СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1996 года по МПК A61K35/78 

Предлагаемое изобретение относится к медицине и касается способа получения биологически активного вещества целенаправленного действия из растительного сырья, которое может быть в перспективе использовано при лечении онкологических больных.

Известен способ получения противоопухолевого средства из девясила высокого (Inula Helenium L.) с активным компонентом 13-гексаметиленимино-11,13-дигидролактона путем реакции алантолактона с гексаметиленимином (Дряновска-Нонийска Л. Найденова Е.И. Аврамова П.Д. Попов Д.В. Каромванова М. Х. Противотуморно средство. Авт. свид. N 27257, заявл. 04.07.78, N 40291, опубл. 12.10.79, НРБ).

Недостатком известного способа является незначительное противоопухолевое действие полученного вещества только на одну модель опухоли лейкоз-L-1210, у леченных животных удлинялась продолжительность жизни лишь на 35%
Известен способ получения изоалантолактона путем экстракции корней, корневищ девясила высокого органическим растворителем, упаривания экстракта, очистки, выделения суммы сесквитерпеновых лактонов в виде кристаллического продукта, хроматографирования на сорбенте, перекристаллизации последовательно из петролейного эфира при соотношении кристаллическая сумма растворитель 1: 17-19 их из 40-50%-ного этанола (А.Г.Котов, П.П.Хворост, В.В.Зинченко, Авт. свид. N 1476652).

Недостатком известного способа является трудоемкость и длительность технологического процесса. Противоопухолевая активность данного вещества неизвестна.

Известен также способ получения средства, обладающего противоопухолевой активностью, выбранной авторами в качестве прототипа, заключающийся в экстракции шрота корней девясила высокого изопропиловым спиртом, кристаллизации суммы сесквитерпеновых лактонов из упаренного экстракта, выделении алантолактона путем обработки полученной суммы петролейным эфиром (положит. решение по заявке N 4824988/14 (053696) С.А.Луговской, В.Г.Евдошенко, В.В.Десятниковой, Л.В.Криворучко).

Недостатком известного способа является ограниченное противоопухолевое действие полученного вещества на некоторых видах опухолей, трудоемкость и длительность технологического процесса.

Целью предлагаемого изобретения является расширение спектра действия за счет иммуностимулирующей активности и упрощение процесса.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу получения средства, обладающего противоопухолевой активностью, шрот отход корней девясила высокого (Inula Helenium L.) отход иннулинового производства экстрагируют петролейным эфиром с последующей фильтрацией и упариванием маточника до 0,03-0,035 первоначального объема и кристаллизацией готового продукта.

П р и м е р 1. 1 кг шрота корней девясила высокого заливают 5,0 л петролейного эфира и экстрагируют в течение 40 мин при температуре 45^оС, после чего петролейный эфир сливают и упаривают до 0,03 первоначального объема. Концентрат петролейного эфира фильтруют, а маточник кристаллизуют в течение 2-2,5 ч. Осадок отделяют и сушат.

Осадок 18 г слегка окрашенных кристаллов (1,8% от сырья), представляющих собой сексвитерпеновый лактон эвдесманового ряда изоалантолактон С₁₅Н₂₀О₂.

П р и м е р 2. 1 кг шрота корней девясила высокого заливают 5,0 л петролейного эфира и экстрагируют в течение 40 мин при температуре 45^оС, после чего петролейный эфир сливают и упаривают до 0,032 первоначального объема. Концентрат петролейного эфира фильтруют, а маточник кристаллизуют в течение 2-2,5 ч. Осадок отделяют и сушат.

Осадок 17,5 г слегка окрашенных кристаллов (1,75% от сырья), представляющих собой сесквитерпеновый лактон эвдесманового ряда изоалантолактон С₁₅Н₂₀О₂.

П р и м е р 3. 1 кг шрота корней девясила высокого заливают 5,0 л петролейного эфира и экстрагируют в течение 40 мин при температуре 45^оС, после чего петролейный эфир сливают и упаривают до 0,035 первоначального объема. Концентрат петролейного эфира фильтруют, а маточник кристаллизуют в течение 2-2,5 ч. Осадок отделяют и сушат.

