СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТРИТЕРПЕНОВОГО ГЛИКОЗИДА 3 - 0 - β - D-ГЛЮКОПИРАНОЗИЛ- (1 _→ 2) -α - Z- АРАБИНОПИРАНОЗИДА ХЕДЕРАГЕНИНА Российский патент 1996 года по МПК C07J53/00 C07J63/00 

Изобретение относится к области биоорганической химии и касается способа получения биологически активного гликозида 3-0-β -D-глюкопиранозил-((1 _→ 2))-α-L-арабинопиранозида хедерагенина (каулозида С, I), который может найти применение как биохимический инструмент для регулируемого изменения проницаемости биомембран и как регулятор роста клеточных культур [1, 2]


2 R = β-D-Clcp-(1 _→ 2)-α-L-Arap

Известные способы получения 3-0-β-D-глюкопиранозил-((1 _→ 2))-α-L-арабинопиранозида хедерагенина из корней и корневища растения стеблелиста мощного Caulophyllum robustum Maxim. основаны на экстракции тритерпеновых гликозидов из растительного сырья кипящим метанолом и включают отгонку метанола, распределение экстрактивных веществ в системе несмешивающихся жидкостей, отделение и упаривание органического слоя, многократное хроматографическое разделение компонентов и кристаллизацию из метанола [3-5] Наиболее близкое к предлагаемому способу получения 3-0-b-D-глюкопиранозил-((1 _→ 2))-α-L-арабинопиранозида хедерагенина техническое решение включает экстракцию размолотых корней стеблелиста мощного кипящим метанолом, отделение метанольного экстракта, очистку метанольного экстракта активированным углем, отгонку метанола, растворение полученного остатка в н-бутаноле, хроматографию на силикагеле с последующим упариванием полученных фракций и кристаллизацию из метанола фракции, и кристаллизацию из метанола фракции, содержащей 3-0-b-D-глюкопиранозил-((1 _→ 2))-α-L-арабинопиранозид хедерагенина с выходом 0,08% на сырье [3]
Недостатками прототипа и других способов получения 3-0-b-D-глюкопиранозил-((1 _→ 2))-α-L-арабинопиранозида хедерагенина являются сложность и трудоемкость процесса хроматографического выделения, применение для экстракции значительных объемов высокотоксичного и пожароопасного метанола, низкий выход целевого продукта.

Цель изобретения заключается в упрощении, снижении токсичности и пожароопасности процесса, увеличении выхода 3-0-b-D-глюкопиранозил-((1 _→ 2))-α-L-арабинопиранозида хедерагенина.

Достигается это тем, что измельченные корни с корневищем стеблелиста мощного Caulophyllum robustum Maxim. обезжиривают хлороформов, экстрагируют водным раствором щелочи при нагревании, экстракт отделяют, подкисляют серной кислотой, извлекают н-бутанолом, извлечение промывают водой, упаривают, остаток от упаривания, содержащий сумму тритерпеновых гликозидов, очищают с помощью окиси алюминия, а очищенную сумму тритерпеновых гликозидов кристаллизуют из этанола, получая 3-0-b-D-глюкопиранозил-((1 _→ 2))-α-L-арабинопиранозид хедерагенина (каулозид С, I) с выходом 1,7%
Применение для экстракции из растительного сырья тритерпеновых гликозидов водного раствора щелочи позволяет исключить из процесса высокотоксичный и пожароопасный метанол, и одновременно увеличить выход каулозида С за счет сопутствующего тритерпенового гликозида каулозида ^G(2) [5] При нагревании каулозида ^G со щелочью происходит отщепление углеводной цепи от карбоксильной группы и образуется дополнительное количество каулозида С, что ведет к увеличению выхода целевого продукта.

Предлагаемый способ позволяет существенно упростить процесс. Ключевую роль в этом играет обнаруженная нами значительная разница в растворимости каулозида С и всех остальных тритерпеновых гликозидов в этаноле. Замена кристаллизационного растворителя метанола на этанол позволила отказаться от хроматографического разделения суммы тритерпеновых гликозидов и получать каулозид С прямой кристаллизацией очищенного от липидов, пигментов и хедерагенина н-бутанольного извлечения, содержащего сумму гликозидов. Выход целевого продукта возрос в 21 раз в сравнении с прототипом.

Пример. 120 г порошка измельченных воздушно-сухих корней с корневищем стеблелиста мощного Caulophellum robustum Maxim. перколируют 4 л хлороформа. Хлороформное извлечение (вес остатка 1,3 г, 1,1) отбрасывают. Подсушенный на воздухе порошок помещают в трехлитровую термостойкую колбу, содержащую 1 л 1 н. КОН. Колбу нагревают при температуре кипения реакционной смеси 3 ч. Охлажденную смесь центрифугируют, осадок промывают водой (0,4 л х 3) и отбрасывают. К объединенному супернатанту добавляют при перемешивании 100 мл 20% -ной H₂SO₄, извлекают н-бутанолом (0,5 л х 3), бутанольные вытяжки объединяют, промывают водой (0,25 л х 3) и упаривают досуха (вес сухого остатка 11,28 г, 9,4 на сырье). Полученный сухой остаток очищают на окиси алюминия (14 х 4,4 см) в системе хлороформ-метанол/H₂O 9:1 (1 л), 4:1 (4,5 л), 2:1 (0,6 л), 1:1 (0,9 л). Элюат анализируют с помощью тонкослойной хроматографии на SiO₂ в системе хлороформ-метанол/ H₂O (4:1), проявляя пластинку 10%-ной H₂SO₄ в этаноле. Получают 1,3 г (1,1) хедерагенина и 5,4 г (4,5) суммы тритерпеновых гликозидов. Сумму гликозидов кристаллизуют из этанола и получают 2,03 г (1,7%) 3-0-b-D-глюкопиранозил-1(1 _→ 2))-α-L-арабинопиранозида хедерагенина (каулозида С, I) с т.пл. 248-251^oС, [α]22D

Использование в биорганической химии и касается способа получения биологически активного гликозида -каулозида С, который может найти применение как биохимический инструмент для регулируемого изменения проницаемости биомембран и как регулятор роста клеточных культур. Сущность изобретения: продукт: 3-0- -D-глюкопиранозил-((1 _→ 2))-α -L-арабинопиранозида хедерагенина, который получают из измельченных корней корневищ стеблелиста мощного Caulophyllum robustum Maxim обезжириванием хлороформом, экстракцией водным раствором щелочи при нагревании, затем экстракт отделяют, подкисляют серной кислотой, извлекают н-бутанолом, извлечение промывают водой, упаривают, остаток от упаривания, содержащий сумму тритерпеновых гликозидов, очищают с помощью окиси алюминия, а очищенную сумму тритерпеновых гликозидов кристаллизуют из этанола.

1. Способ получения тритерпенового гликозида 3 - 0 - β - D -глюкопиранозил- (1 _→ 2) - α - Z -арабинопиранозида хедерагенина, включающий экстракцию корней с корневищем стеблелиста мощного Caulophyllum robustum Maxim, очистку и кристаллизацию целевого продукта, отличающийся тем, что обезжиренное сырье экстрагируют водным раствором щелочи, экстракт отделяют, подкисляют, извлекают н-бутанолом, бутанольное извлечение промывают водой, упаривают, очищают на окиси алюминия и кристаллизуют из этанола.