СРЕДСТВО, УЛУЧШАЮЩЕЕ ГЕМО- И ЛИМФОЦИРКУЛЯЦИЮ И УСИЛИВАЮЩЕЕ РЕГЕНЕРАТОРНЫЕ ПРОЦЕССЫ В ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛАХ ПРИ АРТЕРИАЛЬНОЙ ИШЕМИИ Российский патент 1997 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к области медицины, а именно к лекарственным препаратам, применяемым при заболеваниях, связанных с нарушением крово- и лимфообращения с признаками иммунной недостаточности.

Известны лекарственные препараты, применяемые, в частности, при нарушениях кровообращения [1] Наиболее близким прототипом данного научно-технического решения является лекарственный препарат фентоламин (патентованное название Regitiene), широко используемый в медицине преимущественно для улучшения кровоснабжения тканей при расстройствах периферического кровообращения [1, 2, 3]
Существенным недостатком фентоламина является то, что он не обеспечивает достаточно полного восстановления объемного кровотока и, следовательно, взаимосвязанной с ним лифоциркуляции. Кроме того, фентоламин сравнительно токсичен, в связи с чем противопоказан при органических поражениях сердца и сосудов, вызывает тахикардию, рвоту и другие нежелательные последствия [1, 3]
Цель изобретения состоит в достижении более эффективного восстановления объемного кровотока, а также в придании новому средству способности стимулировать иммунную систему и регенерацию лимфатических узлов, выполняющих важную роль в тесно сопряженных между собой гемолимфоциркуляторных процессах.

Эта цель достигается тем, что в качестве средства, обеспечивающего более эффективное по сравнению с прототипом восстановление объемного кровотока, а также стимулирующего регенерацию лимфатических узлов при артериальной ишемии, используют эфирорастворимые полифенолы подземных органов шиповника.

Сущность технического решения заключается в том, что предлагаемое средство получают следующим образом [4]
Сухие измельченные корневища и корни широко распространенного в природе шиповника экстрагируют этилацетатом в соотношении 1 10 (масса объем) при температуре его кипения на водяной бане в колбе с обратным холодильником в течение 20 мин. Для большей полноты извлечения биологически активных веществ операцию повторяют 2 3 раза, объединенный экстракт упаривают в ротационном испарителе в 8 раз, при этом этилацетатный конденсат используют повторно для той же цели, а сгущенный экстракт осаждают в пятикратно большем количестве хлороформа, осадок промывают чистыми порциями хлороформа и высушивают в вакуумсушилке, после чего известными методами из полученного препарата удаляют остатки органических растворителей. Экстракция материала этилацетатом, являющегося для данного случая селективным экстрагентом наиболее активных неокисленных полифенолов, составляющих основу целевого продукта, позволяет избежать трудоемких операций по его очистке от содержащихся в избытке в исходном материала и не представляющих в данном случае интереса сильно окисленных дубильных и других посторонних веществ, а осаждение сгущенного экстракта в хлороформе способствуют дополнительной очистке от смол и пигментов, также загрязняющих целевой продукт и снижающих его качество. В результате этих технологических операций удается получить практически очищенные полифенолы с небольшой примесью других веществ. Выход целевого продукта достигает 9 12% от сухого веса исходного сырья.

Характеристика препарата. Предлагаемый препарат представляет собой белый с кремовым оттенком аморфный порошок с характерным для фенольных веществ горьковато-вяжущим вкусом, хорошо растворимый в воде, спирте и в любых их соотношениях. Известными химическими методами в составе препарата обнаруживается до 5 6 фенольных соединений, преимущественно флавановой (катехиновой и лейкоантоцианидиновой) природы, для которых, как известно, характерна общая C₆-C₃-C₆ структура, проявляющая многостороннюю биологическую, в частности, P-витаминную активность.

Изучение токсичности полифенольного препарата шиповника. Предлагаемое средство малотоксично. При внутрибрюшинном введении белым беспородным мышам массой 16 25 г показатель средней смертельной дозы составил ЛД₅₀ 375 мг/кг массы. При введении препарата через рот животные переносили дозу до 2 г на 1 кг массы, что свидетельствует о его низкой токсичности при данном пути поступления в организм.

