Вакцина для профилактики респираторных заболеваний крупного рогатого скота Советский патент 1993 года по МПК A61K39/118 A61K39/12 

со

с

Использование: биотехнология, ветеринарная вирусология, Сущность изобретения: вакцина включает антиген вируса инфекционного ринотрахеита из штамма ТК-А(ВИЭВ) В-2, антиген вируса диарреи- болезни слизистых из штамма ВК-1(В-1) Ns 28, хламидийный антиген из штамма К 8, формалин, минеральное масло, безводный ланолин и забуференный физиологический раствор при определенном соотношении компонентов.

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и бактериологии, в частности к получению вакцин для специфической профилактики респираторных болезней крупного рогатого скота, а также для профилактики нарушений репродуктивной функции коров, обусловленных вирусами инфекционного ринотрахеита, вирусной диа-; реи-болезни слизистых и хламидиями.

Эти три инфекции довольно широко распространены среди животных нашей страны и во многих других странах мира, наносят значительный экономический ущерб, складывающийся из-за недополучения приплода, низких привесов, отхода молодняка за счет гибели или выбраковки животных, низкой оплодотворяемости коров..

Цель изобретения - расширение спектра действия вакцины.

Поставленная цель достигнута тем, что вакцина дополнительно содержит антиген вируса инфекционного ринотрахеита из штамма Herpesvlrus bbvlnus 1 ТК-А (ВИЭВ) В-2 с активностью 1055-1075 ТЦДзо/мл в 0,5%-ом растворе гидролизата лактальбу- мина на растворе Хенкса и антиген вируса диареи-болезни слизистых из штамма V.dlarro e- mu cosa disease bovlnum BK-1 (В-1) № 28 с активностью 105 °-106;5 ТЦДзо/мл в 0,5%-ом растворе гидролизата лактальбумина на растворе Хенкса и забуференный физиологический раствор.

Предложенную вакцину готовят следующим образом.

Производственный вакцинный штамм вируса инфекционного ринотрахеита Herpesvirus bovlnus 1 ТК-А (ВИЭВ) В-2 размножают в первично трипсинизировзнных культурах клеток почки теленка (ПТ), или те- стикулов бычков (ТБ), или их субкультурах,

VI

00 О N

Ю

можно использовать перевиваемые клеточные линии МДВК, ЛЭК, ТР. Заражение культур проводят вируссодержащей культуральной жидкостью в дозе 1-5 ТЦД/клетка. Зараженные культуры при стационарном или роллер- ном культивировании инкубируют при 37-37,5°С в течение 24-72 ч, затем вируссо- держащую культуральную жидкость собирают в количестве не менее 1600-1700 мл для изготовления 1 л вакцины, инактивируют формалином в конечной концентрации 0.2-0.3% в течение 46-48 ч при 37-37,5°С при периодическом перемешивании. Далее в вируссодёржащую культуральную жидкость с формалином добавляют ПЭГ 60,00 из расчета 8-9% и NaCI 2,5-2,8%, все тщательно перемешивают до полного растворения ПЭГ, оставляют при 4-8°С в течение 18-24 ч, далее подвергают центрифугированию при 8-10 тыс.об./мин, Осадок ресуспен- дируют в забуференном физиологическом растворе с 0,18-0,2% формалина в соотношении 1:10-1;12.

Производственный штамм вируса диареи-болезни слизистых V.dlarrue-mucosal disease bovinum KB-1 (B-1) № 28 размножают в первично трипсинизированной культуре клеток ПТ или ее субкультуре. Заражение проводят вируссодержащей культуральной жидкостью в дозе 5-10 ТЦД/клеток. Зараженные культуры при стационарном или роллерном культивировании инкубируют при 37,0-37,5°С в течение 72-120 ч. Вируссодёржащую культуральную жидкость собирают в количестве не менее 1600-1700 мл для изготовления 1 л вакцины, Далее в отношении инактивации и концентрирования антигена вируса ВД-БС поступают также, как с антигеном вируса ИРТ.

Производственный, вакцинный штамм Chlamldta abortus ovfs К-8 ВИЭВ.размножают в развивающихся куриных эмбрионах 5- 7-дневного возраста. Заражение проводят суспензией хламидий с инфекционной активностью 102-5-103|5ЭЛД5о/мл в дозе 0,2 мл . в желточный мешок. Зараженные куриные эмбрионы инкубируют при Зб,0-37°С в течение 5-9 дней, после этого содержимое эмб- рионов, кроме погибших зародышей, собирают не менее чем из 400 шт на 1 л вакцины, добавляют эабуференкый физиологический раствор рН 7,2-7,4 в соотношении 1:1 и размельчают в гомогенизаторе при 2500-3000 об./мин в течение 10-15 мин. Затем смесь подвергают центрифугированию при 4-5°С на центрифуге марки ОТР- 10.1 К при пропускной способности сопла (диаметр сопла 3 миллиметра) не более 120 л в час и давления не более 0,05-0,15 атм. Над- осадочную жидкость собирают, осадок снимают со стенок ротора и уничтожают. Над- осадочную жидкость вторично центрифугируют на центрифуге этой же марки, но при пропускной способности еопла (диаметр сопла 2 мм) не более 90 л в час и давлении не более 0,05-0,15 атм. Центрифугат удаляют, осадок хламидий снимают со стенок ротора центрифуги металлической лопаткой и ре- суспендируют в забуференном физиологичетком растворе в соотношении 1:(12-15). В суспензию хламидий добавляют формалин до конечной концентрации 0,38-0,42% и выдерживают в течение 96 ч при 36-37°С, периодически встряхивая 2-3 раза в сутки.

