СПОСОБ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ РЕЦИДИВОВ ОСТРОГО ЛИМФОБЛАСТНОГО ЛЕЙКОЗА У ДЕТЕЙ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к клинической онкогематологии, а именно к диагностике декомпенсации и приближения надвигающегося рецидива при остром лимфобластном лейкозе у детей.

Анализ предложенных ранее методов оценки резидуальной лейкозной популяции, таких как простые и доступные биохимические методы определения терминальной дезоксинуклеотидилтрансферазы (Smith R. Kitchens R.L. "Phanotypic heterogenity of TdT⁺ cells in the blood bone marrow; implications for surveillanse of residual leukemia". Blood. 1989, vol. 74, N 1, p. 312 319, USA), определение инсулинингибирующей активности (Рагялене Л. Матулявичюс В. Инсулиндеградирующая и инсулинингибирующая активность у больных острым лейкозом. Тезисы докладов Всесоюзн. семинара "Совершенствование диагностики и программ лечения онкогематологических заболеваний у детей". М. ВОНЦ: 1990, с. 32 33), в клетках крови, а также такие трудоемкие и дорогостоящие "следящие системы", как определение различных параметров массы ДНК (Pakkala S. Helminen P. Saarinen U.M. "Differenses in DNA - fingerprints between remission relaps in childhood acute lymphoblastic leukemia", Leukemia Research, 1988, vol. 12, N 9, p. 757 762, USA) показывает, что многие из них нуждаются в сложном техническом оснащении, имеют невысокую информативность, а следовательно, поиск ранней объективной диагностики резидуальной лейкозной популяции на сегодня актуален.

За последние 5 лет пристальное внимание исследователей, работающих в области онкологии, привлекает метод серебрения ядрышковых организаторов. Этот метод хорошо зарекомендовал себя для оценки степени тяжести некоторых злокачественных заболеваний (Крокер Д.Ж. "Показатели клеточной пролиферации при злокачественных лимфомах при особом рассмотрении ядрышкообразующих районов", Гематология и трансфузиология, 1990, N 11, с. 28 33) и прогноза острого лимфобластного лейкоза у детей (Иконникова О.А. "Диагностические возможности анализа ультраструктуры лейкозных клеток и активности ядрышковых организаторов при острых лейкозах у детей". Диссертация. М. 1990).

Цель изобретения объективная диагностика ранних признаков надвигающегося рецидива острого лимфобластного лейкоза в стадии ремиссии на доклиническом уровне.

Эта цель достигается тем, что методом серебрения ядрышковых организаторов исследуют лимфоидные клетки костного мозга у детей в разные сроки ремиссии острого лейкоза и при выявлении гипергранулярных клеток диагностируют раннюю стадию обострения заболевания.

На фиг. 1 представлен лимфоцит костного мозга с обычной, низкой, характерной для лимфоцита активностью ядрышковых организаторов (2 на клеточное ядро); на фиг. 2 лимфоидная клетка костного мозга с гипергранулярным характером отложения серебра (около 15 ядрышковых организаторов на ядро); на фиг. 3 одна лимфоидная клетка небольшого размера с невысокой активностью ядрышковых организаторов (4 на клеточное ядро), другая клетка крупного размера с гипергранулярным характером отложения серебра (более 15 ядрышковых организаторов на клеточное ядро).

Пример 1.

Саша С. 11,5 лет, история болезни 13120, находился в 14 отделении 1 ДКБ с клиническим диагнозом: острый лимфобластный лейкоз.

Анамнез заболевания.

Мальчик болен с декабря 1984 г. когда после перенесенного ОРВИ появились первые симптомы заболевания в виде снижения аппетита, вялости, бледности кожных покровов, появлении геморрагического синдрома. В гемограмме Hb 50 г/л, лейкоциты 25•10⁹/л.

Анамнез жизни.

