АССОЦИИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ И НЕКРОБАКТЕРИОЗА ЖИВОТНЫХ Российский патент 2002 года по МПК A61K39/116 C12N1/20 A61K39/116 A61K39/02 A61K39/07 A61K39/114 C12N1/20 C12R1/07 

Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии и касается получения вакцины для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных.

Известна вакцина для профилактики некробактериоза рогатого скота, содержащая в равных объемных соотношениях инактивированные формалином эндотоксин и экзотоксин, полученные из местных эпизоотических культур возбудителя некробактериоза, и адъювант на основе минерального масла и ланолина (Патент RU 1816348, А 61 К 39/00, 1995).

Однако известная вакцина не достаточно иммуногенна, так как требует двукратного введения и обеспечивает иммунитет только против некробактериоза в течение 3,5-4 мес. Кроме того, при получении вакцины осуществляют предварительный подбор местных штаммов для каждого конкретного хозяйства, что невозможно при промышленном производстве.

Известна вакцина против сибирской язвы животных, содержащая суспензию живых спор бескапсульного авирулентного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ возбудителя сибирской язвы (ТУ 9388-004-00008064-99)
Известна также инактивированная вакцина против некробактериоза животных, содержащая инактивированные формалином эндотоксин и экзотоксин, полученные из производственного штамма "0-1" ВИЭВ возбудителя некробактериоза, и адъювант на основе минерального масла и ланолина (Патент RU 2109519, А 61 К 39/02, 1998).

Существующие моновакцины применяют независимо друг от друга и не создают иммунитет у животных одновременно против сибирской язвы и некробактериоза. Использование этих вакцин в отдельности требует удвоенного количества трудозатрат и оказывает более сильное стрессовое состояние животных.

Известна ассоциированная вакцина против сибирской язвы, анаэробной дизентерии и инфекционной энтеротоксемии овец, содержащая суспензию жизнеспособных спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в исходной концентрации (3-4)•10⁸ спор в 1 см³, анатоксины Cl.perfringens типов С с исходной активностью 100-150 ЕС в 1 см³ и Д с исходной активностью 60-80 ЕС в 1 см³ и физиологический раствор (Патент RU 2141340, А 61 К 39/116, 1999).

Однако известная ассоциированная вакцина не обеспечивает создание иммунитета против сибирской язвы и некробактериоза.

Аналогов вакцины против сибирской язвы и некробактериоза не обнаружено.

Задачей изобретения является разработка высокоиммуногенной и безвредной ассоциированной вакцины против сибирской язвы и некробактериоза животных.

Технический результат изобретения заключается в получении эффективной ассоциированной вакцины против сибирской язвы и некробактериоза, обеспечивающей создание длительного напряженного иммунитета у крупного рогатого скота, овец, коз, свиней и северных оленей и превосходящей по иммуногенности известные моновакцины.

Сущность изобретения заключается в следующем: ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза содержит инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ и адсорбированный на гидроокиси алюминия, суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (5-5,2)•10⁹ спор/см³ в физиологическом растворе, 1 М раствор метабисульфита натрия и масляный адъювант при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Адсорбированный на гидроокиси алюминия инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин с м. м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5-6 мг% - 32,0 - 34,0
Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (5-5,2)•10⁹ в 1 см³ физиологического раствора - 1,0 - 1,2
1М раствор метабисульфита натрия - 2,2-2,4
Масляный адъювант - Остальное
Ассоциированную вакцину вводят однократно крупному рогатому скоту, овцам, козам, свиньям и северным оленям внутрикожно при помощи безыгольного инъектора в объеме 0,2-0,4 см³.

Предлагаемая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза создает иммунитет у привитых животных одновременно против двух заболеваний, при этом по иммуногенности она превосходит все известные моновакцины против сибирской язвы и некробактериоза. Ассоциированная вакцина безвредна и авирулентна для лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Ассоциированную вакцину против сибирской язвы и некробактериоза готовят следующим образом.

Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин - экзотоксина берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-6,0 мг%. Далее полученный антиген - лейкоцидин - эндотоксин сорбируют на гидроокиси алюминия. Лейкоцидин - эндотоксин содержит 5,5-6,0 мг% белка (лейкоцидина) с молекулярной массой 18-20 кДа. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.

К 32,0 см³ полученного некробактериозного компонента добавляют 2,3 см³ 1 М раствора метабисульфита натрия. Смесь выдерживают 50 мин при t 20-25^oС, периодически перемешивая. Затем добавляют 1,2 см суспензии спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с концентрацией 5•10⁹ спор в 1 см³ физиологического раствора и 64,5 см³ масляного адъюванта, например легкое минеральное масло "Маркопол-52". Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 5000 об/мин в течение 20 мин.

Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета
Пример 2. Полученную по примеру 1 ассоциированную вакцину против сибирской язвы и некробактериоза применяют для профилактических и вынужденных прививок клинически здоровых животных однократно. Молодняк, не достигший 3-месячного возраста, прививать ассоциированной вакциной не разрешается. Вакцину вводят внутрикожно с помощью безыгольного инъектора в бесшерстный участок тела крупному рогатому скоту и свиньям по 0,4 см³ (2 раза по 0,2 см³) овцам, козам и северным оленям по 0,2 см³.

Устойчивость к заражению сибирской язвой и некробактериозом определяют по величине антител в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) и реакции агглютинации (РА). У привитых овец титр противосибиреязвенных антител составил 1:160-1:320, титр противонекробактериозных антител 1:1024-1:2048, что свидетельствует о наличии иммунитета против сибирской язвы и некробактериоза.

При этом титр антител при введении ассоциированной вакцины значительно выше, чем при применении моновакцин, что свидетельствует о выработке более напряженного иммунитета. В сыворотках крови непривитых животных антител не обнаружено.

Таким образом, ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза является высокоэффективным препаратом, способным защитить животных одновременно от сибирской язвы и некробактериоза, и по иммуногенности превосходит составляющие ее моновакцины.

Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии. Ассоциированная вакцина содержит адсорбированный на гидроокиси алюминия инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (5-5,5)•10⁹ спор/см³ в физиологическом растворе, 1 М раствор метабисульфита натрия и масляный адъювант. Компоненты вакцины содержатся в сбалансированном соотношении. Лейкоцидин-экзотоксин представляет собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа. Он получен из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ. Ассоциированную вакцину вводят однократно крупному рогатому скоту, овцам, козам, свиньям и северным оленям внутрикожно при помощи безыгольного инъектора в объеме 0,2-0,4 см³. Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза является высокоэффективным препаратом, способным защитить животных одновременно от сибирской язвы и некробактериоза, и по иммуногенности превосходит составляющие ее моновакцины.

Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза, характеризующаяся тем, что она содержит инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ и адсорбированный на гидроокиси алюминия, суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (5-5,2)•10⁹ спор/см³ в физиологическом растворе, 1 М раствор метабисульфита натрия и масляный адъювант при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Адсорбированный на гидроокиси алюминия инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5-6 мг% - 32,0-34,0
Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (5-5,2)•10⁹ в 1 см³ физиологического раствора - 1,0-1,2
1М раствор метабисульфита натрия - 2,2-2,4
Масляный адъювант - Остальноев