СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННО-АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ Российский патент 1996 года по МПК G01N33/68 

Предполагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к пульмонологии.

Известны различные способы прогнозирования течения бронхиальной астмы.

Известен способ прогноза течения бронхиальной астмы путем определения эозинофилов в периферической крови. Однако, увеличение количества эозинофилов в крови не дает возможности разграничить формы бронхиальной астмы. Так эозинофилия крови является неспецифическим признаком, что снижает точность прогноза течения бронхиальной астмы (см. Н.Р.Палеев, "Болезни органов дыхания", т.3, М. "Медицина", 1990 г. стр. 71).

Наиболее близким и принятым нами за прототип является способ прогнозирования течения бронхиальной астмы путем определения повышения активности калликреина, снижения содержания кининогена, падения активности ингибиторов калликреина и кининазной активности крови, при этом обнаруживается возрастание количества серотонина в тромбоцитах, нарастание концентрации ацетилхолина и гистамина в крови и снижение активности ферментов, участвующих в их инактивации. У больных с легким течением бронхиальной астмы одновременно с улучшением состояния происходит почти полная нормализация сдвигов в уровне биологически активных веществ. Однако известный способ недостаточно информативен, трудоемок, не обладает достаточной специфичностью. (см. Н.Р.Палеев. "Болезни органов дыхания". т.1, Москва, "Медицина", 1990 г. стр. 393).

Целью предполагаемого изобретения является повышение точности способа и упрощение исследования.

Поставленная цель достигается путем биохимического исследования крови. Новым в достижении поставленной цели является то, что в эритроцитах крови определяют регуляцию цАМФ (циклоаденозинмонофосфатом) глутатионтрансферазы и при отсутствии эффекта регуляции определяют фазу обострения течения заболевания, а при наличии эффекта регуляции прогнозируют фазу ремиссии заболевания.

Авторы при исследовании эритроцитов здоровых людей, содержащих глутатионтрансферазы класса π, установили, что циклический аденозинмонофосфат (цАМФ) активирует этот изофермент. У больных с тяжелым течение инфекционно-аллергической бронхиальной астмы активирующий эффект цАМФ на глутатионтрансферазу эритроцитов исчезает. Нарушение активации глутатионтрансферазы под влиянием цАМФ отрицательно сказывается на устойчивости организма к ряду неблагоприятных факторов: пероксидному стрессу и инактивации ксенобиотиков.

Катехоламины через b-адренорецепторы и цАМФ активируют глутатионтрансферазу. Эффект реализуется по регуляторной цепи: катехоламины --> b-адренорецепторы --> аденилатциклаза --> цАМФ --> протеинкиназа А --> глутатионтрансфераза.

Впервые установлено, что цАМФ активирует глутатионтрансферазу эритроцитов, а именно p глутатионтрансферазу.

В фазу обострения инфекционно-аллергической бронхиальной астмы активирующий эффект цАМФ на глутатионтрансферазу эритроцитов исчезает. Это согласуется с хорошо известным фактором, что при бронхиальной астме снижается реакция системы b адреноцепторы аденилатциклаза. По нашим данным следует, что нарушения происходят в рецепторном отделе, но и в конечном звене реализации регуляторных эффектов второго посредника цАМФ. Нарушается активация им протеинкиназы А.

При улучшении состояния больных (в фазу ремиссии) реакция глутатионтрансферазы на цАМФ полностью восстанавливается вследствие обратимости нарушений регуляции.

Из вышеизложенного следует, что заявленное техническое решение по сравнению с прототипом имеет отличительные существенные признаки, заключающиеся в том, что в эритроцитах крови определяют регуляцию цАМФ глутатионтрансферазы и при отсутствии эффекта регуляции определяют фазу обострения течения заболевания, а при наличии эффекта регуляции прогнозируют фазу ремиссии заболевания, что позволяет определить данное решение соответствующим критерию "новизна". Новая совокупность признаков обеспечивает достижение более высоко положительного эффекта, заключающегося в повышении точности способа и упрощении исследования, следовательно решение обладает "существенными отличиями".

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом.

При поступлении больного в стационар ему проводят общеклиническое обследование, включая общие и биохимические анализы крови, общие анализы мочи, спирографию, рентгенографию органов грудной клетки, ЭКГ, анализы мокроты и мочи, по показаниям эндоскопические методы исследования (бронхоскопия). Для прогноза течения заболевания проводят определение регуляции цАМФ глутатионтрансферазы в эритроцитах крови.

Утром натощак производят забор венозной крови из v.ulnoris в количестве 6,5 7,5 мл. с гепарином. Центрифугированием при 1500 об/мин в течение 10 минут отделяют плазму. Эритроциты промывают дважды холодным физиологическим раствором центрифугированием при 6000 об/мин 10 мин и гемолизируют дистилированной водой в соотношении 1:3 Полученный гемолизат разводят в 50 раз для получения рабочего раствора.

Определение активности фермента проводят по Habig et all (1974 г.) с субстратом 1 хлор, 2,4 динитробензолом.

