Способ выявления сенсибилизации к смешанной растительной пыли джута, льна и кенафа Советский патент 1991 года по МПК A61B5/00 G01N33/48 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в качестве лабораторного скрининг-теста для выявления сенсибилизации к смешанной растительной пыли джута, льна и кенафа у рабочих текстильного производства, в том числе у больных пылевыми бронхолегочными заболеваниями.

Цель изобретения - повышение точности, ускорение способа и уменьшение его травматичности.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь забирают из пальца в количестве 0,1 мл в пробирку с 0,025 мл гепарина (20 Ед/мл), добавляют 0,05 мл 0,1 % раствора нитросинего тетразолия и 0,05 мл фосфатного буфера, в котором предварительно разводят аллерген смешанной растительной пыли в соотношении 1:5, Реагирующую систему инкубируют во влажной среде при 37°С и при комнатной температуре по 15 мин при периодическом перемешивании путем продувания воздуха/ Готовят мазок, докрашивают его 0,25%-ным раствором сафранина, высушивают на воздухе, фиксируют абсолютным этиловым спиртом и микроскопируют с иммерсией. Просчитывают 100 нейтрофилов, учитывая среди них клетки с содержанием в цитоплазме гранул формазана. Результат оценивают как положительный, т.е, свидетельствующий о наличии сенсибилизации, при количестве клеток с гранулами формазана 26% и более.

О

ю

S

о

П р и м е р 1. Результаты обследования лиц контрольной группы (доноров, не работающих в текстильном производстве), больных пылевыми бронхолегочными заболеваниями и практически здоровых рабочих текстильного производства, подвергающихся ингаляционному воздействию смешанной растительной пыли (всего 96 человек).

Как видно из среднегрупповых данных, у больных бронхолегочными заболеваниями и у практически здоровых рабочих текстильного производства уже в НСТ-тесте выявляется повышенная функциональная активность нейтрофилов по сравнению с контролем (18,0 ± 1,4% и 21,6 ± 1% клеток с гранулами формазана при 9,5±0,4% в контрольной группе), что однако может быть связано как с сенсибилизирующим, так и с раздражающим действием производственной пыли. Об определенном уровне раздражающего действия свидетельствуют, в частности, результаты добавления in vitro аллергена по заявленному способу к интак- тным клеткам доноров (контрольная группа), у которых выявлена стимуляция нейтрофилов на уровне 17,4 ± 0,7% (от 15,3% до 20,5%).

В случае развития сенсибилизации к смешанной растительной пыли у больных лиц и у практически здоровых рабочих эффект специфической стимуляции нейтрофилов аллергеном in vitro по заявленному способу высоко достоверно (Р 0,001) превышает показатели раздражающего действия аллергена на интактные клетки: 36,3 ±2,2% и 39,4± 1,3% нейтрофилов с гранулами формазана при 17,4 ±0,7% в контрольной группе. Проверка индивидуальных значений по группе доноров показала, что колебания формазан-положительных клеток при добавлении аллер гена составляют в норме от 14 до 22%, т.е. ,4 ±0,7%; (,98. X ± 2 а 25,36%. Т.е. диагностический титр для оценки положительной реакции соответствует 26% (и выше). Поскольку эффект специфической стимуляции нейтрофилов у всех сенсибилизированных лиц превышает 25%, результат расценивают как положительный, т.е. свидетельствующий о наличии сенсибилизации, при 26% и более нейтрофилов с цитоплазматиче- скими гранулами формазана. Это соответст- вует25%- запаса от максимального уровня неспецифической реакции раздражения ин тактных нейтрофилов при добавлении аллергена.

Сопоставление частоты выявления сенсибилизации по заявленному способу и методом кожных скэрификационных проб свидетельствуют не только о совпадении результатов аллергологического тестирования больных пылевыми бронхолегочными заболеваниями, но и о существенном преимуществе заявленного способа о случаях сомнительных и отрицательных результатов кожных проб, что проявляется наиболее часто при обследовании еще практически здоровых рабочих, Это подтверждают среднегруппо- вые данные частоты выявления сенсибилизации, приведенные в примере 1, и следующие индивидуальные показатели.

П р и м е р 2. Индивидуальные примеры по сопоставлению результатов аллергологического тестирования больных бронхолегоч- ными заболеваниями от воздействия смешанной растительной пыли и лиц контрольной группы по заявленному способу (in vitro) и методом кожных скарификационных проб (in vivo).

Таким образом, заявленный способ характеризуется повышением точности, так как позволяет выявлять сенсибилизацию при отрицательных и сомнительных результатах кожных скарификационных проб. Способ выполняется в течение 50 мин, в то время как кожные скарификационные пробы требуют высокой квалификации и учета результатов только через 24 ч; исключается применение высококачественного импортного метилового зеленого, который заменен на сафранин (0,25%-ный раствор). Способ является безопасным для организма и может быть рекомендован в качестве скрининг-теста для массовых медицинских осмотров рабочих текстильного производства с целью формирования групп риска развития пылевых бронхолегочных заболеваний и диагностики начальных стадий развития патологии. В клинике npoqbeccno- нальных заболеваний при обследовании больных пылевыми бронхолегочными заболеваниями от воздействия смешанной растительной пыли аллергологическое тестирование in vitro по заявленному способу может полностью заменить постановку кожных скарификационных проб.

Формула изобретения Способ выявления сенсибилизации к смешаннной растительной пыли джута, льна и кенафа, включающий клиническое исследование, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, его ускорения и уменьшения травматичное™, у пациента берут кровь из пальца, добавляют

0,05 мл 0,1 % нитросинеготетразолия, 0,05 мл фосфатного буфера, з котором предварительно разводят аллерген смешанной растительной пыли в соотношении 1:5, инный раствор сафранина сируюг спиртом, микрос разованию гранул форма 26% и более нейтрофило

кубируют, готовят мазок, добавляют 0,25%- 5 билизацию к аллергену,

ный раствор сафранина, высушивают фик- сируюг спиртом, микроскопируют и по образованию гранул формазона в цитоплазме 26% и более нейтрофилов выявляют сенси

Изобретение относится к медицине и используется в качестве лабораторного скрининг-теста для выявления сенсибилизации к смешанной растительной пыли джута, льна и кенафа у рабочих текстильного производства, в том числе у больных пылевыми бронхолегочными заболеваниями. Цель изобретения - повышение точности ускорения способа и уменьшение его травматичности. Для выявления сенсибилизации у больного берут кровь из пальца. Добавляют 0,05 мл 0,1 % нитросинего тетра- золия и 0,05 мл фосфатного буфера, в котором предварительно разводят аллерген смешанной растительной пыли в соотношении 1:5. Реагирующую систему инкубируют. Готовят мазок, добавляют 0,25%-ный раствор сафранина, Мазок высушивают; фиксируют спиртом и микроскопируют. Просчитывают нейтрофилы, содержащие в цитоплазме гранулы формазана. О наличии сенсибилизации свидетельствует количество клеток с гранулами формазана 26% и более. 2 табл. оо С

Достоверность различия по сравнению с контрольной группой при Р 0,001.

Таблица 2

По заявленному спо- собу

% нейтрофилов с гра- нулами формазана

Таблица 1

Кожными пробами

интенсивность реакций