Осадок 17 г слегка окрашенных кристаллов (1,7% от сырья), представляющих собой сесквитерпеновый лактон изоалантолактон С₁₅Н₂₀О₂.

Значение объема концентрата установлено экспериментально. Допускается колебание объема концентрата в пределах 0,03-0,035, что существенного влияния на выход продукта не оказывает.

Объем концентрата
в к первона- 0,02 0,025 0,03 0,035 0,04
чальному объему
Выход продукта 18,0 18,0 18,0 17,0 16,0
Увеличение объема концентрата (0,04% от объема и более) приводит к снижению выхода продукта за счет неполной кристаллизации. А уменьшение объема концентрата экономически нецелесообразно, т.к. не приводит к повышению выхода готового продукта.

В качестве базового объекта взят прототип.

Преимущества заявленного способа по сравнению с базовым:
ускорение технологического процесса;
упрощение технологического процесса: исключается стадия обработки изопропиловым спиртом, а экстракция сырья проводится сразу петролейным эфиром, т.е. исключается лишний растворитель и соответственно выброс его паров в атмосферу, что позволит экономию средств;
получение изомера алантолактона, а в предлагаемом способе изоалантолактона, оказывающего более высокое противоопухолевое действие на различные виды опухолей и проявляющий иммуностимулирующую активность.

Биологические испытания полученного по предлагаемому способу вещества на противоопухолевую активность проводились на линейных мышах С₅₇Bl₆, BDF₁, ДВА₂, крысах "Vistar" и беспородных белых мышах с различными перевиваемыми раковыми опухолями.

Лечение животных в зависимости от условий опыта начиналось через 5, 8 или 10 суток после трансплантации им опухоли и проводилось ежедневно 5-10 дней, путем внутри брюшинного введения переносимой дозы вещества.

В качестве прототипа взят алантолактон, также выделенный из девясила высокого (Inula Helenium L.).

Недостатком прототипа является то, что наряду с меньшей противоопухолей активностью на многих опухолях и меньшим иммуностимулирующим действием он отличается более сложным и более длительным технологическим процессом с использованием изопропилового спирта, что, кроме того, приводит к удорожанию способа.

Вещество (изоалантолактон), полученное по предлагаемому способу, обладает высокой противоопухолевой активностью, оказывая торможение на рост многих опухолей: асцитную опухоль Эрлиха, саркому 180, рак молочной железы Са-755, рак легкого РТЛ-67, меланотическую меланому В-16, саркому крыс С-45.

Как видно из табл.2, у животных, леченых веществом, полученным по предлагаемому способу, установлена более высокая противоопухолевая активность по сравнению с прототипом:
при лечении животных с раком легкого ЛР-67 в минимальной дозе 0,976 мг/кг рост опухоли тормозился до 86% при этом удлинялась продолжительность жизни (УПЖ) на 34% и выжило более 3 месяцев 28,8% мышей;
при лечении веществом-прототипом рост опухоли затормаживался до 62% и не отмечалось удлинения продолжительности жизни, леченные животные жили несколько меньше (52 дня), чем в контроле (55 дней);
при раке молочной железы Са-755 у животных, леченных в минимальной дозе 0,976 мг/кг десять дней ежедневно, рост опухоли тормозился до 93% у леченых веществом-прототипом торможения роста не отмечалось, и животные прожили всего 44,2 дня;
животные с меланомой В-16, пролеченные веществом, полученным по предлагаемому способу, активность проявляли в торможении роста опухоли до 73% по прототипу соответственно до 67%
В табл. 3 показано, что у животных с саркомой 180, получавших ежедневно 4,68 мг/кг, рост опухоли тормозился до 83% и их жизнь продлевалась (УПЖ) до 70% соответственно у леченных веществом-прототипом ТРО до 74% и УПЖ до 34%
Наиболее выраженный противоопухолевый эффект (табл.4) отмечался на асцитной опухоли Эрлиха:
в максимально переносимых дозах (31,2 мг/кг) вещество, полученное по предлагаемому способу, способно было предотвратить развитие привитой АОЭ у 100% животных; в дозе 9,33 мг/кг тормозился рост ее на 80% и у 34,7% мышей опухоль не развивалась, а в минимальной дозе (0,976 мг/кг) рост опухоли затормаживался на 60,3%
у животных, пролеченных веществом-прототипом, в дозе 9,33 мг/кг тормозился рост на 80% и у 30% не развивалась опухоль, а в дозе 0,976 мг/кг тормозился рост опухоли на 56%
Таким образом, вещество, полученное по предлагаемому способу, обладает высокой противоопухолевой активностью, превышающей по эффективности прототип на многих раковых перевиваемых опухолях: АОЭ, РЛ-67, Са-755, В-16, С-180.

