СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОФПРИГОДНОСТИ ЛИЦ К РАБОТЕ В УСЛОВИЯХ ПРОИЗВОДСТВА ПЕНОПОЛИУРЕТАНОВ НА ОСНОВЕ ИЗОЦИАНАТОВ Российский патент 1997 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к области медицины, в частности к гигиене труда, и может быть использовано для оценки профпригодности работника в условиях химического производства, в частности при производстве пенополиуретанов для лиц, уже работающих в условиях химического производства.

Известен способ определения профпригодности для лиц в условиях работы с повышенной вредностью (авт. свид. N 1392507, кл. 33/48, Б N 16.88). Способ состоит в том, что проводят электрофорез сыворотки крови в полиакриламидном геле с определением типа гаптоглобина и комплемента C₃ и по носительству генетических маркеров гаптоглобина 1 2 и компонент комплемента C₃ судят о профпригодности к работе в условиях химического производства.

Признаки аналога, совпадающие с существенными признаками заявляемого изобретения: производят исследование крови больного, определяют параметры крови больного и по их отклонению судят о профпригодности.

Известный указанный способ позволяет учитывать лишь общую генную склонность организма к аллергизации вообще, без учета конкретного вредоносного фактора, что дает большую ошибку при оценке профпригодности к условиям конкретного производства (ошибка 50 65%).

Известен способ специфический диагностики профессиональных аллергозов с проведением реакции клеток крови, в частности с определением реакции специфического лизиса лейкоцитов крови [1]
Способ состоит в том, что исследуемую кровь по 0,1 мл добавляют в две центрифужные пробирки, содержащие по 0,5 мл физиологического раствора. В одну из пробирок добавляют рабочую дозу химического аллергена. Пробирки инкубируют в течение 2 часов при T 37^oC. Затем разрушают эритроциты с помощью 3% -ного водного раствора уксусной кислоты. Подсчет абсолютного количества лейкоцитов ведут в счетной камере Горяева, подсчитывают коэффициент сенсибилизации организма к аллергену.

K_рслл показатель реакции лизиса (разрушения лейкоцитов) под действием аллергена;
Л абсолютное количество лейкоцитов в камере Горяева.

Профпригодным человеком в условиях работы химического производства считают при показателе K_рслл не выше 9,9 10%
Признаки аналога, совпадающие с признаками изобретения: воздействие водного раствора аллергена на капиллярную кровь; анализы крови с определением количества лизированных и нелизированных лейкоцитов.

Требуемый технический эффект не достигается в связи с тем, что учитывается только одна из фаз адаптации из механизмов иммунного ответа (реакция клеток крови на гаптен как клеток-мишеней для образующегося иммунного комплекса), что не отражает общую оценку здоровья, ведет к гипердиагностике и соответственно снижет точность оценки профпригодности (ошибка в оценке 18 - 15%).

Известен способ оценки функции фагоцитоза для анализа адаптационных возможностей организма (способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия. Методические рекомендации. Казань, 1979, с. 1 7). Способ принят нами за прототип. Способ состоит в следующем. Набирают капиллярную кровь в микропипетку в количестве 0,05 мл. Для проведения анализа крови предварительно готовят следующие реактивы:
1. Фосфатный буфер (pН 7,2). Раствор A. 13,509 г KH₂PO₄ или 13,801 г NaH₂PO₄•H₂O растворяют в 1 л физиологического раствора. Раствор Б. 17,82 г Na₂HPO₄•2H₂O или 35,82 г Na₂HPO₄•12H₂O растворяют в 1 л экологического раствора. Растворы А и Б смешивают в соотношении 1:3.

2. Раствор гепарина. Смешивают раствор гепарина и изотонического фосфатного буфера 1:49 1:50, получают раствор гепарина 100 ед.мл.

3. Раствор нитросинего тетразолия. К 2,0 2,2 мг порошка нитросинего тетразолия добавляют 0,025 0,03 мл. 96^o этилового спирта, затем 0,5 мл дистиллированной воды и 0,5 мл фосфатного буфера при двойной концентрации физиологического раствора. Получаем 0,2 0,22%-ный раствор нитросинего тетразолия в буферном растворе.

Перед взятием крови стенки микропипеток и лунки пластин для серологических реакций смачивают раствором гепарина. Кровь вносят в лунку, добавляют 0,025 мл изотонического фосфатного буфера и 0,025 мл 0,2%-ного раствора нитросинего тетразолия. Количество реактива с нитросиним тетразолием в изотонической буферной среде, необходимой для реакции, составляет 0,025 + 0,025 0,5 мл на 0,5 мл крови, т.е. в соотношении 1:1.

