Способ прогнозирования рецидивов острого лимфобластного лейкоза Советский патент 1990 года по МПК G01N33/53 

Изобретение относится к разделу медицины, в частности гематологии, и касается вопроса ранней доморфоло- гической иммунологической диагностик

ки рецидивов острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ).

; Цель изобретения - повышение точности, ранней диагностики рецидива за

болевания до появления его клинико- морфологических признаков.

Способ осуществляют следующим образом,

В острой фазе заболевания с помощью разработанной панели МКА выян- ляют дифференцировочные антигены, характерные для лимфобластов каждо- ;ГО больного, в реакции непрямой им- мунофлюоресценции. В периоде ремиссии 1C той же панелью МКА регулярно с ин- тервалом в 1-4 мес проводят исследо- :вание морфологически зрелых лимфо- цитов периферической крови. Появ- ;ление лимфоцитов, положительно реа- ;гирующих хотя бы с одним из приме- ;няемых МКА. в количествах, превышаю- :щих пределы их нормальных значений (М + 36), является предвестником начинающегося рецидива заболевания. )

Исследование антигенов лейкозных лимфобластов проводят в реакции непрямой иммунофлюоресценции в микролуночной модификации с использованием шести препаратов МКА, входящих в разработанную панель. Лейкозные лимфо- бласты получают после лизирования эритроцитов из 5-10 мл гепаринизи- рованной периферической крови или 1 мл костного мозга, взятых у больных в острой фазе заболевания. Суспензию доводят до концентрации 4 - 5 ИО клеток в 1 мл раствора Хэнка и прикрепляют к поверхности стекла микролунок с помощью поли-Ъ-лизина„ Клетки обрабатывают сначала указанными препаратами МКМ (по 20 мкл) пр ; инкубации в течение 30 мин при 40,, I а затем после двукратного отмывания микролунок раствором Хэнка на клетки наносят ФИТЦ-меченые козьи антитела против мышиного - глобулина (по 20 мкл), После инкубации при 4 С в течение 30 мин препараты двукратно отмывают раствором Хэнка и в микролунки вносят по 5 мкл 50%-ного ра створа глицерина. Препарать накрывают покровым стеклом и запаивают. Учет реакции проводят на люминесцентном микроскопе с контрольным просмотром клеток в фазо53ом контрасте. Дифф ренцировочные антигены лимфобластов определяют по наличию поверхностного свечения на клетках. Аналогичным образом с той же панелью МКА проводят исследование антигенов лимфоцитов, выделенных из периферической крови больных в периоде ремиссии с по

5

0

5

0

5

0

45

50

55

мощью градиентного центрифугирования. Исследования повторяют регулярно на всем протяжении ремиссии с интервалом в 1-4 мес.

Пример 1, Больной Б. 1 5 лет. Диагноз: острый лимфобластный лейкоз. Бластные клетки, выделенные из 5 мл гепаринизированной крови в остром периоде болезни и исследованные с разработанной панелью МКА, содержали антигены 1а, ИКО-1 1 , CALLA, ТЮ, Т9 (количество антиген положительных клеток составило 91,55 70,90 и 50% соответственно). Антиген Т6 на лим- фобластах больного не был выявлен. В момент констатации полной клинико- гематологической ремиссии, достигнутой через 2 мес, количество морфологически зрелых лимфоцитов крови, содержащих антигены laj, ИКО-1 1, CALLA, 165-19, Т10 соответствовало нормальным значениям. Однако через 1 мес в периоде полной клинико-гематологичес- кой ремиссии (при наличии в пунктате костного мозга 3% лимфобластов) при повторном исследовании лимфоцитов крови с той же панелью МКА бьшо обнаружено повышение количества клеток, имеющих антигены ИКО-11 (68%) Т10 (18%) при нормальном количестве лимфоцитов, содержащих антигены la, CALLA, Т6, Т9 Рецидив болезни был выявлен спустя 1,5 мес при морфологическом исследовании пунктата костного мозга (количество лимфобластов в нем составило 12,5% при последующем неуклонном прогрессировании заболевания) .

