Способ диагностики генитального кандидоза Советский патент 1991 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к области медицинской микологии и может быть использовано в диагностике генитального кандидоза.

Цель изобретения - повышение точности способа и сокращение времени диагностики.

Способ осуществляют следующим образом.

Сыворотку крови получают из венозной крови больного. Предварительно определяют рабочую дозу антигена. Для этого готовят 2- кратные разведения гликопротеидного антигена (Candida alblcaus). В ряд пробирок вносят пипеткой исследуемую сыворотку больного, предварительно сорбированную эритроцитами барабана, и равный объем различных разведений антигена. Полученную смесь инкубируют при 37°С в течение 30 мин и проводят постановку РТНГА с антигенным эритроцитарным диагностику- мом. Доза антигена, нейтрализующая антитела сыворотки крови, является эквивалентной. За рабочую дозу антигена принимают его разведение, на 1 порядок превышающее эквивалентную дозу. Затем приступают к постановке основного опыта. В две опытные пробирки вносят по 0.1 мл i исследуемой сыворотки крови и по 0,1 мл антигена в рабочем разведении; в две контрольные пробирки вносят по 0,1 мл физиологического раствора. Пробирку инкубируют в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем в одну опытную и одну контрольную пробирки вносят по 2 мл 6% ПЭГеооо для определения мелких иммунных комплексов.в две оставшихся пробирки вносят такое же количество 3% раствора ПЭГеооо для определения крупных иммунных комплексов. Пробирки инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре, после чего содержимое пробирок переносят в кюветы спектрофотометра и фотометрируют при длине волны 450 нм. Результаты учитывают в единицах оптической плотности (ед.ОП).

ё

О

VI

О Os О VI

Далее определяют величину иммунных комплексов, образующихся при взаимодействии сыворотки крови с субэквивалентной дозой специфического антигена. Для этого вычисляют показатель соотношения мелких

иммунных комплексов к крупным (ИК- в

контрольных пробах (без добавления анти- . гена) и опытных пробах (с добавлением антигена), и при снижении этого показателя в опытных пробах по сравнению с контрольными (что свидетельствует об образовании у больных преимущественно крупных иммунных комплексов со специфическим антигеном) диагностируют генитальный кандидоз.

При м.е р 1. Больная Б., 30 лет, поступила в клинику Всесоюзного центра по глубоким микозам МЗ СССР с жалобами на зуд наружных половых органов, выделения из влагалища. Больна в течение 1 года после лечения высокими дозами антибиотиков широкого спектра действия по поводу эндометрита. При осмотре гинекологом обнаружены явления вульвовагинита. Микроскопия мазков отделяемого влагалища выявила дрожжевые клетки. При посеве патологического материала на сусло-агар обнаружен рост дрожжевых клеток, культура идентифицирована как Candida alblcaus. Специфи- ческие антитела в сыворотке крови выявлены в реакции непрямой иммунофлу- оресценции (РНИФ) в титрах 1:4, в реакции непрямой гемагглютинации(РНГА) в титрах 1:32. У больной исследовано соотношение мелких иммунных комплексов к крупным после добавления к сыворотке крови субэквивалентной дозы специфического антигена (опыт) и без добавления антигена (контроль). Для этого предварительно определяли рабо- чую дозу антигена следующим образом. Готовили 2-кратные разведения антигена. В ряд пробирок вносили исследуемую сыворотку больной, сорбированную эритроцитами барана, и равный объем различных разведе- ний антигена. Смесь инкубировали при 37°С в течение 30 мин и проводили постановку РТНГА с антигенным эритроцитар- ным диагностикумом. Оказалось, что при добавлении к сыворотке крови антигена в количестве 0,07 мг/мл (расчет проводился по содержанию белка в антигенном препарате) антитела сыворотки крови полностью нейтрализуются. За рабочую дозу антигена принята доза 0,035 мг/мл. Затем приступи- ли к постановке основного опыта. В две опытные пробирки внесли по 0,1 мл исследуемой сыворотки и по 0,1 мл антигена в рабочей дозе; в две контрольные пробирки внесли по 0,1 мл исследуемой сыворотки и