Производят анализ крови с определением количества лейкоцитов (нейтрофилов) с темно-синими отложениями диформазана восстановленной нерастворимой формы нитросинего тетразолия (НСТ). Показатель функциональной активности по фагоцитозу равен количеству позитивных клеток с четко видимыми отложениями диформазана к общему числу сосчитанных клеток.

Признак прототипа, совпадающий с существенными признаками изобретения: проведение анализа крови путем постановки реакции крови под действием 0,2 - 0,22%-ного раствора нитросинего тетразолия в среде фосфатного буфера при соотношении крови и базового раствора 1:1.

Требуемый технический результат, а именно повышение точности оценки профпригодности при использовании способа- прототипа не достигается, т.к. способ-прототип учитывает лишь неспецифическое действие вредоносных факторов производства, в частности бактериальную обсемененность, без учета реакции организма на одновременное воздействие как неспецифических вредоносных факторов, так и специфических (аллергенов, антигенов), что дает ошибку в оценке профпригодности 30 35%
Сущность изобретения состоит в решении задачи определения критериев, по которым в отношении каждого исследуемого лица можно с достаточной степенью точности (ошибка 6 8%) сделать суждение, может ли данное конкретное лицо работать в условиях химического производства либо оно может быть отнесено в так называемую группу риска, т.е. отклонениями состояния здоровья функционального, а не патологического характера, либо в группу больных с профзаболеваниями, т.е. профнепригоден.

Ошибка заявляемого способа в среднем 6 8% Достигаемый технический результат изобретения повышение точности оценки профпригодности в 1,7 3,1 раза по сравнению с прототипом, что позволит снизить вероятность возникновения профессиональных заболеваний.

Сущность заявляемого способа состоит в следующем.

Предварительно готовят следующие реактивы:
1. 0,2 0,22%-ный раствор нитросинего тетразолия на изотоническом фосфатном буфере, условно называемый базовым раствором. Изотонический фосфатный буфер (pH 7,2): раствор A 13,509 г KH₂PO₄ или 13,801 г NaH₂PO₄H₂O растворяют в 1 л физиологического раствора. Раствор Б-17,82 Na₂HPO₄2H₂O или 35,82 г Na₂HPO₄N12H₂O растворяют в 1 л физиологического раствора. Растворы А и Б смешивают в соотношении 1: 3. К 2,0 2,2 мг порошка нитросинего тетразолия добавляют 0,025 0,03 мл 96^o этилового спирта, 0,5 мл дистиллированной воды, 0,5 мл фосфатного буфера при двойной концентрации физиологического раствора.

2. Раствор гепарина. Смешивают раствор гепарина и изотонического фосфатного буфера 1:49 1:50, получают раствор гепарина 100 ед/мл.

3. Петролейный эфир смеси с дистиллированной водой в соотношении 1:33. К базовому раствору нитросинего тетразолия добавляют смесь петролейного эфира и дистиллированной воды в соотношении 1:0,7.

Готовят реактив для дополнительного анализа, для этого аллерген из ряда изоцианатов, например толуилендиизоцианат или дифенилметандизоцианат, предварительно растворяют в петролейном эфире в соотношении 1:60, а полученную аллергенно-эфирную смесь растворяют в дистиллированной воде в соотношении 1: 30 1:33 (3 части аллергенной смеси на 100 частей дистиллированной воды).

Для определения профпригодности у пациента берут капиллярную кровь в микропипетку и по 0: 1 мл вносят ее в 2 пробирки, предварительно протертые тампоном, смоченным гепарином.

В первую пробирку наливают базовый 0,2 0,22%-ный раствор нитросинего тетразолия с фосфатной буферной среде в количестве 0,065 мл и добавленной к нему эфирно-водной смеси (петролейный эфир и дистиллированная вода в соотношении 1: 33) в количестве 0,05 мл. Соотношение капиллярной крови, раствора нитросинего тетразолия и эфирной смеси 1:0,65 0,5.

Во вторую пробирку наливают также базовый 0,2 0,22%-ный раствор нитросинего тетразолия в фосфатной буферной среде в количестве 0,65 мл и добавляют 0,06% раствора аллергена в эфирно-водной среде в количестве 0,05 мл. Соотношение капиллярной крови к базовому раствору и раствору аллергена в эфирно-водной смеси 1:0,65 0,5.

