СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭНДОБРОНХИТА Российский патент 1997 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, может быть использовано для оценки типа эндобронхита.

Известен способ определения типа эндобронхита путем подсчета клеточных элементов бронхоальвеолярной лаважной жидкости (БАЛЖ) в камере Горяева после разведения 0,02 мл субстрата физиологическим раствором в соотношении 1:20 (Лишке А. А. Новиков В.Н. Исследование бронхоальвеолярной лаважной жидкости при бронхолегочных нагноениях у детей. Хирургия, 1988, N 7, c. 25-28).

Недостаток способа субъективность, недостаточная точность оценки суммарного клеточного субстрата воспалительной реакции бронхолегочной системы.

Цель объективизация и повышение точности исследования.

Указанная цель достигается с помощью определения количества ДНК в БАЛЖ, коррелирующего с типом инфекционного воспалительного процесса в бронхолегочной системе, путем добавления к фракции В БАЛЖ 0,02% раствора ядерного красителя этидиумбромида и спектрофотометрической оценки коэффициента его поглощения.

Новизна способа заключается в использовании 0,02% раствора этидиумбромида, определении величины коэффициента поглощения при различных типах эндобронхита гнойном 35,9-60,5% катаральном 7,2-28,6% отсутствии эндобронхита меньше 7,2%
Повышение точности исследования по сравнению с подсчетом в камере Горяева достигается за счет увеличения количества исследуемого материала с 0,02 до 2,5 мл, его фракционирования, учета количества ядерного детрита и микробных тел. Чувствительность теста повышается с 65,6 до 81,1% специфичность с 62,5 до 88,5% Результаты объективно регистрируются по шкале спектрофотометра.

Способ осуществляют следующим образом.

Приготовление реактива. 20 мг порошка этидиумбромида (Serva, ФРГ) растворяют в 100 мл 0,85% раствора хлорида натрия.

Ход работы. После тщательного перемешивания 2,5 мл бронхоальвеолярной лаважной жидкости берут в центрифужную пробирку и центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин. Сливают надосадок, к осадку (фракция В) добавляют 1 мл 0,02% раствора этидиумбромида в 0,85% растворе хлорида натрия и тщательно перемешивают. Инкубируют 10 мин при комнатной температуре. Центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин. Отсасывают 0,6 мл надосадка и добавляют 2,5 мл дистиллированной воды. Приготовляют контрольную пробу путем добавления в пробирку с 0,6 мл 0,02% раствора этидиумбромида в 0,85% растворе хлорида натрия 2,5 мл дистиллированной воды. Спектрофотометрируют опытную и контрольную пробы при длине волны 500 нм против дистиллированной воды. Определяют коэффициент поглощения этидиумбромида по формуле:

где D_o оптическая плотность опытной пробы,
D_к оптическая плотность контрольной пробы.

При величине коэффициента 35,9-60,5% определяют гнойный эндобронхит, при величине 7,2-28,6% катаральный, и при величине меньше 7,2% отсутствие эндобронхита.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1. Больная Ю. 12 лет. Диагноз: ХНВЗЛ c мешотчатыми бронхоэктазами базальных сегментов левого легкого, обострение. При бронхоскопии 27.12.88 г. произведен бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) ЛБ₉ 60 мл физиологического раствора, получено 30 мл БАЛЖ. После тщательного перемешивания 2,5 мл БАЛЖ брали в центрифужную пробирку и центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин. Сливали надосадок, к осадку добавляли 1 мл 0,02% раствора этидиумбромида в 0,85% растворе хлорида натрия и тщательно перемешивали. Инкубировали 10 мин при комнатной температуре. Центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин. Отсасывали 0,6 мл надосадка и добавляли 2,5 мл дистиллированной воды. Готовили контрольную пробу путем добавления в пробирку с 0,6 мл 0,02% раствора этидиумбромида в 0,85% растворе хлорида натрия 2,5 мл дистиллированной воды. Спектрофотометрировали опытную и контрольную пробы при длине волны 500 нм против дистиллированной воды. Опытная проба 0,42 единицы оптической плотности, контрольная проба 0,19 единицы оптической плотности. Коэффициент поглощения этидиумбромида фракцией в БАЛЖ 55% Заключение гнойный эндобронхит, совпадает с эндоскопическими и цитологическими данными.