Результаты изучения специфической активности. Опыты проводились на самках белых крыс породы "Вистар" в стадии полового цикла диэструс с использованием известных и хорошо апробированных методов [5] Артериальная ишемия создавалась в системе тазовой конечности путем лигирования наружной подвздошной артерии. Коррекция артериальной ишемии осуществлялась путем ежедневного энтерального введения сравниваемых препаратов в эффективных дозах, которые для феноламина составили 5 мг/кг, а для препарата шиповника 10 мг/кг массы. Контрольным животным вводился физиологический раствор. Опыт продолжался в течение 3 мес. Через определенные промежутки времени исследовались показатели объемного кровотока в большой приводящей мышце бедра (методом полярографии по клиренсу водорода), а также изменения микроанатомической организации подколенных лимфатических узлов и в содержании клеточных элементов их коркового плато. Изучалось, кроме того, действие сравниваемых препаратов при артериальной ишемии на транспортную функцию подколенных лимфоузлов половозрелых собак. Статистически обработанные результаты экспериментов приводятся в табл. 1.

Данные табл. 1 убедительно свидетельствуют о четко выраженном фармакологическом действии нового средства на кровообращение и кровоснабжение тканей при артериальной ишемии.

Анализ данных табл. 1 показывает, что у животных контрольной группы с артериальной ишемией без коррекции произошло резкое снижение объемного кровотока по сравнению с таковым в норме (сноска к табл.1), затем он под действием компенсаторного механизма, связанного, прежде всего, с коллатералеобразованием, несколько увеличивается, но даже к концу трехмесячного опыта так и не восстанавливается полностью, указывая, тем самым, на сформировавшуюся в зоне повреждения хроническую недостаточность кровообращения. Фармакологическая коррекция артериальной ишемии полифенольным препаратом шиповника уже к концу месячного срока приводит к улучшению показателей объемного кровотока до уровня, статистически неразличимого с нормой, что свидетельствует о его эффективности. Фентоламин таким действием на обладает и, судя по полученным данным, лишь в самом раннем периоде патологии способствует повышению объемного кровотока, который вскоре стабилизируется, на уровне контрольного варианта с характерной для него хронической недостаточностью кровообращения и, следовательно, кровоснабжения тканей в зоне ишемического повреждения.

Аналогичным образом действуют сравниваемые препараты и на взаимосвязанную с кровотоком лимфоциркуляцию, в частности, через лимфатические узлы, являющиеся важнейшими структурами лимфатической системы. Так в эксперименте на половозрелых собаках было установлено, что уже через сутки после лигирования бедренной артерии показатели притока и оттока лимфы для подколенных лимфоузлов ухудшились (снизились) соответственно на 33,4% и 19,7% Фентоламин в первые сутки способствовал усилению притока и оттока лимфы соответственно на 11 и 16% против нормы и шиповника. Коррекция мягкодействующим препаратом шиповника в столь короткий срок не устранила этого негативного процесса, хотя снижение лимфооттока оказалось менее существенным в пределах 10% Однако на стадии трехмесячной артериальной ишемии показатели транспортной функции лимфоузлов в этих вариантах опыта кардинально изменились и соответствовали значениям, отображенным на табл. А.

Как видно из материалов табл. А, у животных с артериальной ишемией (контроль) в течение опытного срока произошло резкое ухудшение лимфотока через лимфоузлы, причем несложные расчеты показывают, что дефицит оттока, характеризующий уровень гематолимфитического обмена внутри лимфоузла, уменьшился по сравнению с таковым в норме более чем в два раза, указывая на деструктивную характер изменений в этих органах в связи с нарастанием склеротических изменений. Аналогичные нарушения, судя по данным, имеют место и при коррекции артериальной ишемии фентоламином, тогда как полифенольный препарат из подземных органов шиповника устраняет их полностью (табл. А), что вполне согласуется с их действием на объемный кровоток.

Выявилось также, что нарушение лимфотока в данном случае связано со степенью атрофии лимфатических узлов, в чем убеждают показатели площади их сечения в разные сроки артериальной ишемии (табл.2).

Как видно из табл. 2, уже в период семисуточной артериальной ишемии, площадь сечения подколенных лимфоузлов крыс контрольного варианта уменьшилась против нормы на 18% а к концу трехмесячного срока данной патологии на 38,2% Этого фактически не происходит в случае лечения больных животных препаратом шиповника, тогда как в результате применения фентоламина имеет место, хотя и менее интенсивная, чем в контроле, но все же прогрессирующая атрофия лимфоузлов, которая становится особенно заметной во второй половине опытного срока, когда площадь сечения лимфоузлов уменьшается до статически различимого с нормой уровня.

