СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ P-ВИТАМИННОГО СРЕДСТВА Российский патент 1999 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к области медицины, в частности к способам получения флавонолов из растительного сырья.

Известен способ получения суммы флавонолов из надземных частей володушки многожильчатой путем экстракции, упаривания, очистки, кристаллизации и сушки препарата (А.с. N 238096 МКИ A 61 K 35/78).

К недостаткам способа относится то, что полученный целевой продукт практически нерастворим в воде, что существенно ограничивает область его применения. Кроме того, володушка многожильчатая трудно вводится в культуру, а природные ее запасы ограничены.

Задача изобретения - придание адаптогенных свойств P-витаминного средства при экстремальных условиях.

Кроме того, задачей изобретения является расширение сырьевой базы.

Поставленная задача достигается тем, что в способе получения P-витаминного средства, включающем экстракцию, упаривание, очистку, осаждение и сушку продукта, согласно изобретению в качестве растительного сырья используют надземную часть манжетки обыкновенной, экстракцию проводят этиловым спиртом, после упаривания экстракта добавляют дистиллированную воду, очистку водного экстракта проводят хлороформом, oчищенный водный остаток экстрагируют этилацетатом, полученный экстракт упаривают и осаждение продукта проводят хлороформом.

Такая совокупность признаков позволяет максимально экстрагировать, очистить и осадить содержащуюся в надземной части сумму флавонолов с P-витаминной активностью и дает возможность получить целевой продукт, обладающий адаптогенными свойствами и хорошо растворимый в воде.

Способ поясняется на конкретном примере.

Пример. 300 г воздушно-сухой надземной массы манжетки обыкновенной, собранной в фазу бутонизации - начала цветения, экстрагируют 96^o-ным этиловым спиртом (растворитель и сырье берут в соотношении 1:10) при комнатной температуре в течение 1 суток. Для полноты извлечения суммы флавонолов эту операцию повторяют 3 - 4 раза, объединенный экстракт упаривают в ротационном испарителе под вакуумом до объема, равного массе исходного сырья, затем добавляют 1/2 от массы сырья дистиллированной воды и испаряют до полного испарения этилового спирта. Для очистки от сопутствующих растительных пигментов водный экстракт переносят в делительную коронку и взбалтывают 4 - 5 раз равными объемами хлороформа до обесцвечивания хлороформенного слоя. Сумму флавонолов из очищенного водного экстракта экстрагируют этилацетатом, взбалтывая в делительной воронке равными объемами этилацетата и экстракта. Эту процедуру повторяют 6 раз. Объединенный этилацетатный экстракт упаривают в ротационном испарителе под вакуумом до 1/2 исходной массы (начало образования осадка). Сгущенный экстракт вливают тонкой струей в шестикратно большее количество хлороформа. Выпавший желтый осадок отфильтровывают на стеклянном фильтре N 4, промывают чистыми порциями хлороформа и высушивают в вакуум-сушильном шкафу. Выход целевого продукта 4,5 г, что составляет 1,5%. Содержание флавонолов в осадке 3,2 г, т.е. 71%. Определение качественного состава и количественного содержания проводят методом хроматографии на бумаге, в качестве проявителя используют 10%-ный спиртовой раствор хлористого алюминия. При этом в составе препарата обнаруживается до 4 флавоноловых компонента.

1. Характеристика средства. Новый препарат представляет собой природную смесь хорошо очищенных и высокоактивных флавоноидных веществ, выделяемых из надземной части манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.) в виде желтого порошка горьковато-вяжущего вкуса, хорошо растворимого в воде и спирте.

2. Проверка на токсичность. Препарат практически нетоксичен для организма. Величина ЛД₅₀, определяемая по методу Беренса и Шлоссера, при внутриутробном способе введения препарата мышам составила 701,6 мг/кг.

3. Проверка на P-витаминную активность. Определялась по действию на проницаемость и резистентность кровеносных капилляров экспериментальных животных. Действие на резистентность изучалось манометрическим методом, на проницаемость - флюоресцеиновым методом. Препарат вводился внутрибрюшинно, в качестве контроля использовался физиологический раствор. В результате экспериментов установлено, что новый препарат обладает хорошо выраженной P-витаминной активностью, четко проявляя свое действие на проницаемость и резистентность кровеносных капилляров экспериментальных животных.

В табл. 1 показаны результаты такого опыта, а также сравнительного изучения P-витаминной активности прототипа, стандартного рутина и препарата, полученного из надземных органов манжетки обыкновенной.

Таким образом, препарат, полученный предлагаемым способом, превосходит стандартный рутин и прототип по капилляроукрепляющей активности.

4. Фармакологические испытания. Исследовали влияние препаратов из коpней и надземной части манжетки на структуру тимуса у контрольных животных. Препараты вводили в одной дозе (10 мг/кг массы) по одной и той же схеме - ежедневно, в течение 14 дней, через зонд в желудок.