Мальчик от II беременности, протекавшей физиологически. Роды II срочные. Раннее психосоматическое развитие без особенностей. В стационаре при помощи традиционных иммуно-цитологических исследований поставлен диагноз: острый лимфобластный лейкоз ниТ-вариант. Индукционная терапия проводилась по схеме: преднизолон, винкристин, рубомицин; интратекальным введением метотрексата и цитозара проводилась профилактика нейролейкоза. Через 2 мес была достигнута клинико-гематологическая ремиссия.

Проведенные исследования в 1 остром периоде: анализ крови: Hb 46 г/л, эритроциты 1,5•10¹²/л, Ц.П. 0,9; лейкоциты 261,0•10⁹/л, бластные клетки 97% В миелограмме: лимфобласты 92%
Изучение активности ядрышковых организаторов проводилось за 1,5 г до регистрации рецидива и составило для лимфоидных клеток костного мозга 5 ядрышковых организаторов на ядро, для клеток периферической крови 2,3 ядрышковых организатора на ядро, гипергранулярные клетки костного мозга составили 12% клеточного состава.

Заключение: на момент исследования у ребенка документирована клинико-гематологическая ремиссия. Анализ активности ядрышковых организаторов клеток костного мозга проводился ретроспективно.

Пример 2.

Маша Р. 7,5 лет, история болезни N 35373, находилась в 14 отделении ДКБ N 1 с клиническим диагнозом: острый лимфобластный лейкоз, 1 острый период.

Анамнез заболевания.

Девочка больна с июля 1988 года, когда появилась слабость, повышенная утомляемость, снижение аппетита. В анализе крови выявлены: анемия, тромбоцитопения, бластные клетки, ускорение СОЭ.

Анамнез жизни.

Ребенок от 1 физиологически протекавшей беременности, 1 строчных родов. Масса при рождении 3500, длина 52 см. Раннее психическое и физическое развитие без особенностей.

При поступлении в стационар симптомы интоксикации, анемический синдром, умеренная лимфоаденопатия, увеличение печени до +6,0 см.

Данные лабораторных исследований.

1. Общий анализ крови Hb 77 г/л, эр. 2,5•10¹²/л, Ц.П. 0,92, Л 1,0•10⁹/л, миелоциты 1, п/я 1, лимфоциты 30, мон. 2, тромбоциты 7,5•10⁹/л, бласты 5% СОЭ 69 мм/ч.

2. Миелограмма. Тотальная бластная метаплазия костного мозга, лимфобласты 94,4% Цитохимическое исследование бластных клеток костного мозга позволило подтвердить диагноз: острый лимфобластный лейкоз, ниТ-ниВ-клеточный вариант.

Индукционная терапия проводилась по схеме: преднизолон, винкристин, рубомицин; консолидация преднизолон, L-аспарагиназа, цитозар; 2 курса ВАМП-терапии. Химиопрофилактика нейролейкоза введение метотрексата и цитозара. Через 2 мес была достигнута клинико-гематологическая ремиссия. Амбулаторно девочка получала поддерживающую терапию 6-Меркаптопурин, метотрексат, циклофосфан, курсы реиндукции проводились по схеме: преднизолон, винкристин. От лучевой профилактики нейролейкоза родители отказались.

Изучение активности ядрышковых организаторов проводилось за 3 мес до надвигающегося рецидива заболевания и составило для лимфоидных клеток костного мозга 4,8 ядрышковых организаторов на ядро, для клеток периферической крови 2,7 ядрышковых организатора на ядро, гипергранулярные клетки костного мозга составили 8% клеточного состава.

Заключение:
У ребенка имеет место клинико-гематологическая ремиссия, оценка полученных результатов исследования активности ядрышкового организатора проводилась ретроспективно.

Пример 3.

Дима Е. 5 лет, история болезни 30440, 14 отд. ДКБ N1. Клинический диагноз: острый лимфобластный лейкоз.

Анамнез заболевания.

Болен с ноября 1987 г. когда отмечалось появление резкой бледности кожных покровов, вялости, слабости. В анализе крови анемия, лимфоцитоз 91% СОЭ 80 мм/ч.

Анамнез жизни.

