СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛИСТЕРИЙ ИЗ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ Российский патент 1996 года по МПК C12N1/10 C12N1/10 C12R1/90 

Изобретение относится к области ветеринарной и медицинской микробиологии. Область использования изобретения бактериологический контроль пищевых продуктов на наличие в них листерий.

Аналогом изобретения является способ бактериологического исследования пищевого продукта по ГОСТу 21-237-75 "Методы бактериологического анализа", суть которого в том, что из отобранных образцов пищевого продукта проводится посев на питательные среды с последующей идентификацией выращенных бактериальных культур.

Прототипом изобретения являются "Методические рекомендации по лабораторной диагностике листериоза животных и людей", утвержденные и изданные в 1987 году, в которых описывается способ и схема бактериологического исследования патологически измененных органов и тканей, полученных от павших животных и умерших людей. Суть способа, предлагаемого прототипом, заключается в приготовлении суспензии из патологического материала с физиологическим раствором в соотношении 1:5 с последующим посевом на обычные и эффективные питательные среды, культивированием их при 37^oC в течение 14 дней и проведением идентификации выросших бактериальных колоний. Для результативности исследований рекомендуется часть исследуемого материала поместить в холодильник и хранить 30 суток. При отрицательном результате первичных посевов проводить повторные исследования данного материала через каждые 10 дней в течение месяца.

Недостаток прототипа состоит в длительности проводимых исследований, недостаточной их пригодности для целей выделения листерий из пищи, что обусловлено возможно малым количеством в ней листериозных бактерий и соответственно низким показателем КОЕ (колонии образующих единиц), получаемом при исследовании продукта питания, по сравнению с патологическим материалом, получаемом от павшего животного.

Предлагаемый нами способ выделения листерий устраняет этот недостаток. Время, затрачиваемое на получение результатов, сокращается в 3 7 раз при повышении вероятности выделения листериозной культуры.

Целью настоящего изобретения является способ, сокращающий сроки проведения бактериологического контроля пищевых продуктов на наличие листерий.

Сущность изобретения заключается в применении более оптимальной схемы обработки пищевого продукта и получаемой бактериальной суспензии. А именно: использование жидкой накопительной и твердой селективной питательной среды для культивирования листерий, более низкой температуры инкубирования бактериальной суспензии, что не препятствует размножению листерий, т. к. соответствует их биологическим свойствам обработки полученной бактериальной суспензии раствором КОН. Все эти манипуляции способствуют накоплению листериозных бактерий при снижении количества посторонней микрофлоры.

Отличительными существенными признаками объекта изобретения от прототипа являются:
1. Предлагаемым способом можно выделять листерии из любого вида пищевого продукта (растительный, жидкий, твердый). Способ прототип рекомендован для исследования плотного субстрата.

2. Использование жидкой селективной среды для культивирования и накопления листерий. У способа прототипа эта операция отсутствует.

3. Культивирование бактериальной суспензии при температурном режиме 28 - 30^oC. У способа прототипа данный показатель равен 37^oC.

4. Обработка полученной бактериальной суспензии с искомой листериозной культурой 0,3% раствором КОН. У способа прототипа эта операция отсутствует.

5. Изучение выросших колоний проводится через 24 48 72 часа, при подращивании в температурных режимах 22^oC и 37^oC. У способа - прототипа сроки изучения 14 дней, подращивание при 37^oC.

Пример конкретного выполнения. Изучаемый пищевой продукт независимо от его вида измельчают и смешивают со средой накопления в соотношении 1:8 (1 часть продукта и 8 частей среды). Рекомендуемая среда накопления имеет следующий конструированный для этой цели состав. 1. Питательный бульон 16,0 г. 2. Д-глюкоза 5,0 г. 3. Динатрий фосфат 2,5 г. 4. Аммоний железо (III) сульфат 50,0 мг. 5. Хлористый натрий 5,0 г. 6. Хлористый литий 15,0 г. 7. Полимиксин "В" 500 тыс. ед. 8. Дистиллированная вода 1000 мл. Полученную суспензию встряхивают в течение 1 минуты и культивируют при 28^oC 24, 48 часов. Через указанные сроки 1 мл полученной бактериальной суспензии смешивают с 5 мл 0,3% раствора КОН (растворенного в 5% NaCl), встряхивают и через минуту высевают на селективный агар, имеющий следующую рецептуру: 1. Агар "Д" 30,0 г. 2. Хлористый натрий 5,0 г. 3. Д-глюкоза - 5,0 г. 4. Аммоний-железо (III) сульфат 50,0 мг. 5. Глицин 2,0 г. Хлористый литий 15,0 г. 7. Полимиксин "В" 500 тыс.ед. 8. Дистиллированная вода - 1000 мл. Подращивание производят 24, 48 часов при температурах 22^oC и 37^oC. Оптимальным решением является постановка не одной пробы исследуемого образца, а 4-х групп по 3 пробы в каждой. Таким образом, идентификацию выросших бактериальных колоний, получаемых из одного образца пищевого продукта исследуют четырежды в зависимости от времени и температуры инкубирования.

Технико-экономическая эффективность.

Использование предлагаемого способа выделения листерий позволяет сократить сроки контроля пищевых продуктов в 3 7 раз при повышении вероятности выделения листериозной культуры.

Использование: изобретение относится к области ветеринарной и медицинской микробиологии и может быть использовано при проведении бактериологического контроля пищевых продуктов. Сущность применения: способ включает следующие операции: измельченный продукт смешивают с жидкой селективной питательной средой в соотношении 1:8, встряхивают, культивируют при 28^oC 24 - 48 часов, 1 мл бактериальной суспензии смешивают с 5 мл 0,3% раствора КОН и через минуту высевают на селективный агар; через 24 - 48 часов проводят идентификацию выросших бактериальных колоний. 1 з. п. ф-лы.

Способ выделения листерий из пищевых продуктов, включающий измельчение исследуемого материала, получение бактериальной суспензии, посев суспензии на твердые селективные питательные среды и культивирование с последующим учетом выросших бактериальных колоний, отличающийся тем, что измельченный материал предварительно смешивают с жидкой селективной средой накопления в соотношений 1:8, встряхивают в течение 1 2 мин, культивируют при 28 30°С в течение 24-48 ч, из полученной бактериальной суспензии отбирают 0,9 1,1 мл и смешивают в течение 1 2 минут с 4,5-5,5 мл 0,2-0,4 раствора КОН, приготовленного в 4,5 5,5%-ном растворе NaCl, культивирование на твердой питательной среде осуществляют в течение 24 48 ч.