Пример 2. Больной С. 7 лет. Диагноз: ХНВЗЛ со смешанными бронхоэктазами средней доли правого легкого, ремиссия. При бронхоскопии 3.1.89 г. произведен БАЛ ПБ₅ 60 мл физиологического раствора, получено 35 мл БАЛЖ. После тщательного перемешивания 2,5 мл БАЛЖ брали в центрифужную пробирку и центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин. Сливали надосадок, к осадку добавляли 1 мл 0,02% раствора этидиумбромида в 0,85% растворе хлорида натрия и тщательно перемешивали. Инкубировали 10 мин при комнатной температуре. Центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин. Отсасывали 0,6 мл надосадка и добавляли 2,5 мл дистиллированной воды. Готовили контрольную пробу путем добавления в пробирку с 0,6 мл 0,02% раствора этидиумбромида в 0,85% растворе хлорида натрия 2,5 мл дистиллированной воды. Спектрофотометрировали опытную и контрольную пробы при длине волны 500 нм против дистиллированной воды. Опытная проба 0,37 единицы оптической плотности, контрольная проба 0,43 единицы оптической плотности. Коэффициент поглощения этидиумбромида фракцией В БАЛЖ 14% Заключение катаральный эндобронхит, совпадает с эндоскопическими и цитологическими данными.

Пример 3. К. 13 лет. Диагноз: состояние после нижней билобэктомии справа по поводу бронхоэктазов в 1986 г. При бронхоскопии 24.1.89 г. произведен БАЛ ПБ₃ 60 мл физиологического раствора, получено 40 мл БАЛЖ. После тщательного перемешивания 2,5 мл БАЛЖ брали в центрифужную пробирку и центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин. Сливали надосадок, к осадку добавляли 1 мл 0,02% раствора этидиумбромида в 0,85% растворе хлорида натрия и тщательно перемешивали. Инкубировали 10 мин при комнатной температуре. Центрифугировали 30 мин при 3000 об/мин. Отсасывали 0,6 мл надосадка и добавляли 2,5 мл дистиллированной воды. Готовили контрольную пробу путем добавления в пробирку с 0,6 мл 0,02% раствора этидиумбромида в 0,85% растворе хлорида натрия 2,5 мл дистиллированной воды. Спектрофотометрировали опытную и контрольную пробы при длине волны 500 нм против дистиллированной воды. Опытная проба 0,27 единицы оптической плотности, контрольная проба 0,28 единицы оптической плотности. Коэффициент поглощения этидиумбромида фракцией В БАЛЖ 4% Заключение - эндобронхита нет, совпадает с эндоскопическими и цитологическими данными.

Положительный эффект.

Повышается чувствительность и специфичность теста определения типа эндобронхита по сравнению с прототипом. Результаты исследования регистрируются объективно. Способ прост и доступен.

Изобретение относится к области медицины. Сущность изобретения заключается в том, что предложен способ диагностики эндобронхита путем исследования клеточного субстрата бронхоальвеолярной лаважной жидкости, отличающийся тем, что определяют ядерный субстрат путем добавления к фракции В бронхоальвеолярной лаважной жидкости 0,02% раствора ядерного красителя этидиумбромида, спектрофотометрической оценки коэффициента его поглощения и при величине коэффициента 10-22% определяют катаральный эндобронхит, а при величине 23-100% - гнойный. Изобретение позволяет повысить точность и объективность диагностики.

Способ диагностики эндобронхита путем исследования клеточного субстрата бронхоальвеолярной лаважной жидкости, отличающийся тем, что добавляют к фракции В лаважной жидкости 0,02%-ый раствор ядерного красителя этидиумбромида, определяют коэффициент его поглощения и при величине коэффициента 10 22% определяют катаральный эндобронхит, а при величине 23 - 100% гнойный.