Ребенок от I беременности, роды I, в срок. Масса при рождении 3200, длина 51 см. Раннее физическое развитие без особенностей.

Клиническая картина: симптом интоксикации, резкая бледность кожных покровов, увеличение печени на 3 см, селезенки на 7 см.

Лабораторное обследование:
1. В крови: Hb 80 г/л, тромбоциты 15000, лейкоциты 3,3•10⁹/л, бласты 12% лимфоциты 53% СОЭ 12 мм/ч.

Миелограмма: лимфобластные клетки 58% лимфоциты 40% мегакариоциты в костном мозге не обнаружены.

В результаты комплексного цитологического исследования поставлен диагноз: острый лимфобластный лейкоз, неТ-клеточный вариант.

Лечение проводилось по общепринятым схемам полихимиотерапии. Через 3 мес достигнута клинико-гематологическая ремиссия, поддерживающую терапию получал абмулаторно. Изучение активности ядрышковых организаторов в лимфоидных клетках костного мозга проводилось за 1 мес до наступления рецидива заболевания. Количество ядрышковых организаторов в клетках костного мозга составило 4,6 на ядро, в периферической крови 3,5 на ядро. Гипергранулярный характер отложения продукта реакции серебрения ядрышковых организаторов отмечался в 9,4% лимфоидных клеток костного мозга.

Обобщенные результаты исследования представлены в таблице.

Способ прошел проверку на клинической базе Российского государственного медицинского университета им. Н.И. Пирогова на базе ДКБ N 1.

Предлагаемый способ диагностики, основанный на методе серебрения ядрышковых организаторов, по существу впервые позволяет, что особенно важно в клинике лейкозов, выявить начальные признаки декомпенсации лейкозного процесса в стадии ремиссии лейкоза задолго до клинических проявлений. Метод серебрения ядрышковых организаторов впервые был использован для оценки пула лимфоидных клеток костного мозга в ремиссии острого лимфобластного лейкоза. С другой стороны, данный цитохимический метод позволяет выявить клетки с чрезвычайно высоким (для лимфоцитов) уровнем метаболической активности, что в отсутствии клинических проявлений и морфологических маркеров бласттрансформации может указывать на появление в костном мозгу популяции высоко активных клеток, что в свою очередь должно настораживать клинициста в плане коррекции поддерживающей терапии, укорочения временных промежутков диспансерного наблюдения и т.п.

До настоящего времени не найдено адекватных методов для наиболее раннего обнаружения остаточной популяции лейкозных клеток, хотя такие безуспешные попытки предпринимались постоянно, что было впервые выполнено в нашей работе.

Способ ранней диагностики рецидива острого лимфобластного лейкоза у детей решает важную научно-практическую и социальную задачу подбор адекватной программы лечения заболевания, а также прогнозировать и выявлять ранние цитологические признаки начинающейся декомпенсации ремиссионного состояния на доклиническом уровне. Своевременная коррекция терапевтических мероприятий позволяет более рационально использовать очень дефицитные и дорогостоящие препараты, как правило зарубежного производства, сокращать пребывание больных в стационаре, удлинять сроки ремиссии у детей, больных острым лимфобластным лейкозом.

Использование: в медицине, в частности в гематологии. Сущность изобретения: у больного исследуют клетки костного мозга методом серебрения ядрышковых организаторов и при выявлении среди лимфоидных клеток популяции гипергранулярных клеток с высокой активностью ядрышковых организаторов при отсутствии морфологически распознаваемых бластных форм диагностируют раннюю стадию обострения заболевания. 3 ил., 1 табл.

Способ ранней диагностики рецидивов острого лимфобластного лейкоза у детей путем цитологического исследования биологической жидкости, отличающийся тем, что исследуют лимфоидные клетки костного мозга больного методом серебрения ядрышковых организаторов и при выявлении гипергранулярных лимфоидных клеток с высокой активностью ядрышковых организаторов при отсутствии морфологически распознаваемых бластных форм диагностируют раннюю стадию обострения заболевания.