ИНДУКТОР ИНТЕРФЕРОНА РИДОСТИН Российский патент 1997 года по МПК A61K38/20 

Описание патента на изобретение RU2083221C1

Изобретение относится к медицине и ветеринарии и может быть использовано для лечения и профилактики вирусных заболеваний.

Индукторы интерферона, стимулирующие выработку в организме человека и животных эндогенного интерферона, имеют ряд преимуществ перед препаратами экзогенного интерферона и являются перспективными средствами профилактики и терапии вирусных инфекций.

К наиболее активным индукторам интерферона относятся синтетические полирибонуклеотиды и двуспиральные (дс)PHK природного происхождения.

Однако наряду с высокой эффективностью их как индукторов интерферона эти препараты обладают высокой токсичностью и проявляют мутагенную активность.

Известен индуктор интерферона двуспиральный полирибонуклеотидный комплекс поли И: поли Ц, оказывающий ингибирующее действие в отношении широкого круга вирусов. Однако препарат поли И: поли Ц также является высокотоксичным и обладает мутагенной активностью.

Наиболее близким к заявляемому препарату (прототипом) является индуктор интерферона до PHK киллерных штаммов дрожжей Saccharomyces cerevisiae, индуцирующий высокие титры интерферона и проявляющий выраженную противовирусную активность в отношении широкого круга инфекций (грипп, герпес, ВИЧ, клещевой энцефалит и др.), причем на ряде моделей он демонстрирует преимущества перед другими индукторами интерферона, такими, как ларифан, поли Г: поли Ц.

Недостатками индуктора интерферона дсPHK из дрожжей Saccharomeces cerevisiae являются:
1. Высокая токсичность препарат относится к классу сильно действующих ядовитых веществ (ЛД50 при внутрибрюшинном введении мышам 5,1 9,7 мг/кг).

2. Наличие слабого, но статистически достоверного мутагенного эффекта в виде повышения числа хромосомных аберраций в 2-2,5 раза по сравнению с контролем (интактными животными).

Целью изобретения является создание нового препарата индуктора интерферона на основе дсPHK киллерных штаммов дрожжей S.cerevisiae - ридостина, обладающего высокой эффективностью, сниженной токсичностью, хорошей переносимостью и на обладающего мутагенной активностью.

Цель достигается путем создания оптимальной лекарственной формы индуктора интерферона (ридостина), в состав которой входят дcPHK дрожжей S.cerevisiae и однонитевая PHK дрожжей как основные компоненты, при этом содержание дсPHK ограничивается 5-15%
Ридостин представляет собой стерильный лиофилизованный препарат, содержащий дcPHK в количестве 5 15% и дополнительно однонитевую PHK дрожжей.

Партии препарата имеют следующие характеристики:
интерферониндуцирующая активность не менее 640 ИЕ50/мл;
значения среднесмертельных доз для мышей при внутрибрюшинном способе введения 45 120 мг/кг;
количество метафаз с хромосомными аберрациями не превышало значений этого показателя у контрольных животных.

Новыми существенными отличительными признаками предлагаемого препарата являются введение в состав препарата однонитевой высокополимерной PHK дрожжей и снижение содержания высокотоксичного компонента дсPHK до 5-15%
Экспериментальными данными установлено, что дсPHK дрожжей проявляет слабый, но статистически достоверный мутагенный эффект, повышая частоту хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей после внутрибрюшинного введения дсPHK в дозе 1/4 ЛД50 (1,5 мг/кг) (табл. 1), что существенно ограничивает возможность применения препарата как лечебно-профилактического средства для медицины и ветеринарии.

Как видно из данных табл. 1, введение только дсPHK приводит к статистически достоверному повышению количества хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей. В случае введения комплексного препарата, содержащего дополнительно однонитевую высокополимерную PHK, повышение частоты хромосомных нарушений не выявляется.

Введение нового биологически активного компонента однонитевой PHK могло отразиться на целевом свойстве интерферониндуцирующей активности. В связи с этим авторы исследуют интерферониндуцирующую активность образцов препарата, содержащих однонитевую PHK в отношении к дсPHK 1:1 40:1. Образцы препаратов вводят внутрибрюшинно белым беспородным мышам в дозах, содержащих одинаковое количество дсPHK (0,5 мг/кг).