У крыс, получивших препарат из надземной части манжетки, отмечалось умеренное повышение функциональной активности как лимфоидного (усиление пролиферации лимфоцитов, о чем свидетельствует увеличение количества бластов в корковом веществе в 1,7 раза и тенденция к повышению митотической активности), так и эпителиального компонентов тимуса (объем эпителиальных канальцев увеличился в 2,6 раза, достоверно возросло количество телец Гассаля). При этом размеры тимуса оставались в пределах контрольных значений.

Введение препарата из корней манжетки также приводит к активации лимфоидного и эпителиального компонентов тимуса, однако эти изменения протекают на фоне выраженного увеличения (на 39%) размеров органа (табл. 2).

Умеренное повышение функциональной активности, не сопровождающееся гипертрофией органа, создает экономичный функциональный резерв и оптимизирует последующие адаптивные реакции на экстремальные воздействия. Именно этот эффект оказался более выраженным у препарата из надземной части манжетки.

Исследовали адаптогенные свойства препарата, полученного из надземной части манжетки при экстремальном охлаждении организма (-10^oC, 7 дней, 22 ч ежедневно) (табл. 3). Препарат, полученный из надземной части манжетки (в дозе I мг на 100 г массы), вводили через зонд в желудок 7 дней до начала холодового воздействия и 7 дней в процессе охлаждения. Контрольным животным вводили воду. Часть животных проходила реадаптацию при +22^oC 7 дней после окончания курса охлаждения. В период реадаптации введение препарата прекращали.

Результаты исследования показали, что использование препарата из надземной части манжетки при охлаждении снижает процент гибели животных, токоферол практически не влияет на этот показатель.

Прoводили морфологическое исследование тимуса, определяли содержание кортикостерона в гомогенатах надпочечников (табл.4).

Экстремальное охлаждение у контрольных животных приводило к более чем двукратному подъему уровня кортикостерона в надпочечниках, что вызывало повреждение лимфоидной ткани тимуса: увеличивалось количество дегенерирующих лимфоцитов, снижалась митотическая активность и количество лимфобластов.

После реадаптации структура тимуса полностью не восстанавливалась, количественные показатели лимфоидных клеток обнаруживали тенденцию к снижению ниже исходного уровня на фоне пониженной глюкокортикоидной функции надпочечников.

У животных, получавших препарат из надземной части манжетки, реакция со стороны тимуса и надпочечников при охлаждении организма оказалось существенно иной: содержание кортикостерона в надпочечниках было достоверно ниже по сравнению с таковым у животных, подвергавшихся действию холода введения препарата из надземной части манжетки. В тимусе был менее выражен повреждающий эффект: количество дегенерирующих лимфоцитов было достоверно меньшим, а митотическая активность и число лимфобластов, наоборот, увеличилось.

Реадаптация у этих животных приводила к повышению уровня кортикостерона в надпочечниках. Структура тимуса на этом фоне полностью восстанавливалась, при этом митотическая активность лимфоцитов и количество лимфобластов в корковом веществе достоверно превышали таковые у контрольных реадаптированных крыс.

У животных, получавших в качестве адаптогена токоферол, холод также не вызывал подъема уровня кортикостерона в надпочечниках и не усиливал деструкции лимфоцитов в тимусе. Однако повышения митотической активности лимфоцитов, как это было у животных, получавших препарат из надземной части манжетки, не наблюдали.

Реадаптация у этих животных также не вызывала повышения содержания кортикостерона в надпочечниках, но структура тимуса полностью не восстанавливалась.

Таким образом, адаптогенный эффект препарата из надземной части манжетки при экстремальном охлаждении организма проявляется в уменьшении процента гибели животных, снижении глюкокортикоидной реакции надпочечников и уменьшении повреждений лимфоидной ткани тимуса, в полном восстановлении структуры тимуса в период реадаптации.

Предлагаемый способ по сравнению с известным обладает следующими преимуществами:
- Позволяет использовать препарат, полученный предлагаемым способом, в качестве адаптогенного средства при экстремальных воздействиях, благодаря повышению функциональной активности тимуса, не сопровождающегося его гипертрофией.

Позволяет расширить область применения препарата, полученного предлагаемым способом благодаря его хорошей растворимости в воде.

Изобретение относится к области медицины, в частности, к способам получения флавонолов из растительного сырья. Сущность изобретения: проводят экстракцию манжетки обыкновенной этиловым спиртом. После упаривания этилового спирта добавляют дистиллированную воду и проводят очистку водного остатка хлороформом. Очищенный водный остаток экстрагируют этилацетатом и полученный экстракт упаривают. Способ позволяет расширить сырьевую базу для получения продукта. 4 табл.

Способ получения Р-витаминного средства, включающий экстракцию, упаривание, очистку, осаждение и сушку продукта, отличающийся тем, что экстракции подвергают надземную часть манжетки обыкновенной, экстракцию проводят этиловым спиртом, после упаривания экстракта добавляют дистиллированную воду, очистку водного экстракта проводят хлороформом, очищенный водный остаток экстрагируют этилацетатом, полученный экстракт упаривают и осаждение продукта проводят хлороформом.