Пробирки инкубируют в течение 90 95 мин при T 37 37,5^o, затем разрушают эритроциты крови 3% водным раствором уксусной кислоты.

Определяют показатель базовой функциональной активности лейкоцитов (нейтрофилов, моноцитов) в 1-й пробирке и показатель функциональной активности сенсибилизированных нелизированных лейкоцитов при дополнительном анализе крови при действии раствора аллергена во 2-й пробирке.

Проведение реакции лизиса лейкоцитов в среде нитросинего тетразолия позволяет одновременно учесть реакцию организма на воздействие неспецифических вредоносных факторов (вирусов, бактерий, физических факторов) и специфических, химических факторов (аллергенов, т.е. вредоносных продуктов данного химического производства), что приближает условия оценки профпригодности к реальным условиям химического производства, снижают ошибку профпригодности в 1,1 3,7 раза и, как следствие, уменьшает риск возникновения профзаболеваний.

В качестве аллергена выбирают наиболее токсичные продукты из ряда изоцианатов, например толуилендиизоцианат или дифениметандиизоцианат. Другие вещества из этого ряда дают аналогичную картину для профпригодности.

Для того, чтобы реакция взаимодействия аллергена с кровью человека была осуществима, необходимо применять раствор аллергена совершенно определенной концентрации, определяемой в каждом случае конкретного аллергена. Оптимально выбранная для лабораторных исследований доза аллергена позволяет избежать токсического воздействия на клетки крови, что очень важно для исключения ошибок способа. Вещества, толуилендиизоцианат или дифенилметандиизоцианат, выбираемые для осуществления заявляемого способа, разрушаются под действием воды, т. е. водный раствор аллергена не может участвовать в реакции для определения специфической чувствительности к аллергену.

Для осуществления заявляемого способа предварительно растворяют алленген в петролейном эфире в соотношении 1:60, затем полученный состав растворяют в дистиллированной воде в соотношении 1:33 и добавляют к базовому раствору в соотношении 1:1,3.

Рассчитывают коэффициенты:
K₁ коэффициент функциональной активности лейкоцитов по фагоцитозу в пробирке без аллергена, названный нами "показателем базовой активности", и
K₂ коэффициент функциональной активности лейкоцитов по фагоцитозу в пробирке с аллергеном.

Коэффициенты определяют по формулам:

где A₁ количество фагоцитирующих лейкоцитов в пробирке без аллергена;
A₂ количество фагоцитирующих лейкоцитов в пробирке с аллергеном;
B₁ количество фагоцитирующих лейкоцитов в пробирке без аллергена;
B₂ количество фагоцитирующих лейкоцитов в пробирке с аллергеном.

При значении K₁ ≅ 0,15 и K₂-K₁ ≥ определяют профпригодность, а при K₁ ≥ 0,22 и K₁-K₂≥ 0,01 профнепригодность.

Пример 1 осуществления способа. Гр-ка т. работает 4 года в условиях производства пенополиуретанов. Проводят реакцию крови с определением фагоцитарной активности сенсибилизированных лейкоцитов.

Капиллярную кровь берут в микропипетку и по 0,01 мл вносят в 2 центрифужные пробирки, предварительно протертые тампоном, смоченным гепарином.

В 1-ю пробирку наливают базовый 062 0,22%-ный раствор нитросинего тетразолия в буферной среде в количестве 0,065 мл и добавленный к нему эфирно-водной смеси (петролейный эфир и дистиллированная воды в соотношении 1: 33) в количестве 0,05 мл. Соотношение капиллярной крови 0,2 0,22%-ного раствора нитросинего тетразолия и эфирной смеси 1:0,65:0,5.

Во 2-ю пробирку наливают также базовый раствор 0,2 0,22%-ного нитросинего тетразолия в фосфатной буферной среде в количестве 0,065 мл и раствор аллергена в эфирно-водной среде в количестве 0,05 мл. Соотношение капиллярной крови базового раствора нитросинего тетразолия и аллергенно-эфирной смеси 1:0,65:0,5.

Пробирки инкубируют 90 мин при T 37^oC, затем эритроциты крови разрушают в 3%-ном растворе уксусной кислоты, и подсчет количества производят в камере Горяева.

У данного человека функциональная активность лейкоцитов в первой пробирке равна:

Функциональная активность сенсибилизированных лейкоцитов равна:

При базовой активности 0,18 (большей, чем 0,2) отмечается снижение активности сенсибилизированных лейкоцитов.