Результаты приведены в табл. 2.

Как видно из данных табл. 2, однонитевая PHK в любом соотношении, вплоть до 40: 1, не приводит к потере интерферониндуцирующих свойств препарата дсPHK.

Поскольку сохранение эффективности при снижении содержания активного начала не являлось очевидным, то проведено изучение зависимости интерферониндуцирующей активности от содержания дсPHK в препарате. Определение интерферониндуцирующей активности препаратов с различным содержанием дсPHK проводят на беспородных мышах. Все препараты вводят внутрибрюшинно в одинаковой дозе 5 мг/кг (табл. 3).

Как видно из данных табл. 3, титры интерферона, стабильно превышающие уровень 640 ИЕ50/мл, позволяющие отнести препарат к высокоактивным индукторам интерферона, получают при использовании образцов с содержанием дсPHK выше 2,5%
В то же время увеличение процентного содержания дсPHK в препарате выше 10-15% не дает существенного прироста титров продуцируемого интерферона, что позволяет ограничить содержание дсPHK в препарате 10-13%
Экспериментальными данными установлено, что препараты с содержанием дсPHK выше 50% являются высокотоксичными и сильно действующими ядовитыми веществами (СДЯВ) ЛД50 менее 50 мг/кг. Корреляционный анализ связи состава препарата и его токсичности показывает, что уровень токсичности определяется содержанием дсPHK в нем имеется тесная обратная корреляционная связь среднесмертельной дозы препарата с содержанием дсPHK (табл. 4).

ЛД50 образцов препарата с содержанием дсPHK 5 15% и содержащих в своем составе однонитевую PHK колебалась в пределах 45 120 мг/кг при внутрибрюшинном способе введения, т.е. препараты относились к высоко- или среднетоксичным соединениям.

Результаты экспериментального изучения биологических свойств препарата ридостин в сравнении с его прототипом дсPHK дрожжей, суммированные в табл. 1-4, свидетельствуют о том, что предлагаемое изменение состава индуктора интерферона приводит к устранению нежелательных побочных эффектов устранению мутагенности, снижению токсичности препарата, уменьшению расхода дорогостоящего компонента дсPHK при сохранении его целевых свойств - интерферониндуцирующей активности.

Именно использование отличительных существенных признаков заявляемой композиции препарата: содержание дсPHK в количестве 5-15% и введение в состав препарата однонитевой PHK -позволяет получить качественно новый эффект, а именно:
1. Высокая интерферониндуцирующая активность.

2. Сниженная по сравнению с прототипом токсичность.

3. Отсутствие мутагенной активности.

4. Снижение стоимости дозы препарата, что в совокупности делает его перспективным для клинического использования.

Пример 1. Состав приготавливают при следующем соотношении компонентов, мас. дсPHK 9% однонитевая PHK 30% NaCl остальное. Остальные примеры состава приготавливают аналогичным образом. Серия препарата с приведенным выше составом имеет следующие характеристики: интерферониндуцирующая активность - 1088±64 ИЕ50/мл; среднесмертельная доза при внутрибрюшинном введении мышам 71 мг/кг; мутагенная активность не выявляется (количество хромосомных аберраций 1,0% в опыте по сравнению с 1,8% в контроле, которым служили животные, получившие 0,9% NaCl).

Пример 2. Берут следующие соотношения компонентов: дсPHK 8% однонитевая PHK 41% NaCl остальное. Серия препарата с приведенным выше составом имеет следующие характеристики: интетрферониндуцирующая активность - 1180 ИЕ50/мл; среднесмертельная доза 120 мг/кг; количество хромосомных аберраций 2,5% (по сравнению с 2,0% в контроле), что свидетельствует об отсутствии мутагенной активности.

Пример 3. Берут следующее соотношение компонентов, мас. дсPHK 15% однонитевая PHK 45% NaCl остальное. Серия препарата с приведенным выше составом имеет следующие характеристики: интерферониндуцирующая активность - 1051±392 ИЕ50/мл, среднесмертельная доза 80 мг/кг, количество хромосомных аберраций 1,8% (по сравнению с 1,5% у интактных животных), что свидетельствует об отсутствии мутагенной активности.

