ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ХЛАМИДИОЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И ПУШНЫХ ЗВЕРЕЙ Российский патент 1997 года по МПК A61K39/118 

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарной микробиологии, в частности к получению вакцин для специфической профилактики и лечения хламидийных инфекций крупного рогатого скота, овец, коз, свиней и пушных зверей.

Известна ассоциированная вакцина для профилактики респираторных заболеваний крупного рогатого скота, содержащая вирусы инфекционного ринотрахеита и диареи, антиген хламидий из штамма Chlamydia abortis bovis К-8 ВИЭВ в титре 10^6,5-7,5 ЭЛД_50/Мл, формалин и адъювант на основе минерального масла и ланолина (авт. св. СССР N 1789219, кл. A 61 K 39/118, опубл. 1993).

Однако известная вакцина предназначена для иммунизации только крупного рогатого скота и неэффективна против хламидиоза животных другого вида.

Наиболее близким аналогом является вакцина против хламидиоза сельскохозяйственных животных, содержащая в качестве антигена хламидиосодержащую культуральную жидкость из инфицированных желточных куриных эмбрионов, инактиватор мертиолят и адьювант из смеси растворов тригидрооксиметиламинометана с тетраметилдиамином, акриламида и метилбисакриламида, раствора персульфата аммония и раствора глютарового альдегида (авт.св. СССР N 826744, км. C 12 N 5/00, опубл. 1984).

Недостатком известной вакцины является неочищенность хламидийного антигена от компонентов желточной оболочки куриных эмбрионов, низкая концентрация антигена в вакцине и, как следствие этого, недостаточная иммуногенная активность вакцины. Кроме того, вакцина характеризуется сложной технологией изготовления.

Задачей изобретения является разработка эффективной вакцины, обеспечивающей создание длительного напряженного иммунитета у крупного рогатого скота, свиней, овец, коз и пушных зверей против хламидиоза.

Технический результат изобретения заключается в повышении иммуногенной активности вакцины и упрощении технологии изготовления.

Сущность изобретения заключается в том, что в составе вакцины использован высокоиммуногенный штамм Chlamydia pSittaci К-8-К ВИЭВ, адаптированный к культивированию на перевиваемой клеточной линии почки сайги (ПС). Штамм способен без дополнительных приемов накапливаться в более высоких титрах (10^8,5-9,0 ЭЛД_50/0,2мл), чем при культивировании в куриных эмбрионах. Получаемый антиген свободен от балластных белков, не требует дополнительной очистки и концентрирования.

Штамм Chlamydia pSittaci К-8-К ВИЭВ получен путем адаптации родительского штамма Chlamydia psittaci К-8 ВИЭВ к культивированию на перевиваемой клеточной линии ПС и прошедший на ней более 120 пассажей.

Штамм Clamydia pSittaci К-8-К ВИЭВ депонирован в коллекции Всероссийского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко.

Штамм Chlamydia pSittaci К-8-К ВИЭВ характеризуется следующими свойствами:
Культурально-морфологические свойства: культивируется в перевиваемой линии клеток ПС, в которых накапливается в титре 10^8,5 ЭЛД_50/0,2мл после 7-10 сут культивирования. Вызывает характерное цитопатогенное действие на клетки указанной линии на третьи сут после первичного инфицирования и персистентную инфекцию при последующих пересевах инфицированных клеток. Элементарные тельца кокковидной формы окрашиваются по методу Романовского-Гимза в темно-синий цвет и располагаются в цитоплазме клеток или вне их отдельно или в виде скоплений.

Штамм Chlamydia pSittaci К-8-К ВИЭВ вызывает гибель развивающихся куриных эмбрионов на 5-10 сут при заражении их в желточный мешок. Вызывает заболевание на 3-и сут и гибель на 5-6 сут белых мышей при внутрибрюшинном инфицировании, а также вызывает заболевание и гибель морских свинок при интраназальном и внутрибрюшинном заражении на 14-16 сут.

В предложенной вакцине антиген из штамма Chlamydia pSittaci К-8-К ВИЭВ содержится в виде хламидиосодержащей культуральной жидкости с титром 10^8,5-9,0 ЭЛД_50/0,2мл, взятой в эффективном количестве. В состав вакцины входят также инактиватор и адъювант.

Из инактиваторов используют, например формалин, а из адъювантов легкое минеральное масло и безводный ланолин или аэросил и сапонин. Соотношение инактивированного антигена и смеси минерального масла с ланолином составляет 1:1.

Вакцину применяют как с профилактической, так и лечебной целями в неблагополучных по хламидиозу хозяйствах однократно подкожно: крупному рогатому скоту в область средней трети шеи в дозе 3 мл, телятам 2 мл, свиньям подкожно за ухом 2 мл, подсвинкам 1 мл, овцам и козам пераректально 1 мл, ягнятам и козлятам с 3-х месячного возраста 0,5 мл, песцам с внутренней стороны бедра 0,5 мл, норкам 0, 25 мл.

