Способ выявления концевых пластинок и нервных терминалей скелетной мышцы Советский патент 1987 года по МПК G01N1/28 

Изобретение относится к медицине, именно к гистологии, и может быть спользовано при физиологических и орфологических исследованиях скеетных мышц человека и животных при зучении иннервации и реиннервации х, при определении моно- и полиси- наптичности мышечных волокон, поли- аксональности концевых пластинок в роцессе развития и регенерации ске- етной мышцы.

Целью изобретения является более четкое окрашивание концевых пластинок путем включения в инкубационную среду индоксилацетата и использования в качестве красителя прочного синего РР,

Пример 1. Криостатные срезы скелетной мышцы крысы, наклеенные на предметные стекла, высушивают на воздухе при комнатной температуре и инкубируют в среде, состава; индок- силацетат 10 мг; этанол 2 мл; краситель прочный синий РР 100 мг, фосфатный буфер остальное при рН 5,6, при в течение 1 - 2 мин с последующим промыванием в дистиллированной воде 1 мин, фиксированием в течение 15 мин в среде: формалин 20 мл, хлорид натрия Д,25 г, вода дистиллированная Л80 мл. После промывки в дистиллированной воде, инкубирования в течение 30 мин при 37°С в среде состава: хлоралгидрат 10 г, пиридин 1 г, вода дистиллированная 100 мл, импрегнируют в течение 30 мин в растворе: нитрат серебра 6 г, вода дистиллированная 30 мл, карбонат кальция 50 мг, добавляют при помешивании 30 мг сульфата меди, промывают в дистиллированной воде 5 с, далее переносят в среду: гидрохинон 1 г, сульфит натрия 5 г, вода дистиллированная 100 мл, разлитую в два стаканчика, в первый на 5 с, во второй - на 4 мин, и промьшают в двух порциях дистиллированной воды по 0,5 мин, фиксируют в 5%-ном тиосульфате натрия, после чего промывают в воде, обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам.

П р и м е р 2. Криостатные срезы скелетной мышцы морской свинки, наклеенные на предметные стекла, высуши- вают на воздухе при комнатной температуре и инкубируют в среде состава: индоксилацетат АО мг, этанол 3 мл, прочный синий РР 70 мг, фосфат

5

0

5

0

5

0

5

O

5

ный буфер остальное при рН 5,6, при 37 С в течение 0,5 - 1 мин с последующим промыванием в дистиллированной воде 1 мин, фиксированием в течение 15 мин в среде: формалин 20 мл, хлорид натрия 4,25 г, вода дистиллированная 180 мл. Промывают в дистиллированной воде, инкубируют в течение 30 мин при 37°С в среде состава: хлоралгидрат 10 г, пиридин 1 г, вода дистиллированная 100 мл, импрегнируют в течение 20 мин в растворе: нитрат серебра 6 г, вода дистиллированная 30 мл, карбонат кальция 50 мг, добавляют при помешивании 30 мг сульфата меди и промывают в дистиллированной воде 5 с, далее переносят в среду: гидрохинон 1 г, сульфит натрия 5г, вода дистиллированная 100мл, .разлитую в два стаканчика, в первый на 5 с, во второй - на 4 мин, и промывают в двух порциях дистиллированной воды по 0,5 мин, фиксируют в. 5%-ном тиосульфате натрия, после чего промьшают в воде, обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам,

П р и м е р 3. Криостатные срезы скелетной мьш1цы крысы, наклеенные на предметные стекла, высушивают на воздухе при комнатной температуре и инкубируют в среде состава: индоксилацетат 15 мг, этанол 4 мл, проч- ньй синий РР 140 мг, фосфатный буфер остальное при рН 5,6, при 37°С в течение 2-3 мин с последующим промыванием в дистиллированной воде 1 мин, фиксированием в течение 15 мин в среде: формалин 20 мл, хлорид натрия 4,25г, вода дистиллированная 180 мл. Промьшают в дистиллированной воде, инкубируют в течение 30 мин при 37°С в среде состава: хлоралгидрат Юг, пиридин 1 г, вода дистиллированная 100 мл, импрегнируют в течение 40-мин в растворе: нитрат серебра 6 г, вода дистиллированная 30 мл, карбонат кальция 50 мг, добавляют при помешивании 30 мг сульфата меди и промывают в дистиллированной воде 5 с, далее переносят в среду: гидрохинон 1 г, сульфит натрия 5г„ вода дистиллированная 100 мл, разлитую в два стаканчика, в первый на 5 с, во второй - на 4 мин, и промывают в двух порциях дистиллированной воды по 0,5 мин, фиксируют в 5%-ном тиосуль313

фате натрия, после чего промывают в воде, обезвоживают в спиртах,просветляют в ксилоле и заключают в бальзам.

Как видно из приведенных примеров, предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет выявить концевые пластинки за более короткий период времени за счет исключения ряда этапов. Для получения одного гистологического препарата с выявленными концевыми пластинками и их нервными терминалями известным способом затрачивается 4 ч, а предлагаемым способом 2 ч 10 мин.

Формула изобретения

Способ выявления концевых пластинок и нервных терминалей скелетной мьшцы путем приготовления гистологического препарата, инкубации в среде, содержащей фосфатный буфер, этаРедактор К.Волощук

- . -.«.«i

Заказ 1882/38

Составитель М.Позняк Техред А.Кравчук

Корре Подпи

Тираж 777 ВНИИПИ Государственного комитета СССР

по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д,4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

106784

НОЛ и краситель с последующей импрегнацией срезов нитратом серебра и определением концевых пластинок и нервных терминалей по почернению струк- 5 туры, отличающийся тем, что, с целью более четкого окрашивания концевых пластинок, инкубационная среда дополнительно содержит ин- доксилацетат, а в качестве красите 0 ля - прочный синий РР, при следующих соотношениях компонентов,

Индоксил- ацетат Эганол Прочный синий РР Фосфатный буфер рН 5,0-7,0

10-40 2-4

70 - 140

Остальное

при зтом инкубацию проводят в течение 0,5 - 3 мин, а импрегнацию серебром осуществляют в течение 20-40 мин.

Корректор А.Тяско Подписное

Изобретение относится к гистологии. Цель изобретения - более четкое окрашивание концевых пластинок. Гистологические препараты высушивают и инкубируют в среде с индоксилаце- татом, этанолом, красителем прочным синим РР и фосфатным буфером. После промывания препараты фиксируют, инкубируют в среде с хлоралгидратом и пиридином и импрегнируют. Затем переносят в среду с гидрохиноном и сульфатом натрия. После этого фиксируют в растворе тиосульфата натрия, обезвоживают в спиртах, просветляют в ксилоле и заключают в бальзам. Ш (Л О) 00