Пример 4. Берут следующее соотношение компонентов, мас. дсPHK 5,0% однонитевая PHK 52% NaCl остальное. Серия препарата с таким составом имеет следующие характеристики: интерферониндуцирующая активность - 1280±0; среднесмертельная доза при внтурибрюшинном введении мышам 90 мг/кг; количество хромосомных аберраций 2,0% (по сравнению с 1,5% у интактных животных).

Пример 5. Интерферониндуцирующую активность образцов ридостина изучают при внутрибрюшинном введении белым мышам колонии ICR. Препараты вводят в дозе 5 мг/кг. Кровь из ретроорбитального синуса мышей забирают через 6 ч после введения. О наличии интерферона судят по подавлению цитопатического действия (ЦПД50) тест-вируса (вирус везикулярного стоматита штамм Индиана) в культуре L-929 мышинных фибробластов методом титрования в микроплатах. За титр сывороточного интерферона (в ИЕ50/мл) принимают величину, обратную его наибольшему разведению, при котором наблюдают защиту 50% клеток культуры от цитопатического действия 100 ЦПД50 тест-вируса. Результаты представлены в табл. 5.

Из данных табл. 5 видно, что образцы препарата, содержащие 5-15% дсPHK и однонитевую PHK, являются активными индукторами интерферона.

Пример 6. Определение среднесмертельных доз 3 серий ридостина и 4 серий дсPHK с различным содержанием основных компонентов проводят экспресс-методом по Прозоровскому на белых рандомбредных мышах при внутрибрюшинном введении.

Результаты представлены в табл. 6.

Значения среднесмертельных доз ридостина составляют 71% 90% что позволяет отнести их к классу среднетоксичных соединений в отличие от препаратов, содержащих дсPHK в количестве более 15% относящихся к высокотоксичным и сильнодействующим соединениям.

Пример 7. Мутагенную активность образцов ридостина оценивают по методу анализа хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей линии C 57 BL/6 массой 18-20 г возраcтом 2-3 мас. Препараты вводят внутрибрюшинно в дозах, равных по содержанию дсPHK и соответствующих приблизительно 1/4 ЛД50. Мутагенный эффект оценивают по наличию хромосомных аберраций в клетках костного мозга, учитывая структурные аберрации (фрагменты) через 24 ч после введения. На каждую точку анализа берут по 4 самца, у каждого животного анализируют по 100 метафаз. Достоверность отличия опыта от контроля определяют по критерию Стьюдента с поправкой Фишера.

Результаты приведены в табл. 7.

Как видно из представленных данных, препараты, содержащие дсPHK в выбранном интервале (5-15%) и дополнительно однонитевую PHK, не проявляют мутагенной активности в отличие от прототипа.

Препарат Ридостин прошел полный цикл доклинических испытаний.

