СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ЛЕЙКОЗА У ДЕТЕЙ Советский патент 1995 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения острого лейкоза у детей.

Цель изобретения - повышение точности и ускорение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

3 мл суточной мочи, профильтрованной через бумажный фильтр, помещают в ампулу с равным объемом 4 н. HCl, запаивают и выдерживают в сушильном шкафу при постоянной температуре 110^оС в течение 3 ч. Затем остывшую ампулу вскрывают, содержимое переливают в стеклянный бюкс, доводят рН мочи до 9,8 раствором едкого натра, добавляют 2 г солевой смеси (62,5 г Na₂SO₄ и 9 г Na₃PO₄) и 5 мл н-бутилового спирта. Бюкс закрывают и ставят на шюттель-аппарат для встряхивания в течение 2 ч, после чего содержимое бюкса переливают в пробирку и центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин. Бутаноловую фракцию отсасывают с помощью шприца и переносят в фарфоровую чашку, добавляют 2 капли 6 н HCl и выпаривают на водяной бане. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл 0,1 н. HCl, 20 мкл этого раствора наносят на полоску хроматографической бумаги, помещенной в прибор для электрофореза. Электрофорез проводят в лимонно-кислом буфере (рН 3,6) при напряжении 480 В и силе тока 50 мА в течение 45 мин. Высушенные в течение 45 мин при 70^о фореграммы орошают нингидриновым красителем (100 мг ацетата кадмия растворяют в 10 мл дистиллированной воды, добавляют 100 мл ацетона, 1 г нингидрина, 5 мл концентрированной уксусной кислоты), вновь высушивают. Полиамины обнаруживают в виде розовато-фиолетовых пятен, которые вырезают и помещают в химические пробирки, заливают 5 мл элюирующего раствора (500 мг ацетата кадмия растворяют в 25 мл дистиллированной воды, добавляют 100 мл этилового спирта и 125 мл концентрированной уксусной кислоты). После выдерживания в течение 25 мин в темноте измеряют величину поглощения растворов на спектрофотометре при длине волны 505 нм или ФЭКе при зеленом фильтре. Содержание полиаминов рассчитывают по калибровочной кривой, построенной с использованием стандартных полиаминов (спермина, спермидина и путресцина). Количество индивидуальных полиаминов, выраженное в микромолях в сутки, рассчитывают по формуле
X = где Х - количество полиаминов, выраженное в мкмоль/сут;
а - определенное по калибровочной кривой количество полиаминов (мкг) в 20 мкл раствора, взятого для электрофореза;
10 - коэффициент пересчета на общий объем экстрагированных полиаминов (сухой остаток растворяется в 200 мкл, а наносится на электрофореграмму 20 мкл);
А - суточный объем мочи, мл;
3 - количество мочи, взятое для анализа;
М - молекулярная масса полиаминов.

Выявлена взаимосвязь течения острого лейкоза у детей и экскреции полиаминов с мочой до начала курса химиотерапии: при содержании полиаминов менее 49,1 мкмоль/сут и менее определяют относительно благоприятное течение заболевания, а при значении 81,06 мкмоль/сут и более - неблагоприятное.

П р и м е р 1. Больной П.Н., 6 лет, диагноз: острый лимфобластный лейкоз, рецидив по типу нейролейкоза.

При поступлении в гематологическую клинику состояние ребенка было удовлетворительным. Отмечалось увеличение размеров печени на 2 см из-под края реберной дуги, подмышечные лимфоузлы пальпировались размером 1х1,5 см². В пунктате костного мозга выявлено 5% бластных элементов, в спинно-мозговой жидкости 200 клеток в 1 мм³. Уровень полиаминов в моче составлял 49,1 мкмоль/сут, что позволяет прогнозировать относительно благоприятное течение заболевания.

Проведено лечение по схеме ВПР + цитозар и метотрексат эндолюмбально. По окончании курса химиотерапии отмечалась полная клинико-гематологическая ремиссия. Продолжительность жизни больного после проведенного лечения составила 24 мес.

П р и м е р 2. Больной Ч.А., 4 лет, диагноз: острый лимфобластный лейкоз.

При поступлении в гематологическую клинику состояние удовлетворительное. Отмечалось увеличение размеров шейных лимфоузлов 0,5х0,8 см². В пунктате костного мозга отмечалось 25% бластных элементов. Уровень полиаминов мочи составлял 81,06 мкмоль/сут, что позволило прогнозировать неблагоприятное течение заболевания.

Проведено лечение по схеме ВПР, по окончании которого у больного наступила клинико-гематологическая ремиссия, подтвержденная исследованиями пунктата костного мозга. Однако длительность ее была 8 мес., наступил тяжелый рецидив, терапия которого не привела к становлению ремиссии. В дальнейшем у ребенка отмечались рецидивы заболевания через каждые 2-3 мес. Продолжительность жизни больного с момента постановки диагноза была 18 мес.

П р и м е р 3. Больная Д.Е., 9 лет. При поступлении в гематологическую клинику состояние ребенка было средней тяжести. Наблюдались кровоизлияния на теле, лейкемическая инфильтрация десен, геморрагические и гнойные налеты на миндалинах, гематомы в местах инъекций. Периферические лимфоузлы и селезенка не были увеличены, нижний край печени выступал из-под края реберной дуги на 2 см. В гемограмме отмечалось наличие бластных клеток до 50%, число лейкоцитов составило 135х10⁹/л, тромбоцитов 50х10⁹/л, эритроцитов 3˙10¹²/л, гемоглобин 93 г/л. В пунктате костного мозга наблюдалось 70% бластных элементов.

На основании клинико-гематологических и морфологических данных поставлен диагноз острого миеломоноцитарного лейкоза.

Общий уровень полиаминов до начала курса лечения составлял 105,8 мкмоль/сут, на основании чего прогнозировано неблагоприятное течение заболевания.

Индукция ремиссии проводилась по схеме цитозар + рубомицин. Летальный исход заболевания наступил на 20-е сутки после поступления в клинику.

Использование способа в медицинской практике обеспечивает раннее прогнозирование течения заболевания у детей, повышает точность прогноза относительно благоприятного и неблагоприятного течения до 100%, что позволяет более дифференцированно решать вопрос о тактике лечения. Это, в свою очередь, обеспечит увеличение процента развития ремиссии и удлинение сроков выживаемости больных острым лейкозом детей.

Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии. Цель изобретения - повышение точности способа. Для этого в суточной моче больного острым лейкозом определяют содержание полиаминов и при значении этого показателя 49,1 мкмоль/сут и менее определяют благоприятное течение заболевания, а при значении 81,06 мкмоль/сут и более - неблагоприятное. Определение полиаминов проводят электрофоретически с последующим измерением количества на спектрофотометре при длине волны 505 нм или фотоэлектрокалориметре при зеленом фильтре. Применение способа в медицинской практике позволит в ранние сроки с точностью до 100% в течение 9 ч прогнозировать течение острого лейкоза у детей, что необходимо для определения тактики лечения.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТЕЧЕНИЯ ОСТРОГО ЛЕЙКОЗА У ДЕТЕЙ, включающий клинико-лабораторные исследования, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и ускорения способа, до начала лечения в суточной моче больного определяют содержание полиаминов и при значении этого показателя 49,1 мкмоль/сут и менее определяют относительно благоприятное течение, а при значении 81,06 мкмоль/сут и более - неблагоприятное течение острого лейкоза у детей.