СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИИ Российский патент 1995 года по МПК G01N33/68 

Изобретение относится к области аллергологии и может быть использовано в диагностике аллергии и в целях профотбора для работы с аллергенами.

Известен способ диагностики аллергии путем определения концентрации общего иммуноглобулина Е (IgE) в сыворотке крови радиоиммунологическим методом.

Недостатком способа является его трудоемкость (на исследование требуется более 24 ч), необходимость наличия дорогостоящих реактивов и специального оборудования, а также длительность времени обследования, так как выпускаемые стандартные наборы содержат реактивы для одновременного определения общего IgE в 40 пробах, в связи с чем исследуемый материал приходится накапливать при -20^оС.

Известен также способ определения иммунных комплексов путем их преципитации полиэтиленгликолем с мол.м. 6000 (ПЭГ₆₀₀₀), используемый для определения активности процесса и контроля за эффективностью терапии при иммунокомплексных болезнях.

Цель изобретения - упрощение способа, сокращение затрат и увеличение надежности диагностики аллергии.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу диагностики аллергии, к сыворотке крови добавляют ПЭГ₆₀₀₀, смесь инкубируют и определяют фотометрически величину оптической плотности опытного раствора по сравнению с контрольным, не содержащим ПЭГ ₆₀₀₀, и при значении оптической плотности (ОП) менее 1,2 ед диагностируют аллергию.

Способ осуществляют следующим образом. Сыворотку, полученную из венозной крови больного, разводят 1:4 забуференным физиологическим раствором (ЗФР) с рН 7,2. В опытную пробирку вносят 0,1 мл сыворотки крови и 2 мл 6% (ПЭГ₆₀₀₀), растворенного в ЗФР с рН 7,2. В контрольную пробирку вносят 0,1 мл той же разведенной 1:4 сыворотки крови и 2 мл ЗФР рН 7,2. Пробирки инкубируют 1 ч при комнатной температуре, затем пробы переносят в кюветы прямоугольные кварцевые для слоя жидкости толщиной 10 мм (К10) и определяют оптическую плотность опытной пробы против контрольной при длине волны 450 нм. Результаты учитывают в ед. ОП. Расчет конечного результата проводят путем умножения ОП пробы на 4 (учитывая разведение исследуемой сыворотки). В случае возрастания ОП в опытной пробе против контрольной менее чем до 1,2 ед. ОП диагностируют аллергию. Заявляемое техническое решение отличается от прототипа тем, что в сыворотке крови исследуют количество иммунных комплексов, преципитирующихся 6% ПЭГ₆₀₀₀, и при низких значениях количества иммунных комплексов диагностируют аллергию, что, видимо, обусловлено пропотеванием белков из циркуляции в связи с повышенной проницаемостью сосудов при аллергии.

Таким образом, заявляемое техническое решение соответствует критерию "новизна". Признаки, отличающие техническое решение от прототипа, не выявлены при изучении данной и смежной областей медицины и, следовательно, обеспечивают заявляемому техническому решению соответствие критерию "существенные отличия".

П р и м е р 1. Больная К., 23 года, поступила в клинику Всесоюзного центра по глубоким микозам МЗ СССР с жалобами на периодическое покраснение век, слезотечение и жидкие выделения из носа, не связанные с простудными заболеваниями. Из венозной крови больной была получена сыворотка крови. Определение оптической плотности преципитата, образующегося в результате добавления 6% ПЭГ₆₀₀₀, осуществляли следующим образом. В опытную пробирку вносили 0,1 мл исследуемой сыворотки крови, разведенной в ЗФР рН 7,2 1:4, и 2 мл 6% ПЭГ₆₀₀₀, растворенного в ЗФР с рН 7,2. В контрольную пробирку вносили 0,1 мл ЗФР с рН 7,2 и 2 мл такого же раствора 6% ПЭГ₆₀₀₀. Пробы инкубировали 1 ч при комнатной температуре, переносили в кюветы спектрофотометра для слоя жидкости 10 мм и определяли оптическую плотность опытной пробы против контрольной при длине волны 450 нм. Она составила 0,11 ед. ОП. Для получения конечного результата данные оптической плотности умножали на 4 (учитывая разведение исследуемой сыворотки). Окончательный результат оказался равным: 0,11 ед. ОП˙4 = 0,44 ед. ОП, что свидетельствовало о наличии аллергии у больной, так как результат ОП оказался меньше, чем 1,2 ед. ОП).