Оно оказывает большее влияние, чем вещество-прототип на периферическую кровь и состояние иммунитета.

В табл. 5 видно, что у интактных животных через 7 дней после 5-дневного курса лечения значительно нарастало количество лейкоцитов 11,6^. 10⁹/л преимущественно за счет иммунокомпетентных клеток: лимфоцитов 8346± 117 и больших гранулярных лейкоцитов 202,7 ±147 (БГЛ) по сравнению с нелеченными животными в контроле соответственно 8,41·10⁹/л, 5300 ±15, 86± 25; у животных, леченных веществом-прототипом, существенно меньше нарастало количество лейкоцитов 9,56·10⁹/л, лимфоцитов 6168 ±161 и БГЛ 169 ±26,7. Так же у животных с саркомой 180 на 12 день после лечения предложенным веществом (табл.6) значительно больше нарастало количество лейкоцитов 15,1·10⁹/л, преимущестенно за счет иммунокомпетентных клеток: моноцитов, лимфоцитов, БГЛ по сравнению с контролем и с животными, леченными веществом-прототипом соответственно 13,2·10⁹/л.

Вещество, полученное по предлагаемому способу, по сравнению с веществом-прототипом (табл.7) значительно больше превышало количество Т-лимфоцитов (196,8%) и их функциональную активность в РБТЛ (173,9), чем у животных, пролеченных веществом-прототипом соответственно 174,8% и 163,4% по сравнению с контролем; а также более увеличивалась функциональная активность макрофагов (см. табл.8).

Как видно, вещество, полученное по предлагаемому способу, обладает более выраженной противоопухолевой и иммуностимулирующей активностью. Надо полагать, что его специфическая противоопухолевая активность зависит от опосредованного действия через иммунную систему.

Таким образом, изоалантолактон, полученный по предлагаемому упрощенному и более ускоренному способу из шрота корней и корневищ Inula Helenium L. (девясила высокого), обладает более высокой противоопухолевой активностью на многих раковых опухолях: АОЭ, С-180, РЛ-67, Са-755, В-16, С-45, при этом оно превосходит вещество-прототип (алантолактон) по направленности специфического противоопухолевого действия, оказывая при этом более высокую иммуностимулирующую активность, как у интактных животных, так и у животных с опухолью, достоверно и существенно при этом повышая количество лейкоцитов за счет иммунокомпетентных клеток: Л, М, БГЛ, усиливая функциональную активность Т-лимфоцитов и макрофагов.

Использование: изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается способа получения средства, обладающего противоопухолевой активностью. Целью изобретения является расширение спектра действия за счет иммуностимулирующей активности и упрощение способа. Сущность изобретения заключается в экстракции шрота корней и корневищ девясила высокого, отхода иннулинового производства, петролейным эфиром, упаривании экстракта и кристаллизации целевого продукта. Положительный эффект заключается в получении средства, обладающего помимо противоопухолевой активности, также иммуностимулирующей, а также сокращение числа стадий. 8 табл.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ, путем экстракции шрота корней и корневищ девясила высокого, отхода иннулинового производства, органическим растворителем, упаривания экстракта и кристаллизации целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью расширения спектра действия за счет иммуностимулирующей активности и упрощения способа, экстракцию проводят петролейным эфиром.