Пример 2. Больной Л„, 18 лет. Диагноз: острый лимфобластный лейкоз. Бластные клетки, выделенные из 5 мл гепаринизированной крови в остром периоде болезни, при исследовании -с разработанной панелью МКА содержали антигены la, ИКО-11 (количество антиген-положительных клеток составило 70 и 85% соответственно). Антигены CALLA, Т6, 19, Т10 на лимфо- бластах больного не были выявлены. Через 1 мес после констатации полной клинико-гематологической ремиссии (при наличии в пунктате костного мозга 4% лимфобластов) при исследовании морфологически зрелых лимфоцитов крови- с той же панелью МКА наряду с нормальным количеством клеток, содержа- шлх антигены 1а, CALLA, Тб, Т9 и Т10, выявлялась увеличенная популяция лям 1

фоцитов, содержащих антиген ИКО-11 (46%). Рецидив болезни был выявлен клинико-морфологическими исследованиями через 3 мес (количество бласт- ных клеток в периферической крови 80%).

Указанные примеры показывают, что использование известного способа не позволило бы прогнозировать рецидив заболевания. Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить точ ность иммунологического прогнозирования рецидивов ОЛЛ до появления его клинико-гематологических признаков за счет использования для диагностики не одного, а нескольких МКА, направленных к различным дифференциро- вочным антигенам, выявляемым на лей- козных лимфобластах.

Способ может быть применен практически у всех больных ОЛЛ, так как с помощью разработанной панели МКА лейкозные клетки распознают в подав89215

ляющем больпшнстве случаев (у 96% больных).

Формула изобретения

Способ прогнозирования рецидивов острого лимфобластного лейкоза путем выявления дифференцировочного тигена с помощью моноклональных антител на лейкозных лимфобластах в острый период и лимфоцитах в период ремиссии и при обнаружении этого антигена в период ремиссии в количест 5 вах, превышающих пределы их нормальных значений, прогнозируют рецидив заболевания, отличающийся тем, что, с целью повышения точности прогнозирования, для выявления ан20 тигенов используют комплекс специфических моноклональных антител, и при обнаружении одного или нескольких антигенов прогнозируют рецидив заболевания.

Изобретение относится к разделу медицины, в частности гематологии, и касается ранней доморфологической иммунологической диагностики рецидивов острого лимфобластного лейкоза (ОЛЛ). Цель изобретения - повышение точности ранней диагностики рецидива заболевания до появления его клинико-морфологических признаков. Способ выполняется следующим образом: в острой фазе заболевания с помощью панели моноклональных антител (МКА) выявляют дифференцировочные антигены, характерные для лимфобластов каждого больного, в реакции непрямой иммунофлуоресценции в микролуночной модификации разработана панель из МКА к антигенам: Т6, Т9, Т10, CALLA, Ia, ИКО-II . Лейкозные лимфобласты получают из периферической крови или костного мозга больных в острой фазе заболевания. Учет реакции проводят с помощью люминесцентного микроскопа с дополнительным просмотром препаратов в фазовом контрасте. Аналогичным образом с той же панелью МКА проводят исследование антигенов лимфоцитов, выделенных из периферической крови больных в периоде ремиссии. Исследования повторяют регулярно на всем протяжении ремиссии с интервалом 1-4 мес. Появление лимфоцитов, положительно реагирующих хотя бы с одним из применяемых МКА, в количествах, превышающих пределы их нормальных значений, являются предвестником начинающегося рецидива заболевания. Положительный эффект способа заключается в том, что предложенная панель МКА позволяет распознать лейкозные клетки 96% больных и проводить раннюю доморфологическую диагностику рецидивов заболевания в максимальном числе случаев по появлению на зрелых лимфоцитах любого из антигенов, характерных для лейкозных лимфобластов в остром периоде.