобретения достигается 2,6-N,N'-бис-[1-диметиламино)этилиден]-5-O-(4,4'- диметокситрифенилметил)-2- амино-2'-дезоксиаденозин-3'-О-алкил-N, N-диизопро- пиламидофосфитами формулы I:
где R=CH₃, (CH₂)₂CN, и способом их получения, заключающимся в том, что 2-амино-2'-дезоксиаденозин обрабатывают диметилацеталем N,N-диметилацетамида в абс. метаноле и полученный 2,6-N,N'-[1-(диметиламино)этилиден]-2-ами- но-2'-дезоксиаденозин переводят в 5'-(4,4'-диметокситрифенил-метильное) производное, которое после очистки фосфитилируют соответствующим фосфитилирующим реагентом (см. схему 1):


O
где R (CH₂)₂CN (4a)
CH₃ (4b)
П р и м е р 1. а) 2-амино-2'-дезоксиаденозин (1) (1,81 г, 6,37 ммоль) в атмосфере сухого аргона суспендируют в 20 мл абс. метанола, добавляют 4,23 г (25,5 ммоль, 4,65 мл) диметилацеталя N,N-диметилацетамида и перемешивают при 40^оС 24 ч. Реакционную смесь упаривают в вакууме, остаток растворяют в 5 мл абс. этанола и высаживают в 200 мл сухого эфира. Осадок фильтруют, промывают эфиром и сушат в вакууме. Получают 2,55 г (99%) (2), который без очистки используют в следующей стадии.

б). 2,6-N, N'-[1-(диметиламино)этилиден]-2-амино-2'-дезоксиаденозин (2) (2,55 г, 6,28 ммоль) сушат упариванием с пиридином (2 х 10 мл), растворяют в 50 мл абс. пиридина и добавляют 2,38 г (7,03 ммоль) 4,4'-диметокситритилхлорида и перемешивают 2 ч. Реакционную смесь упаривают в вакууме, остаток растворяют в 125 мл бензола, промывают 100 мл 2%-ного раствора Na₂CO₃ и 100 мл насыщенного раствора NaCl, сушат б/в Na₂SO₄ и упаривают. Остаток делят на колонке с Al₂O₃, элюируя смесью бензол хлороформ (от 1:99 до 99:1), содержащей 2% триэтиламина. Фракции, содержащие продукт (3), упаривают в вакуум и получают 3,10 г 2,6-N,N'-бис-[1-(диметиламино)этилиден]-5'-O-(4,4'- димет- окситрифенилметил)-2-амино-2'-дезокси- аденозина (3) (68% в расчете на 2-амино-2'-дезоксиаденозин).

в). 2,6-N, N'-бис-[1-(диметиламино)этил- иден]-5-O-(4,4'- диметокситрифенилметил)-2-амино-2'-дезоксиаденозин (3,10 г, 4,38 ммоль) сушат упариванием с абс. хлористым метиленом (содержащим 10% пиридина (2 х 30 мл), растворяют в 20 мл хлористого метилена, добавляют 2,1 мл N,N,N',N'-тетраизопропил-О-цианэтилдиамидофосфита и 0,37 г диизопропиламмониевой соли тетразола и перемешивают 2,5 ч. Реакционную смесь разбавили 50 мл бензола и экстрагировали 3 х 15 мл насыщ. раствора NaHCO₃, затем насыщ. раствором NaCl, сушат Na₂SO₄, упаривают в вакууме, растворяют в 7-8 мл бензола и осаждают в пентан (500 мл). Выпавший целевой продукт (4а) фильтруют, промывают пентаном и сушат в вакууме. Получают 3,16 г (79,4%) хроматографически чистого вещества: масс-спектр m/e=909 (M⁺), ЯМР ³¹Р.

П р и м е р 2. Аналогично из 2-амино-2'-дезоксиаденозин (1) (1,81 г, 6,37 ммоль) получают 3,10 г (3), который сушат упариванием с абс. хлористым метиленом (содержащим 10% пиридина) (2 х 30 мл), растворяют в 20 мл хлористого метилена, добавляют 1,9 мл N,N,N',N'-тетраизопропил-О-метилдиами- дофосфита, перемешивают 2,5 ч и после аналогичной обработки получают 3,39 г (89% ) хроматографически чистого (4б): масс-спектр m/e=870 (М⁺), ЯМР- ³¹Р.

Использование: химия нуклеозидов и нуклеотидов, а именно 2,6- N,N′ -бис-[1-(диметиламино)этилиден] -5-0- 4,4′ -диметокситрифенилметил)-2-амино- 2′ дезоксиаденозин-3′ -0-аликл- N,N′ -диизопропиламидофосфиты, используемые для синтеза модифицированных олигодезоксинуклеотидов, и способ получения. Сущность: проудкт-2,6- N,N′ -бис-[1-(диметиламино) этитлиден] -5-0- (4,4-диметокситрифенилметил) -2-амино- 2′ -дезоксиаденозин- 3′ -0-алкил-N,N-диизопропиламидофосфиты в качестве мономеров для автоматизированного синтеза модифицированных олигодезоксинуклеотидов и способ их получения из 2-амино- 2′ -дезоксиаденозина путем обработки диметилацеталем N,N-диметилацетамида, 4,4′ -диметокситритилхлоридом и фосфитилирования. 2 с. и 1 з.п. ф-лы.

1. 2,6- N,N′ -бис[1-(Диметиламино)этилиден] 5′ O -(4,4′ -диметокситрифенилметил)-2-амино- 2′ -дезоксиаденозин- 3′ -0-алкил-N,N-диизопропиламидофосфиты общей формулы

где R-CH₃,(CH₂)₂CN. 2. Способ получения 2,6- N,N′ -бис[1-(диметиламино)этилиден] 5′-O-(4,4′ -диметокситрифенилметил)-2-амино- 2′ -дезоксиаденозин- 3′ -0-алкил-N,N-диизопропиламидофосфитов, заключающийся в том, что 2-амино- 2′ -дезоксиаденозин обрабатывают диметилацеталем N,N-диметилацетамида в абсолютном метаноле, полученный 2,6- N,N′ -бис-[1-(диметиламино)этилиден]-2-амино- 2′ -дезоксиаденозин вводят в реакцию с 4,4′ -диметокситрифенилметилхлоридом в пиридине и выделяют 5′ -диметокситритильное производное, которое фосфитилируют соответствующим фосфитилирующим реагентом. 3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что в качестве фосфитилирующего реагента используют β -цианэтил- N,N′- -диизопропиламидохлорфосфит в присутствии третичного алифатического амина или β -цианэтил- N,N,N′,N′ -тетраизопропилдиамидофосфит в присутствии соли тетразола с диизопропиламином.