5 Концентрированные антигены вирусов ИРТ, ВД-БС и хламидий берут в соотношении 1;1:1, помещают в одну емкость (реактор). Содержимое тщательно перемешивают и охлаждают до 10-15°С. К смеси добавляют

0 стерильный масляный адъювэнт, состоящий из 80-83% минерального масла и 17-20% ланолина, предварительно охлажденный до 10-15°С. На одну часть смеси антигенов добавляют одну часть масляного адъгованта.

5 Смесь антигенов с масляным адъюван- том эмульгируют, пропуская через коллоидную мельницу при зазоре 00 между трущимися поверхностями м давлением 0,4-0,6 кг/см2 до получения гомогенной

0 массы, которую используют в качестве готовой вакцины.

Концентрирование антигенов указанными методами достигается в 80-100 раз. Контроль инактивации всех антигенов

5 проводят путем слепых пассажей (3 пассажа) в соответствующих тест-системах, разводя предварительно антигены 1 :100. Если в 3-м пассаже отсутствует ЦПД или нет гибели эмбрионов, значитматериал инактиви0 рован полностю.

Конкретные примеры осуществления способа изготовления предложенной вакцины представлены е табл. 1.

Вакцина, изготовленная таким обр а5 зом, обеспечивает создание иммунитета у 95-97% животных.

Конкретные примеры на способ профилактики даны в табл. 2.

Предложенная вакцина апробирована в

0 экспериментальных и производственных условиях в 1986-1989 гг.

Предложенная ёпервые поливалентная инактивированная вакцина обеспечивает напряженный иммунитет против трех ин5 фекций: инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи-болезни слизистых и хламидиоза крупного рогатого скота. Вакцина безвредна, применение ее по сравнению с моновакцинами снижает в несколько раз число вакцинаций и связанных с ними

стрессовых явлений у животных. Путем вакцинации стельных коров достигается создание напряженного иммунитета у матерей и передача его через молозиво телятам. Применение вакцины сокращает расходы на транспортировку и ее хранение.

Формула изобретения Вакцина для профилактики респираторных заболеваний крупного рогатого скота, включающая антиген хламидий из штамма Chlamidla abortus bovls K-8 ВИЭВ с активностью 106 5-Ю7 5 ЭЛДэд/мл, формалин, безводный ланолин и минеральное масло, отличающаяся , с целью расширения спектра действия вакцина дополнительно содержит антиген вируса инфекционного ринотрахеита из штамма Herpes virus bovlnus 1 Т К-А (ВИЭВ) В-2 с активностью. 105 5-107 5 ТЦДте/мл в 0,5%- ном растворе гидролизата лактальбумина на растворе Хенкса и антиген вируса диар- реи - болезни слизистых из штамма V.diarrhoe mucosal disease bovlnurn BK-1 (B-1) N: 28 с активностью 10 -10 ТЦДбО/мл в 0,5%-ном растворе гидролизата

Примеры изготовления предлагаемой мкцины

Вакцине найдет применение в крупных животноводческих комплексах и фермерских хозяйствах страны, что будет способст- вовать повышению продуктивности поголовья и увеличению продукции отрасли.

лактальбумина на растворе Хенкса и забу- ференный физиологический раствор при следующем соотношении компонентов, мл : антиген вируса инфекционного ринотрахеита из штамма Herpes virus bovlnus 1ТК-А(ВИЭВ) В-2 с активностью 10 - 107 5ТЦД50/мл15,7-16,6;

антиген вируса диарреи-болезни слизистых из штамма V.dlarrhoe-mucosal disease bovinum BK-1 (B-1) № 28 с актив- ,ностью 105 °-106 5 ТЦД50/МЛ 16,7-16.6;

антиген хламидий из штамма Chlamtdla abortus bovls K-8 ВИЭВ с активностью 106-5-10 -° ЭЛД50/Мл 15,7-1.6.6

формалин1,9-1,17 минеральное масло 400- 440 безоводный ланолин 90-100 зэбуференный физиологический раствор до 1 л.

Таблиц 1

71789219 8 ..-..- .- ...... : Та б л и ц а 2

Примеры осуществления способа профилактики ИРТ, ВД-БС и хламидиоза