Более детально исследование состояния лимфатических узлов крыс в разных вариантах проведенного опыта позволило сделать вывод о том, что предлагаемое средство из подземных органов шиповника эффективно стимулирует структурно-функциональную регенерацию этих лимфоидных органов на уровне мозговых синусов, коркового плато и его клеточного массива. При этом оказалось, что показатели площади сечения мозговых синусов подколенных лимфатических узлов, составляющие в норме у интактных животных 0,572±0,037 мм² и возросшие через сутки после лигирования наружной подвздошной артерии до 0,683±0,044 мм², уже через двухнедельный срок резко снизились до уровня 0,447±0,029 мм², а к концу опытного срока до 0,411±0,026 мм², что на 22 28% ниже нормы.

При коррекции же артериальной ишемии препаратом шиповника эти показатели изменялись в пределах 0,680±0,029 0,561±0,027 мм² и после 30-суточного лечебного курса не имели достоверного различия с нормой, что вполне согласуется с высоким уровнем нормализующего его действия на транспортную функцию лимфоузлов, о чем упоминалось выше. Для сравнения отметим, что коррекция артериальной ишемии весьма токсичным фентоламином сопровождается в этом отношении негативным явлениям, прежде всего, достаточно выраженной отечностью мозговых синусов, отсюда резко возрастающими показателями площади их сечения, достигающими уже на ранних этапах патологии уровня 0,752±0,056 мм² (на 31,4% выше, чем в контроле), а последующее снижение этих показателей к концу опытного срока до величин 0,577±0,042 мм², не сопровождается нормализацией транспортной функции лимфоузлов, указывая тем самым на их атрофические изменения.

Последнее еще в большей степени подтвердилось результатами исследования особенностей действия сравниваемых препаратов на корковое плато лимфатических узлов из зоны ишемии (табл.3).

Из данных табл. 3 видно, прежде всего, что одним из опасных следствий артериальной ишемии является быстро прогрессирующая атрофия коркового плато, о чем свидетельствует более чем двукратное уменьшение площади его сечения в контрольном варианте опыта. Полифенольный препарат из подземных органов шиповника уже на ранних этапах ишемии предотвращает столь значительную деградацию коркового плато, а в последующем способствует его восстановлению до статически неразличимого с нормой уровня, в чем заключается одно из существенных преимуществ предлагаемого средства над прототипом, который, судя по данным, вначале вызывает отечность этой ткани, а в дальнейшем слабо препятствует ее атрофическим изменениям, вследствии чего площадь сечения коркового плато к концу опытного срока составила лишь 58% ее нормальной величины.

Наконец, еще одним существенным преимуществом предлагаемого средства является то, что оно способствует восстановлению весьма уязвимого и быстро нарушаемого при артериальной ишемии клеточного массива коркового плато, выполняющего, как известно, немаловажную роль в иммунной системе организма. Причем в опытах выявилось, что общее количество клеток в расчете на площадь среза коркового плато подколенных лимфоузлов крыс, составляющее в норме 16929±1253 клеток, за период 60-суточной ишемии снизилось в контрольном варианте до 6098±572 клеток, в варианте с применением фентоламина до 6864±573 клеток, тогда как в варианте с использованием полифенольного препарата из подземных органов шиповника этот показатель находился на уровне 16156±1472 клеток, или в пределах нормы. Сказанное выше подтверждается и показателями численной плотности клеток в расчете на определенную площадь среза коркового плато, более объективно отражающими степень влияния в этом отношении сравниваемых препаратов (табл.4).

Данные табл.4 убедительно говорят о том, что в первые семь суток артериальной ишемии во всех трех вариантах опыта после кратковременного повышения имело место резкое снижение численной плотности клеток коркового плато до статистически различимого с нормой уровня, который к концу опытного срока практически однозначно еще больше усугубляется как в контроле, так и в варианте с применением фентоламина, указывая, таким образом, на отсутствие у него какой-либо активности в отношении восстановления клеточного состава лимфоидной паренхимы. Предлагаемый же препарат шиповника, наоборот, обеспечивает фактически полное восстановление численной плотности клеток коркового плато лимфоузлов, выгодно отличаясь этим от прототипа.

Принимая во внимание способность предлагаемого средства восстанавливать нарушенный при артериальной ишемии клеточный состав лимфоидной паренхимы, можно допустить, что препарат из подземных органов шиповника должен обладать иммуномодулирующим действием. Учитывая, что фентоламин в низших опытах не оказал нормализующего действия на иммуноморфологические показатели паренхимы лимфоузлов из зоны ишемии, а также известного из литературы факта об отсутствии у фентоламина иммуностимулирующих свойств, мы сочли возможным при оценке иммуностимулирующих свойств препарата шиповника в качестве препарата сравнения использовать левамизол иммуноактивный препарат.