по 0,1 мл физиологического раствора. Пробирки инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем в одну опытную и одну контрольную пробирку внесли по 2 мл 6 % ПЭГеооо для определения мелких иммунных комплексов,в две оставшихся пробирки внесли по 2 мл 3% раствора ПЭГеооо для определения крупных иммунных комлексов. Пробирки инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре, после чего содержимое пробирок перенесли в кюветы спектрофотометра и фотометрирова- при длине волны 450 нм. Результаты учитывали в единицах оптической плотности (ед.ОП). Количество мелких иммунных комплексов в контрольной пробе составило 0,47 ед. ОП, крупных иммунных комплексов - 0,12 ед. ОП. В опытной пробе (т.е. при добавлении к сыворотке крови антигена в рабочей дозе) количество мелких иммунных комплексов повысилось до U.54 ед. Uli, a количество крупных иммунных комплексов возросло до 0,25 ед. ОП. Далее высчитывали показатель соотношения количества мелких иммунных комплексов к крупным в опытной и контрольной пробах. В контрольной пробе он оказался равным

0,47ед.ОП „Q 0,12ед.ОП

в опытной пробе он составил

0.54ед.ОП 1fi 0,25ед.ОП °

Снижение соотношения мелких иммунных комплексов к крупным в опытной пробе по сравнению с контрольной свидетельствовало о наличии у данной больной гени- тального кандидоза. Действительно, на основании повторных исследований диагноз кандидоза гениталий был подтвержден. Лечение антифунгальными препаратами привело к положительному эффекту,

П р и м е р 2, Больная М. Поступила в клинику Всесоюзного центра по глубоким микозам МЗ СССР с жалобами на зуд наружных гениталий и выделения из влагалища. Больна в течение 5 мес. При объективном осмотре гинеколога обнаружены проявления вульвовагинита. Микроскопическое исследование отделяемого влагалища показало наличие в мазках дрожжевых клеток и Frlchomonas vaglnalis. Посев патологического материала на сусло-агар выявил рост гриба, гриб был идентифицирован как С.alblcaus. Специфические антитела сыворотки крови в РНИФ выявлены в титрах 1:16, в РИГА 1:32. Показатель соотношения ИК - в контрольной (исходной)сыворотке составил

0.1ед.ОП 0 э 0.23ед.ОП и

в опытной пробе

0.12ед.ОП 0.27ед.ОП

0,44,

т.е. при взаимодействии сыворотки крови с субэквивалентной дозой специфического антигена не отмечено снижения соотношения ИК - по сравнению с этим показателем в контрольной пробе, что свидетельствовало об отсутствии кандидоза у больной. Больной был поставлен диагноз трихомониаза. Действительно, специфическое лечение трихомониаза без применения антифунгальной терапии привело к выздоровлению больной.

Предложенный способ апробирован на 20 здоровых лицах, 10 больных гинекологическими и соматическими заболеваниями некандидоэной этиологии и 20 больных ге- нитальным кандидозом.

У здоровых лиц и больных гинекологи ческими соматическими заболеваниями не- кандидозной этиологии после добавления к сыворотке крови антигена в рабочей дозе м

ИК - не менялось или возсоотношение

растало. При наличии генитального кандидоза этот показатель снижался у 17 из 20 обследованных, т.е. в 85% случаев.

При исследовании сыворотки крови соответственно известному способу (определение титров антител в сыворотке крови), диагностически значимые титры антител в РНИФ найдены в 3 из 20 больных гениталь- ным кандидозом,что составляет 15% случаев от числа обследованных, вРНГА-у5из

20 больных, т.е. в 25% случаев.

Таким образом предложенный способ повышает надежность серодиагностики не менее, чем на 60%. Время диагностики по сравнению с прототипом уменьшается на 7

- 10 дней, так как предлагаемый способ не требует исследования сыворотки крови в динамике, и выполняется однократно в течение одного рабочего дня.

Формула изобретения

Способ диагностики генитального кан- дидоэа путем забора крови, выделения сыворотки, добавления к ней антигена с последующей инкубацией, отличающийс я тем, что с целью повышения точности способа и сокращения времени диагностики, к сыворотке крови и к смеси ее с антигеном дополнительно добавляют полиэтиленгли- коль, после инкубации центрифугируют, определяют концентрацию мелких и крупных иммунных комплексов по оптической плотности, вычисляют их соотношение и при снижении соотношения иммунных комплексов в сыворотке, содержащей антиген, по сравнению с этим соотношением в сыворотке диагностируют генитальный кандидоз.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в диагностике генитального кандидоза. Цель изобретения - повышение точности способа и сокращение времени диагностики. У больного берут кровь, выделяют сыворотку, в одну ее пробу добавляют антиген, а обе пробы инкубируют с 3% и 5% полиэтиленгликоля, определяют затем количество мелких и крупных иммунных комплексов по оптической плотности, вычисляют соотношение между ними и при снижении этого соотношения в пробе сыворотки с антигеном по сравнению с пробой без антигена диагностируют генитальный кандидоз. По сравнению с прототипом повышается точность способа на 60%, а время диагностики сокращается на 7 - 10 дней.