Пример 1. Для изготовления вакцины берут штамм Ch. pSittaci К-8-К ВИЭВ. Культивирование проводят в культуре перевиваемой линии клеток ПС-ФГМ-10.

Персистентно инфицированные хламидиями клетки указанной линии высевают стационарно в концентрации 150-200 тыс. в 1 мл среды, содержащей в своем составе 0,06% ферментативного гидролизата мышечных белков (ФГМС) и 10% сыворотки крупного рогатого скота. Инкубируют при температуре 37^oC в течение 7-12 сут.

По истечении срока культивирования культуральную жидкость сливают и после предварительной титрации на куриных эмбрионах или клетках гомологичного клона инактивируют формалином при 37^oC в течение 3-х сут.

Для изготовления 1 л вакцины берут: культуральную жидкость, содержащую хламидии в титре 10^8,5 ЭЛД_50/0,2мл в количестве 496 мл, формалин 4 мл, легкое минеральное масло 450 мл и ланолин безводный 50 мл.

Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 7000 об/мин в течение 5-7 мин.

Полученную вакцину апробировали на коровах. Эффективность вакцины составляет 99%
Пример 2. Для изготовления вакцины штамм Cl. pSittaci К-8-К ВИЭВ культивируют на перевиваемой клеточной линии клеток ПС-ГЛА-10. При этом персистентно инфицированные хламидиями клетки ПС высевают во флаконы в концентрации 200-250 тыс. в 1 мл среды, содержащей 0,5% гидролизата лактальбумина и 7-10% сыворотки крупного рогатого скота. Инкубирование проводят на роллерной установке при скорости вращения флаконов 5 об/мин, при температуре 37^oC в течение 7-10 сут. По истечении срока культивирования культуральную жидкость сливают и после предварительной титрации на куриных эмбрионах или клетках гомологичного клона инактивируют формалином при 37^oC в течение 3-х сут.

Для изготовления 1 л вакцины берут: культуральную жидкость, содержащую хламидии в титре 10^9,0 ЭЛД_50/0,2мл в количестве 496 мл, формалин 4 мл, легкое минеральное масло 435 мл, ланолин безводный 65 мл.

Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 7000 об/мин в течение 5-7 мин.

Полученную вакцину апробировали на суягных овцах, норках и свиньях. Эффективность вакцины составила 96-98%
Пример 3. Для изготовления вакцины штамм Ch. pSittaci К-8-К ВИЭВ культивируют на перевиваемой клеточной линии ПС-ФГМ-10. При этом персистентно инфицированные хламидиями клетки ПС высевают стационарно в концентрации 150-200 тыс. в 1 мл среды ФГМС, обогащенной 10%-ной сывороткой крупного рогатого скота и инкубируют в течение 7-12 сут.

По истечении срока культивирования культуральную жидкость сливают и после титрации на куриных эмбрионах или клетках гомологичного клона инактивируют формалином.

Для изготовления 1 л вакцины берут: культуральную жидкость, содержащую хламидии в титре 10^8,5 ЭЛД_50-0,2мл в количестве 975,5 мл, формалин 4 мл, аэросил (А-300) 20 мл, сапонин 0,5 мл.

Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 3000 об/мин в течение 2-3 мин.

Полученную вакцину апробировали на крупном рогатом скоте, овцах, свиньях и норках. Эффективность вакцины составляет 96-98%

Использование: биотехнология, ветеринарная микробиология, вакцина для профилактики и лечения хламидийных инфекций сельскохозяйственных животных и пушных зверей. Сущность изобретения: в составе вакцины использован высокоиммуногенный штамм Chlamydia pSittaci К-8-К ВИЭВ в титре 10^8,5-9,0 ЭЛД_50/0,2мл в эффективном количестве. В качестве адъюванта вакцина может содержать легкое минеральное масло и безводный ланолин в соотношении 87: 13-90: 10, или аэросил и сапонин. Из инактиваторов она содержит формалин. Используемый штамм адаптирован к культивированию на перевиваемой клеточной линии почки сайги. Штамм способен без дополнительных приемов накапливаться в более высоких титрах, чем при культивировании в куриных эмбрионах. Получаемый антиген свободен от балластных белков, не требует дополнительной очистки и концентрирования. 2 з.п. ф-лы.

1. Вакцина для профилактики и лечения хламидиоза сельскохозяйственных животных и пушных зверей, содержащая антиген хламидий, инактиватор и адъювант, отличающаяся тем, что в качестве антигена хламидий она содержит культуральную жидкость с хламидиями штамма Chlamydia psittaci К-8-К ВИЭВ в титре 10^8,5-9,0 ЭЛД_50/0,2мл в эффективном количестве. 2. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве адъюванта она содержит легкое минеральное масло и безводный ланолин в соотношении 87 13 - 90 10 или аэросил и сапонин. 3. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что из инактиваторов она содержит формалин.