ШТАММ БАКТЕРИЙ LISTERIA MONOCYTOGENES, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ДИСТЕРИОЗНЫХ ДИАГНОСТИКУМОВ Российский патент 1995 года по МПК C12N1/20 A61K39/02 

Изобретение относится к ветеринарной и медицинской микробиологии. Преимущественная область использования создание листериозных диагностикумов.

Аналогом изобретения является публикация И.А. Бакулова, где указано: "В результате многочисленных исследований выявлено отсутствие какой-либо связи между объектом, откуда выделен возбудитель листериоза, и его серологической характеристикой. В связи с этим утратило значение разделение серологических типов листерий на "грызущий", "жвачный" и "лошадиный". Не подтвердились также наблюдения о том, что листерии в организме животного могут изменить свою серологическую принадлежность".

Прототипом изобретения являются штаммы, используемые в настоящее время для производства листериозных диагностикумов (Ф.С. Шуляк "Листериоз". Сб. "Ветеринарные препараты". М. 1981).

В частности, для создания диагностических препаратов, способствующих прижизненной постановке диагноза на листериоз методом РСК, используется антиген, получаемый при наработке четырех штаммов из коллекции ВГНКИ ветпрепаратов: "Бурынь", "Тернополь" N 17, N 1. Данные листериозные штаммы выделены из патологического материала от овцы, коровы, кролика, свиньи, изучены и предложены для создания диагностикума в конце 50-х годов.

Основной недостаток прототипа заключается в том, что подбор данных штаммов для листериозного антигена осуществлялся в первую очередь в соответствии с существующей в тот период времени ложной теорией о делении всех листериозных штаммов на звериные типы. Серологические особенности штаммов учитывались во вторую очередь. Поэтому применяемые в настоящее время эти 4 листериозных штамма серологически типированы только в пределах серогрупп I и II. Ориентация на "звериные" типы не требовала необходимости в использовании для листериозного антигена подбора штаммов по более специфическим параметрам серовариантам с учетом комбинации антигенных детерминант, характерных для каждого серовара. Этим, в первую очередь, и обусловлено наличие ложноспецифических результатов при использовании метода РСК для диагностики листериоза.

Второй существенный недостаток листериозных штаммов описываемого прототипа состоит в том, что они являются вирулентными штаммами. Это значительно усложняет работу по производству листериозного антигена, так как бактериальная культура данных штаммов представляет угрозу для здоровья людей, что требует дополнительных мер по соблюдению правил безопасности в работе с ними.

Целью изобретения является штамм L. monocytogenes УСХИ-7 N 21, относящийся к сероварианту 4ав, способствующий улучшению диагностики заболевания, вызываемого листериями.

Сущность изобретения заключается в том, что полученный штамм L. mono- cytogenes УСХИ-7 N 21 имеет следующие морфологические и биологические характеристики.

Культуральные свойства. Бактериальная культура указанного штамма хорошо растет в мясо-пептонном бульоне (МПБ) при 30^оС. МПБ в первые сутки слегка мутнеет, помутнение равномерное, при встряхивании пробирки наблюдаются так называемые муаровые волны. Через 2-4 сут бульон в пробирке светлеет, а на дне ее образуется слизистый осадок, который при встряхивании поднимается косичкой. На мясопептонном желатине (МПЖ) при посеве уколом культуры листерий дают через двое суток рост в виде штыка только по ходу укола, разжижение желатины не наблюдается. В бульоне Китт-Тароцци pост листерий характеризуется очень слабым помутнением среды. На мясопептонном агаре (МПА) в первые сутки роста обнаруживают мелкие (0,2-0,5 мм в диаметре), прозрачные в проходящем свете, слегка выпуклые колонии. Через 2-3 сут колонии увеличиваются в размере (до 1-3 мм в диаметре), становятся более плоскими и приобретают сероватый оттенок при падающем свете.

Морфология. В мазках культур листериозного штамма, приготовленных с МПА и МПБ, окрашенных по Граму, наблюдали грамположительные палочки, расположенные одиночно и парами.

Подвижность. Суточные бульонные культуры, культивируемые при 22^оС подвижны.

Биохимические свойства. Бактериальная культура данного штамма ферментирует с образованием кислоты без газа: глюкозу, мальтозу, рамнозу, салицин, фруктозу. Не ферментирует: дульцит, инулин, маннит, обесцвечивает лакмусовое молоко, индол не образует. На кровяном агаре через 3 сут вызывает гемолиз.

По результатам постановки пробы роста штамм УСХИ-7 N 21 отнесен к II серогруппе.

Вирулентные свойства. Культура штамм УСХИ-7 N 21 не вызывает гибель кроликов при внутрибрюшинном введении в дозах соответственно 5 и 10 млрд микробных клеток. Из 5 зараженных морских свинок пала 1, из 5 зараженных белых мышей пало 2.

Предлагаемый листериозный штамм обладает следующей антигенной структурой (см. таблицу).

Использование данного штамма при производстве листериозных диагностикумов (в сочетании с другими штаммами листерий) позволяет охватить максимально возможный диапазон антигенных детерминантов, характерных для данного вида микроорганизма, что, в свою очередь, повышает специфичность диагностических препаратов.

Использование: ветеринарная и медицинская микробиология, диагностика листериоза. Сущность изобретения: штамм Listeria monocytogenes ВГНКИ N УСХИ-7 N 21 используют для диагностики заболевания, вызываемого листериями. Штамм L. monocytogenes УСХИ-7 N 21 отобран по культурально-морфологическим, тинкториальным, биологическим и серологическим характеристикам и хранится в музее ВГНКИ ветпрепаратов. Штамм используют при создании листериозных диагностикумов. 1 табл.

Штамм бактерий Listeria monocytogenes ВГНКИ N УСХИ-7 N 21, используемый для изготовления листериозных диагностикумов.