Вывод: рабочую T следует отнести ко второй диспансерной группе наблюдения, к группе риска. На рабочем месте необходимо снизить концентрацию толуилендиизоцианата и назначить адаптогены, улучшающие иммунитет (например, настойку лимонника).

Пример 2 осуществления способа. Рабочая П, стаж работы на данном производстве 6 лет.

Капиллярную кровь берут в микропипетку по 0,1 мл и вносят в 1 центрифужные пробирки.

В 1-ю пробирку наливают базовый 0,2 0,22%-ный раствор нитросинего тетразолия в буферной среде в количестве, 0,065 мл и добавленной к нему эфирно-водной смеси (петролейный эфир и дистиллированная вода в соотношении 1:33) в количестве 0,05 мл. Соотношение капиллярной крови, 0,2 0,22%-ного раствора нитросинего тетразолия и эфирной смеси 1:0,65:0,5.

Во 2-ю пробирку наливают также базовый раствор 0,2 0,22%-ного нитросинего тетразолия в фосфатной среде в количестве 0,065 мл и раствор аллергена в эфирно-водной среде в количестве 0,05 мл. Соотношение капиллярной крови базового раствора нитросинего тетразолия и аллергенно-эфирной смеси - 1: 0,65:0,5.

Пробирку инкубируют 90 мин при T 37^oC, затем эритроциты крови разрушают в 3%-ном растворе уксусной кислоты, и подсчет количества производят в камере Горяева.

У данного человека функциональная активность лейкоцитов в первой пробирке равна:

Функциональная активность сенсибилизированных лейкоцитов равна:

Вывод: базовая активность лейкоцитов высока (выше 0,22 0,25), сенсибилизированных лейкоцитов 0,18, т.е. ниже базовой на 0,19, следовательно, рабочая П профнепригодна. Рабочую П. следует перевести на другие производства.

Показатели лабораторных исследований подтверждаются клинической симптоматикой, в частности, при профнепригодности отмечается анемия, эозинофилия, фаринголаринготрахеит, трахеобронхит, бронхоспазм, снижение показателей ЖЕЛ и пневмотахометрии более чем на 25% по сравнению с нормой.

Способ оценки профпригодности в условиях химического производства пенополиуретанов на основе изоцианатов относится к области медицины: в частности гигиены труда, и может быть использован для оценки профпригодности уже работающих в условиях химического производства. Достигаемый технический результат - повышение точности оценки. Способ состоит в том, что "ин витро" производят анализы крови с определением базовой активности лейкоцитов в буферном растворе нитросинего тетразолия и определением активности сенсибилизированных лейкоцитов в таком же буферном растворе нитросинего тетразолия, но уже с добавлением аллергена, растворенного в петролейном эфире в соотношении 1: 60, а полученный раствор - в дистиллированной воде в соотношении 1: 33. Рассчитывают коэффициенты функциональной активности K₁ и K₂, и при значении K₁ ≅ 0,15 и K₂-K₁ ≥ 0,01 определяют профпригодность, а при K₁ ≥ 0,22 и K₁ - K₂ ≥ 0,01 - профнепригодность.

Способ определения профпригодности лиц к работе в условиях производства пенополиуретанов на основе изоцианатов, включающий добавление к пробе крови испытуемого 0,2% -ного раствора нитросинего тетразолия в фосфатном буфере, инкубацию при 37^oС, разрушение эритроцитов уксусной кислотой и подсчет количества фагоцитирующих лейкоцитов в камере Горяева, отличающийся тем, что для исследования берут две пробы крови, в первую добавляют дополнительно эфирно-водную смесь в соотношении кровь раствор нитросинего тетразолия водно-эфирная смесь 1 0,65 0,5, а во вторую специфический аллерген из ряда изоцианатов в соотношении кровь раствор нитросинего тетразолия аллергенно-эфирная смесь 1 0,65 0,5, рассчитывают функциональную активность лейкоцитов в первой и второй пробах по формулам
K₁ A₁/B₁, K₂ A₂/B₂,
где А₁ количество фагоцитирующих лейкоцитов в пробе без аллергена;
А₂ количество фагоцитирующих лейкоцитов в пробе с аллергеном;
В₁ абсолютное количество лейкоцитов в пробе без аллергена;
В₂ абсолютное количество лейкоцитов в пробе с аллергеном,
и при значении К₁ ≅ 0,15 и К₂ К₁ ≥ 0,01 определяют профпригодность, а при К₁ ≥ 0,22 и К₁ - К₂ ≥ 0,01 профнепригодность.