Похожие патенты RU2083221C1

название год авторы номер документа
ИНДУКТОР ИНТЕРФЕРОНА ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ 1999
  • Левагина Г.М.
  • Аликин Ю.С.
  • Масычева В.И.
  • Даниленко Е.Д.
  • Фадина В.А.
  • Игнатьев Г.М.
RU2172631C2
СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ РЫБ 1993
  • Щелкунов И.С.
  • Аликин Ю.С.
  • Щелкунова Т.И.
  • Купинская О.А.
RU2043714C1
ФРАГМЕНТ ДНК S54, КОДИРУЮЩИЙ ПОЛИПЕПТИД С АКТИВНОСТЬЮ ГАММА-ИНТЕРФЕРОНА, РЕКОМБИНАНТНАЯ ПЛАЗМИДНАЯ ДНК, ОБЕСПЕЧИВАЮЩАЯ СИНТЕЗ ПОЛИПЕПТИДА С АКТИВНОСТЬЮ ГАММА-ИНТЕРФЕРОНА И ШТАММ ESCHERICHIA COLI - ПРОДУЦЕНТ ПОЛИПЕПТИДА С АКТИВНОСТЬЮ ГАММА-ИНТЕРФЕРОНА 1992
  • Татьков С.И.
  • Смирнова О.Ю.
  • Кищенко Г.П.
  • Петренко В.А.
RU2046144C1
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИБОНУКЛЕАЗЫ ПАНКРЕАТИЧЕСКОЙ 1994
  • Хомов В.В.
  • Сизов А.А.
  • Масычева В.И.
  • Загребельный С.Н.
RU2090195C1
СПОСОБЫ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗВАННЫХ ВИРУСОМ ГРИППА ПТИЦ A/H5N1, С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ИНДУКТОРА ИНТЕРФЕРОНА И ИНГИБИТОРА НЕЙРАМИНИДАЗЫ 2008
  • Скарнович Максим Олегович
  • Шишкина Лариса Николаевна
  • Сергеев Александр Николаевич
  • Кабанов Алексей Сергеевич
  • Мазуркова Наталья Алексеевна
  • Даниленко Елена Дмитриевна
  • Масычева Валентина Ивановна
  • Дроздов Илья Геннадиевич
RU2398596C2
ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЙ БИОПРЕПАРАТ СУБАЛИН 1992
  • Смирнов В.В.
  • Резник С.Р.
  • Сорокулова И.Б.
  • Сандахчиев Л.С.
  • Петренко В.А.
  • Ильичев А.А.
  • Белявская В.Н.
  • Тимофеев И.В.
RU2035185C1
ЛИПОСОМАЛЬНЫЙ ИНДУКТОР ИНТЕРФЕРОНА 2004
  • Золин Владимир Викторович
  • Колокольцов Алексей Александрович
  • Таргонский Сергей Николаевич
  • Бажутин Николай Борисович
  • Войтенко Александр Васильевич
RU2306936C2
РЕКОМБИНАНТНАЯ ФАГОВАЯ ДНК М13 POL Т7 И РЕКОМБИНАНТНЫЙ ШТАММ ФАГА М13 - ПРОДУЦЕНТ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ ФАГА Т7 1994
  • Ильичев А.А.
  • Меламед Н.В.
  • Долгова И.Н.
  • Хомов В.В.
  • Сизов А.А.
  • Петренко В.А.
RU2089613C1
ЛЕКАРСТВЕННОЕ СРЕДСТВО ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ВИРУСНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 1994
  • Шипулина Л.Д.
  • Вичканова С.А.
  • Шейченко О.П.
  • Толкачев О.Н.
RU2118163C1
СУППОЗИТОРИИ ИНДУКТОРА ИНТЕРФЕРОНА 2005
  • Левагина Галина Михайловна
  • Масычева Валентина Ивановна
  • Даниленко Елена Дмитриевна
RU2328272C2

Иллюстрации к изобретению RU 2 083 221 C1

Реферат патента 1997 года ИНДУКТОР ИНТЕРФЕРОНА РИДОСТИН

Изобретение относится к медицине и ветеринарии. С целью получения немутагенного препарата со сниженной токсичностью, хорошей переносимостью и высокоактивного в отношении индукции интерферона предложена композиционная форма препарата - Ридостин, имеющая в своем составе двуспиральную PHK из киллерных штаммов дрожжей Saccharomyces cerevisiae в количестве 5-15% и однонитевую PHK дрожжей как основные компоненты. 7 табл.

Формула изобретения RU 2 083 221 C1

Индуктор интерферона, содержащий двуспиральную РНК из дрожжей Saccharomices cerevisiae, отличающийся тем, что он дополнительно содержит однонитевую высокополимерную РНК дрожжей при следующем соотношении компонентов, мас.

Двуспиральная РНК 5 15
Однонитевая высокополимерная РНК 30 52
NaCl Остальное

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1997 года RU2083221C1

Антибиотики и медицинская технология, 1985, т
Способ обработки медных солей нафтеновых кислот 1923
  • Потоловский М.С.
SU30A1
Способ изготовления электрических сопротивлений посредством осаждения слоя проводника на поверхности изолятора 1921
  • Андреев Н.Н.
  • Ландсберг Г.С.
SU19A1

RU 2 083 221 C1

Авторы

Аликин Ю.С.

Веревкина К.Н.

Дубатолова Т.Д.

Дужак А.Б.

Костомаха А.Н.

Лобова Н.Н.

Масычева В.И.

Морозова Е.Н.

Надолинная И.Г.

Подгорный В.Ф.

Пупкова В.И.

Штань А.В.

Ершов Ф.И.

Даты

1997-07-10Публикация

1993-01-12Подача