Действительно, при аллергообследовании у больной была выявлена аллергия к домашней пыли, шерсти кошки, шерсти собаки, библиотечной пыли, хеку, пыльце овсяницы, полыни, лебеды, тимофеевки, протею, Кандида альбиканс. Клинически диагноз аллергии (аллергического риноконьюнктивита) был подтвержден.

П р и м е р 2. Больная Б., 41 год, поступила в клинику Всесоюзного центра по глубоким микозам МЗ СССР с жалобами на боли в правом подреберье и опоясывающие боли в пояснице, связанные с приемом жирной пищи, беспокоящие больную с 1985 года. С мая 1989 года у больной периодически (несколько раз в месяц) появлялась сыпь и зуд по всему телу, возникали рецидивирующие отеки Квинке, не связанные с приемом каких-либо препаратов или пищевых продуктов. Результаты объективного обследования, лабораторных и инструментальных исследований свидетельствовали о наличии у больной хронического холецистопанкреатита.

С целью выявления аллергии у больной была исследована оптическая плотность сыворотки крови после добавления 6% ПЭГ₆₀₀₀, она составила 2,0 ед. ОП, что указывало на отсутствие аллергии (ОП > 1,2 ед.ОП). Для дифференциальной диагностики псевдоаллергической реакции от истинной аллергической была проведена проба на определение кинетики общего билирубина в крови (до и после 3 дн. голодания). На фоне голодания билирубин в крови увеличился с 12 до 27 мкмоль/л. Результаты пробы также свидетельствовали о наличии у больной псевдоаллергической реакции, связанной с патологией печени. На основании жалоб, осмотра и данных клинико-лабораторного обследования больной был поставлен диагноз: хронический холецистопанкреатит. Псевдоаллергическая крапивница.

Действительно, нормализация функции печени в результате комплексной терапии привела к улучшению общего состояния больной и отсутствию рецидивов появления сыпи и отеков Квинке в течение всего срока наблюдения (срок наблюдения год).

Предлагаемый способ апробирован на 20 здоровых лицах, 60 больных с различной соматической патологией без признаков аллергии и 60 больных различными формами аллергии (бронхиальная астма, рецидивирующий отек Квинке, крапивница, аллергический ринит и риноконьюнктивит). Результаты исследования приведены в табл. 1.

С целью исследования надежности предлагаемого способа по сравнению с прототипом на ограниченном контингенте лиц было проведено определение эффективности диагностики аллергии методом исследования общего IgЕ в сыворотке крови (согласно прототипу) (табл. 2).

Эффективность диагностики аллергии предлагаемым способом оказалась выше по сравнению с прототипом: у больных аллергией она составила 86,77 и 76,19% . При диагностике аллергии предлагаемым способом затраты времени составляют не более 2 ч, при использовании известного способа непосредственно на исследование общего IgE требуется более суток, к тому же сыворотки обычно накапливают для одновременного тестирования 40 проб.

Таким образом, предлагаемый способ повышает надежность диагностики аллергии, упрощает ее, сокращает время исследования и снижает затраты, так как не требует дорогостоящих реактивов и радиоизотопной лаборатории, способ может быть применен в любой клинической лаборатории.

Использование: медицина, в частности аллергология. Цель: повышение точности способа. Сущность предложения: берут сыворотку крови, разводят ее забуференным физиологическим раствором в соотношении 1:4, затем к 0,1 мл разбавленной сыворотки добавляют 2 мл 6% ПЭГ-6000, смесь инкубируют в течение 1 ч. при комнатной температуре с последующей спектрофотометрией при 450 нм и при значении оптической плотности смеси 1,2 ед. диагностируют аллергию. использование способа в 2,5 раза ускоряет диагностику аллергии, точности диагностики 87%. 2 табл.

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИИ, включающий лабораторный анализ сыворотки крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, к 0,1 мл сыворотки крови, предварительно разведенной забуференным физиологическим раствором в соотношении 1:4, добавляют 2 мл 6%-ного ПЭГ-6000, смесь инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре с последующей спектрофотометрией при 450 нм и при значении оптической плотности смеси менее 1,2 ед.диагностируют аллергию.