СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭМБРИОТОКСИЧНОСТИ ХИМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ И ИХ КОМПЛЕКСОВ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к водной токсикологии, испытаниям побочного токсического действия фармакологических препаратов, пищевых концентратов, кормовых добавок, испытаниям экологической чистоты технологий, связанных со сбросом сточных вод, прогнозу изменений в популяциях различных водных животных в трансформированных сбросом сточных вод экосистемах.

Целью изобретения является универсализация, т.е. расширение спектра тестируемых химических соединений, повышение скорости и чувствительности определения.

Прототип: общепринято изучение тератогенного воздействия испытуемых веществ при содержании в них эмбрионов низших позвоночных. Например, по методике, описанной в статье Friedman M. Raybun J.L. Bantle J.A. в журн. "Food Chem. Toxico. " v. 29, N 8, р. 537-547 (1991), где производится подсчет разнообразных аномалий развития и скорости роста у тест-объекта зародышей шпорцевой лягушки после содержания их в течение 96 ч в исследуемых растворах различных алкалоидов картофеля. Этот метод надежен, но трудоемок и требует просмотра квалифицированным специалистом большого количества опытного материала, причем процедура определения занимает несколько суток.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом: эмбрионы амфибий помещают в камеры с тестируемым раствором и с чистой водой (контроль), в которые добавлен мономер акриламид, меченый по углероду (¹⁴C AA) в таком количестве, чтобы активность рабочего раствора составляла 0,1 мк Кюри/мл или 3,7 КВк/мл. Инкубация эмбрионов продолжается 1 3 ч, затем эмбрионы отмывают в 3-х сменах чистой воды, не содержащей радиоактивного вещества, извлекают из воды, помещают в флаконы для сцинтилляционного счета, где растворяют в концентрированной хлорной кислоте (НСlO₄). Определяют истинную радиоактивность проб методом жидкостного сцинтилляционного счета.

К токсичным относят растворы при отклонении истинной радиоактивности опытной пробы более чем на 30% от контроля. Заключение правомочно, т.к. оно основано на результатах предварительных экспериментов, в которых сочетались измерения радиоактивности с исследованиями тератогенеза и гибели и было показано, что метаболические отклонения более чем на 30% от нормы коррелируют с началом патологических процессов в популяции.

Пример. Проведение определения эмбриотоксичности растворов медного купороса, янтарной кислоты и солярового масла с помощью тест-объектов - зародышей шпорцевой лягушки (лабораторный вид амфибий) на стадии начальной гаструлы (таблица). Активность рабочего раствора ¹⁴С АА 0,1 мкКюри/мл, срок инкубации 1,5 час. В каждой пробе 10 зародыше. Удельная радиоактивность пересчитана на 1 зародыш (вес стандартный).

Пример демонстрирует универсальность предлагаемого способа, т.к. примененная нами индикаторная реакция характеризует быстрый неспецифический ответ тест-объекта на воздействие химических соединений различной природы; способ экспрессный, т.к. прогностический ответ может быть получен в течение одного дня; чувствительность способа высокая: определяется токсичность таких концентраций солярового масла и медного купороса, которые считаются допустимыми в рыбоводной практике; как значительно менее токсичное вещество определяется биостимулятор янтарная кислота.

Использование: в водной токсикологии при испытании побочного действия фармакологических препаратов, пищевых концентратов, кормовых добавок при испытаниях экологической чистоты технологий, связанных со сбросом сточных вод, при составлении прогноза изменений в популяциях различных водных животных в трансформированных сбросом сточных вод эхосистемах. Сущность изобретения: эмбрионы инкубируют с индикаторной радиоактивной меткой, к эмбриотоксичным относят ту среду, в которой истинная радиоактивность более чем на 30% отличается от контрольных. 1 табл.

Способ определения эмбриотоксичности химических соединений и их комплексов, предусматривающий помещение эмбрионов в качестве тест-объектов в опытную и контрольную камеры с исследуемыми растворами и с чистой водой, содержащие индикаторную радиоактивную метку, извлечение эмбрионов и изучение их состояния с последующей оценкой токсичности по отклонению истинной радиоактивности в опыте по сравнению с контролем, отличающийся тем, что в качестве индикаторной метки используют ¹⁴С-акриламид активностью 0,1 мкКюри/мл, введение метки осуществляют непосредственно в исследуемый раствор и воду, сравнение состояния эмбрионов проводят после растворения их в концентрированной хлорной кислоте, а к эмбриотоксичным относят растворы при отклонении значений истинной радиоактивности в опытной пробе более чем на 30% по сравнению с контролем.