Общий объем инкубационной смеси 2 мл: 100 ml гемолизата, 5•10^-3M MgCl₂, 10^-4 M АТФ, цАМФ 10^-6 M, 0,1 M фосфатный буфер, 1мМЭДТА, pH 6,5.

Контрольная проба не содержит цАМФ. Инкубируют 10 минут при 30^o и реакцию запускают добавлением GSH 1мМ и ХДНБ 1мМ. Изменения оптической плотности регистрируют на СФ-26 при длине волны 345 нм.

Белок определяют по Лоури. Расчет активности проводят по формуле:

Δσ₃₄₅ изменение оптической плотности при 345 нм,
V объем пробы,
Б белок в пробе,
9,6 коэффициент микромолярной экстинции,
t время.

Активность фермента выражают в нмоль/мин на 1 мг Б (белка). Эффект цАМФ
как прирост активности.

Таким образом при отсутствии эффекта регуляции цАМФ глутатионтрансферазы у больного наблюдается фаза обострения заболевания с ожидаемыми частыми приступами удушья и необходимостью более интенсивной бронхолитической терапии. При наличии эффекта регуляции цАМФ глутатионтрансферазы у больного диагностируется фаза ремиссии заболевания с благоприятным прогнозом.

Предложенный способ прогнозирования течения инфекционно-аллергической бронхиальной астмы подтверждается клиническим примером.

Больная К (58 лет) поступила в пульмотерапевтическое отделение ОКБ с диагнозом инфекционно-аллергическая бронхиальная астма, тяжелое течение, обострение, ДН_П. При поступлении предъявляла жалобы на одышку при незначительной физической нагрузке экспираторного характера, приступы удушья до 3 5 раз в сутки. Приступы начинались с одышки экспираторного характера и заканчивались кашлем с отделением вязкой, стекловидной мокроты в небольшом количестве. Из анамнеза: страдает бронхиальной астмой 19 лет. Объективно: состояние средней тяжести, сознание ясное, положение активное. Телосложение правильное. Перкуторно звук с коробочным оттенком. Аускультативно дыхание ослабленное везикулярное, масса сухих жужжащих, свистящих хрипов, ЧДД-24 в минуту. Границы сердца в пределах нормы. Тоны ритмичные (сердца), ЧСС-92 в минуту, АД 130/90. Живот без особенностей. Отеков нет.

Нами исследована регуляция глутатионтрансферазы цАМФ в эритроцитах крови по выше описанной методике. Установлено отсутствие эффекта регуляции (в контрольной пробе 5,79 нмоль• мин/мг белка, опытной 3,24 нмоль•мин/мг белка, что указывает в пользу фазы обострения заболевания.

У этой же больной при улучшении состояния, когда купировались приступы удушья, при аускультации легких исчезли сухие хрипы, улучшилось общее состояние было проведено исследование регуляции глутатионтрансферазы цАМФ в эритроцитах крови. Установлено наличие эффекта регуляции (контрольная проба 1,74 нмоль•мин/мг белка и опытная 2,19 нмоль•мин/мг белка), что свидетельствует о фазе ремиссии заболевания.

Таким образом, предлагаемый способ прогнозирования течения инфекционно-аллергической бронхиальной астмы позволяет повысить точность прогноза течения заболевания, упростить методику исследования, снизить себестоимость исследования, приводит к экономии лекарственных средств и снижению койко-дня, позволяет своевременно коррегировать лечение.

Изобретение относится к области медицины, а именно к пульмонологии. Цель - повышение точности способа и упрощение исследования. В эритроцитах крови определяют регуляцию ЦАМФ глутатионтрансферазы. Определение активности фермента проводят по Habig et all с субстратом 1-хлор, 2,4 - динитробензолом. Активность фермента выражают в нмоль/мин. на 1 мг белка. Эффект цАМФ - как прирост активности. При отсутствии эффекта регуляции цАМФ глутатионтрансферазы у больного наблюдается фаза обострения заболевания с ожидаемыми частыми приступами удушья и необходимостью более интенсивной бронхолитической терапии. При наличии эффекта регуляции цАМФ глутатионтрансферазы у больного диагностируют фазу ремиссии заболевания с благоприятным прогнозом.

Способ прогнозирования течения инфекционно-аллергической бронхиальной астмы, включающий биохимическое исследование крови, отличающийся тем, что из эритроцитов крови готовят гемолизат, который разводят дистиллированной водой в соотношении 1:49, к обеим пробам добавляют известную инкубационную среду для определения активности глутатионтрансферазы, при этом в опытную пробу дополнительно добавляют раствор цAMФ в конечной концентрации 10^-6 М с последующей спектрофотометрией обеих проб при 345 нм и расчетом эффекта регуляции цАМФ глутатионтрансферазы эритроцитов и при наличии эффекта регуляции в опытной пробе цАМФ глутатионтрансферазы эритроцитов в сравнении с контрольной прогнозируют фазу ремиссии заболевания, а в случае отсутствия эффекта регуляции в опытной пробе относительно контрольной фазу обострения заболевания.