ШТАММ БАКТЕРИЙ LISTERIA MONOCYTOGENES УСХИ-52, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЛИСТЕРИОЗНОЙ ВАКЦИНЫ Российский патент 1997 года по МПК C12N1/20 A61K39/02 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии. Преимущественная область использования создание листериозной вакцины.

Аналогом изобретения является монография академика РАСХН И.А. Бакулова [1] где указано, что ".задача вакцинации может быть решена с помощью живых вакцин из аттенуированных штаммов. при создании средств специфической профилактики нужно учитывать антигенное различие штаммов листерий. Вакцина должна быть коливалентной или состоять хотя бы из 2-х штаммов, являющихся представителями 2-х серогрупп".

Прототипом изобретения является штамм листерии АУФ I серогруппа, полученный в результате облучения вирулентного штамма А ультрафиолетовыми лучами, используемый в настоящее время для производства листериозной вакцины [1]
Основной недостаток прототипа заключается в том, что указанный штамм является реверсибельным. За последние несколько лет участились случаи заболевания сельскохозяйственных животных после их вакцинации вакциной из штамма АУФ.

Данная закономерность привела к тому, что по решению Главного ветеринарного управления вакцина из штамма АУФ используется только в хозяйствах, неблагополучных по листериозу. В районах, где листериоз не регистрируется, вакцину не применяют, т.к. стремятся предотвратить появление стационарного очага листериоза, возникающего за счет рассеивания бактериальной культуры посредством вакцинации животных.

Целью изобретения является штамм L. monocytogenes УСХИ-52, относящийся к II серогруппе, отвечающий всем требованиям, необходимым для создания вакцинного препарата, в т.ч. обладающий максимальным набором антигенных детерминант, свойственных штаммам II серогруппы.

Сущность изобретения. Полученный штамм бактерий имеет следующую характеристику.

Культуральные свойства. Бактериальная культура указанного штамма хорошо растет в мясо-пептонном бульоне при 30^oC. МПБ в первые сутки слегка мутнеет, помутнение равномерное, при встряхивании пробирки наблюдаются так называемые муаровые волны. Через 2-4 сут бульон в пробирке светлее, а на дне ее образуется слизистый осадок, который при встряхивании поднимается косичкой. На мясо-пептонном желатине (МПЖ) при посеве уколом культуры листерий дают через двое суток рост в виде штыка только по ходу укола, разжижение желатины не наблюдается. В бульоне Китт-Тароцци рост листерий характеризуется очень слабым помутнением среды.

На мясо-пептонном агаре (МПА) в первые сутки роста обнаруживаются мелкие (0,205 мм в диаметре) прозрачные в проходящем свете слегка выпуклые колонии. Через 2-3 сут колонии увеличиваются в размере (до 1-3 мм в диаметре), становятся более плоскими и приобретают сероватый оттенок при дающем свете.

Морфология. В мазках культур листериозного штамма, приготовленных с МПА и МПБ, окрашенных по Граму, наблюдали грамположительные палочки, расположеные одиночно и парами, подвижные.

Биохимические свойства. Бактериальная культура данного штамма ферментирует образованием кислоты без газа: глюкозу, мальтозу, рамнозу, салицин, фруктозу. Не ферментирует: дульцит, инсулин, маннит обеспечивает лакмусовое молоко, индол не образует. На кровяном агаре не вызывает гемолиз.

По результатам постановки пробы роста штамм УСХИ-52 отнесен к II серогруппе.

Пример. Основными критериями вакцинного штамма являются показатели реверсибельности, вирулентности, длительности персистирования, локализации, иммуногенности.

Реверсибельность штамма. В результате десятикратного пассирования через организм белых мышей величина дозы LD₅₀ штамм УСХИ-52 до опыта и после опыта была в пределах 0,79±0,02 млрд.м.т./мл, т.е. реверсибельность у данного штамма отсутствует.

Вирулентные свойства. Культура штамма УСХИ-52 не вызывает гибель кроликов при внутрибрюшинном введении в дозах соответственно 5 и 10 млрд. микробных клеток. Проба Антона отрицательна.

Персистирование и локализация. В табл. 1 приведена характеристика штамма УСХИ-52 по персистированию и локализации на морских свинках путем внутрибрюшинного введения бактериальной суспензии в дозе 10 млрд.м.т.

Таким образом, процесс вакцинной генерализации достигает максимального развития в первые 3 сут, что свидетельствует о быстроте вовлечения организма животного в иммунную перестройку. Бактериальная культура была локализована во всех исследуемых объектах за исключением головного мозга.

Иммуногенные свойства. Характеристика штамма по иммуногенным свойствам приведена в табл. 2.

Эти данные свидетельствуют, что штамм УСХИ-52 обладает иммуногенными свойствами.

Перечисленные выше данные указывают на возможность использования заявленного штамма в качестве вакцинного.

Использование: биотехнология, микробиология, профилактика листериоза, вакцина, штамм бактерий. Сущность изобретения: предложен новый штамм Listeria monocytogenes ВГНКИ N УСХИ-52-ДЕП. Штамм -авирулентный, отобран по культурально-морфологическим, биологическим и серологическим характеристикам и хранится в музее ВГНКИ ветпрепаратов. Штамм используют при создании вакцины против листериоза сельскохозяйственных животных. 2 табл.

Штамм бактерий Listeria monocytogenes ВГНКИ УСХИ-52- ДЕП, используемый для изготовления вакцины против листериоза.