Иммуностимулирующий эффект изучали на мышах линий CBA и C57B1 по способности влиять на:
1) первичный гуморальный иммунный ответ к эритроцитам барана (ЭБ) в селезенке интактных мышей линий CBA и C57B1;
2) первичный гуморальный иммунный ответ к ЭБ в селезенке мышей линии CBA на фоне подавленного иммунитета после сублетального облучения.

В работе использовали мышей-самцов линий CBA и C57B1 6 8 недельного возраста. Контрольная и опытная группы состояли из 10 мышей. Препарат шиповника в виде водного раствора вводили внутрижелудочно в течение 10 дн в дозах 5, 10, и 50 мг/кг однократно, ежедневно. Левамизол растворяли в дистиллированной воде, в дозах 2,5 и 10 мг/кг вводили внутрижелудочно по той же схеме, что и препарат шиповника. Контрольным животным в течение 10 дн внутрижелудочно вводили 0,5 мл дистиллированной воды.

Через 2 ч после последнего введения препаратов животных иммунизировали внутривенно 2•10⁸ ЭБ в объеме 0,5 мл. На четвертые сутки после иммунизации животных забивали и определяли количество антителообразующих клеток (АОК) по числу гемолитических бляшек модифицированным методом локального гемолиза в полужидкой среде [5]
Как видно из данных табл. 5, введение препарата шиповника в течение 10 дн мышам линии CBA в дозе 10 и 50 мг/кг обнаруживает его достоверное иммуностимулирующее действие на гуморальный иммунный ответ на тиму-зависимый антиген ЭБ.

У мышей линии C57B51, низкоотвечающих на ЭБ, введение препарата шиповника в течение 10 дн в дозе 10 мг/кг также вызывает стимуляцию гуморального иммунного ответа.

Таким образом, анализируя данные табл.5 и 6 можно заключить, что препарат шиповника обнаруживает отчетливый иммуностимулирующий эффект как у высоко-, так и у низкоотвечающих на тимус-зависимый антиген мышей.

Влияние препарата шиповника на гуморальный иммунный ответ изучен у мышей линии CBA на фоне подавленного иммунитета после сублетального облучения в дозе 300 P (табл.7).

Как видно из табл.7, у облученных мышей достоверный иммуностимулирующий эффект по сравнению с контрольными животными проявляет препарат шиповника в дозе 10 мг/кг массы.

Итак, на основании всего изложенного можно заключить, что предлагаемое средство из подземных органов шиповника обеспечивает при артериальной ишемии более полное, чем прототип, восстановление объемного кровотока и взаимосвязанной с ним лимфоциркуляции, а также стимулирует структурно-функциональную регенерацию лимфатических узлов на уровне мозговых синусов коркового плато и его клеточного массива, сочетающееся с иммуностимулирующим действием.

Литература
1. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М. 1986, Т. 1. с.288.

2. Полукордас Г. Новые лекарственные средства. М. 1966. с.101.

3. Шваб Т.Ю. Влияние фентоламина и орнида на возбудимость и сократительную функцию миокарда. Дис. на соиск. учен. ст. канд. мед. наук. Воронеж, 1970.

4. Пар А. Левамизол как иммуномодулятор. Будапешт, 1979, с.30.

5. Панков Ю.А. Брюховецкая Е.В. Джумаев М.А. Технология выделения суммы катехинов и получения P-витаминного препарата из корневищ и корней шиповника морщинистого. Вопросы фармацеи на Дальнем Востоке. Хабаровск, 1980, с. 54 - 60.

Использование: средство, улучшающее гемо- и лимфоциркуляцию, усиливающее регенераторные процессы в лимфатических узлах при артериальной ишемии относится к области медицины, а именно к лекарственным препаратам, применяемым при заболеваниях, связанных с нарушением крово- и лимфообращения с признаками иммунной недостаточности. Сущность изобретения: изобретение дает возможность достигать более эффективного восстановления объемного кровотока при артериальной ишемии, осуществляет стимуляцию иммунной системы и регенерацию лимфатических узлов, выполняющих важную роль в гемолимфоциркуляторных процессах путем использования средства, стимулирующего восстановление гемо- и лимфоциркуляции, состоящее из комплекса биологически активных полифенолов подземных органов шиповника, экстрагированных этилацетатом, осажденных в хлороформе и высушенных в вакууме. 8 табл.

Применение Р-витаминного препарата из корневищ и корней шиповника в качестве средства, улучшающего гемо- и лимфоциркуляцию и усиливающего генераторные процессы в лимфатических узлах при артериальной ишемии.