ПРОДУЦЕНТ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО МЕЛАНИНСОДЕРЖАЩЕГО ПРЕПАРАТА "АСТРОМЕЛАНИН" Российский патент 1996 года по МПК C12P17/10 C12N1/16 A61K31/40 C12P17/10 C12R1/00 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению биологически активных веществ противоопухолевого действия.

Известен микроорганизм продуцент меланинподобного вещества, относящийся к Streptomyces melanogenes. Однако получаемые меланины не обладают противоопухолевыми свойствами [1]
Известны различные лекарственные средства, обладающие противоопухолевым действием, применяемые при лечении онкологических заболеваний: бензотеф, циклофосфан, адриабластин (рак легкого), фторурацил (опухоли толстой кишки), оливомицин, винкристин, проспидин (меланома) и др. [2] Все они, как известно, оказывают вредные побочные эффекты, имеют противопоказания и, кроме того, требуют внутривенного или внутримышечного способа применения.

Преимущество и технический эффект изобретения состоит в выявлении источника эффективного противоопухолевого препарата, обладающего новыми ценными свойствами, не присущими известными средствам аналогичного назначения, а именно, в применении известного штамма 365 антарктических черных дрожжей Nadsoniella nigra var. hesuelica в качестве продуцента противоопухолевого меланинсодержащего препарата, свойства которого обеспечивают эффективное лечение раковых заболеваний.

Сущность изобретения использование данного штамма антарктических черных дрожжей Nadsoniella nigra var. hesuelica 365 как неограниченного и легковоспроизводимого источника меланина, обладающего противоопухолевым свойством и нетоксичного, что делает его практическое использование особенно ценным.

Штамм 365 антарктических черных дрожжей Nadsoniella nigra var.hesuelica выделен из образца субстрата антарктического острова Хесуэлл и является известным [3]
Продуцируемый штаммом 365 черно-коричневый пигмент, относящийся к группе меланинов, локализуется в форме гранул в клеточной стенке, составляя ее наружный довольно плотный слой, структурно и химически тесно связанный с другими элементами клеточной стенки [4]
Процесс выделения целевого меланинсодержащего продукта из биомассы клеток штамма (и его основные характеристики) описаны и включают разрушение клеток биомассы, отделение пигмента осаждением при кислых значениях рН и перевод его в водорастворимую форму [5]
Основной характеристикой получаемого продукта является присутствие в структуре меланина штамма 365 стабильных свободных радикалов в высокой концентрации (10¹⁹/г) сухих веществ [6]
Получаемый меланинсодержащий препарат назван "Астромеланин". Обнаруженные полезные свойства "Астромеланина" отсутствие токсичности, противоопухолевый эффект не были известны ранее и не описаны в литературе.

Данные по использованию получаемого из штамма 365 Nadsoniella nigra var. hesгelica меланинсодержащего продукта для лечения добровольцев с различными формами рака приведены ниже.

Штамм 365 культивируют по известной методике в условиях аэрации и перемешивания в жидкой минеральной среде следующего состава, г/л: НК₂РО₄ 0,1; СаСl₂ 0,03; МgSO₄ 0,05; NaCl 0,05 с глюкозой (2%) и жидким автолизатом пивных дрожжей (1%) при 26-28^oС и рН 3,5 в течение недели. Биомассу отделяют центрифугированием и многократно промывают дистиллированной водой, затем биомассу автоклавируют при 0,5 атм с 0,5 н NaОН в течение 3 ч. Клеточную массу удаляют центрифугированием, центрифугат подкисляют концентрированной НСl до рН 2-1. Осадок в виде черных хлопьев отделяют центрифугированием и многократно промывают дистиллированной водой. Для получения водорастворимого препарата осадок высушивают и растворяют в небольшом количестве аммиачной воды (25%-ный раствор аммиака) с последующим мягких выпариванием аммиака и воды. Сухой меланинсодержащий препарат представляет собой черные кристаллы с ярким мерцающим блеском. Его физико-химические свойства соответствуют показателям, приведенным в вышеуказанных источниках. Полученный порошок используют для получения водных растворов меланина нужной концентрации.

Полученный из штамма 365 препарат показал высокую активность в отношении клеток рака человека, в частности, клеточной линии карциномы толстой кишки (80% -ный результат), клеточной линии рака легкого (89%-ный результат), а также при лечении больных-добровольцев:
Пример 1. Больной В. рак легкого, прием внутрь 40-10 мг суточная доза, выздоровление 2 года.

Пример 2. Больной И. (врач) меланома, 1У стадия, прием внутрь 60-10 мг суточная доза, и местно на лимфоузлы, выздоровление 1 год 7 мес. высокая работоспособность.

Препарат нетоксичен (опыты на клеточных культурах и на авторе С.П.Лях). Побочные явления не наблюдались.

Таким образом, из сравнения с известными средствами того же назначения видно, что использование препарата меланина из штамма 365 Nadsoniella nigra var.hesuelica позволяет избежать побочного токсичного действия при эффективном основном противоопухолевом действии. Отсюда следует, что штамм Nadsoniella var. hesuelica 365 является продуцентом высокоэффективного противоопухолевого вещества.

Использование: биотехнология, медицина, микробиология, получение веществ антиканцерогенного действия. Сущность изобретения: применение антарктического штамма 365 черных дрожжей Nadsoniella nigra var.hesuelica в качестве продуцента меланинсодержащего препарата, обладающего высоким противоопухолевым эффектом и не проявляющего токсичности.

Применение штамма 365 антарктических черных дрожжей Nadsoniella nigra var. hesuelica в качестве продуцента противоопухолевого меланинсодержащего препарата.