СПОСОБ УСИЛЕНИЯ НЕОЛИМФОАДЕНОГЕНЕЗА ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА Российский патент 2015 года по МПК A61K36/185 A61K36/41 A61K36/45 A61K36/48 A61K36/53 A61K36/63 A61K36/738 A61K36/899 A61P43/00 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, затрагивает разделы геронтологии, морфологии, лимфологии, касается проблем повышения неспецифической резистентности организма путем стимуляции неолимфогенеза на этапе позднего онтогенеза и направлено на улучшение результатов эндоэкологической реабилитации посредством озоно- и фитотерапии.

Известно, что ведущая роль в неспецифической резистентности организма отводится иммунной системе, структурно представленной лимфоидными образованиями, в частности лимфатическими узлами (Минаева Е.В., 2011). Именно они возникли эволюционно и онтогенетически для обеспечения иммунологического статуса и повышения защитных свойств организма, определяя степень неспецифической резистентности к действию неблагоприятных факторов, но в настоящее время сопротивляемость многих людей к инфекциям, онкологическим заболеваниям и токсическим веществам снижена, особенно в пожилом и старческом возрасте.

Поэтому актуальной задачей является поиск средств и способов, применение которых позволило бы скорректировать иммунологический статус организма с повышением резистентности организма и активизации функции лимфатических узлов.

Из существующего уровня медицины известно, что в норме лимфоидные органы возникают лишь в процессе развития плода (органогенез), и что новые лимфоузлы возникают спонтанно при длительных хронических воспалительных процессах, длительно незаживающих ранах, аутоиммунных заболеваниях (Ruddle Ν.Η., 1999; Mazzucchelli L. et al, 1999; Weyand C.M. et al., 2001) и что способы активации и моделирования неолимфоаденогенеза связаны в основном с развитием рака (Ганцев Ш.Х., 2011) и применением противоопухолевой терапии, при которых имеет место несостоятельность основного лимфоузла (Переверзева Э.Р. и др., 2002, 2006; Филов В.А. и др., 2003; Бухман В.М. и др., 2004; Майбородин И.В. и др., 2004; Банул Н.В., 2005; Пригожина М., 2005; Okamoto Ν., et al., 2007; Майбородина В.И., 2009).

Известно свойство препарата олипифат вызывать образование лимфоузлов в мышечной ткани животных, что обусловлено местно-тканевой реакцией на введенное вещество (Переверзева Э.Р., 2002, 2007). Возможность вызывать эктопический неогенез лимфатических узлов в мышечных тканях животных соотносят с продуктами глубокого гидролиза лигнина, содержащих гуминовые кислоты. Процесс индукции олипифатом неогенеза лимфоузлов в мышечной ткани идентичен по ключевым механизмам процессу неогенеза лимфоидной ткани при аутоиммунных заболеваниях и некоторых инфекциях, но имеет другой инициирующий фактор. Наличие зоны некроза, привлечение лимфоцитов и большого числа макрофагов к месту введения препарата говорит о большой степени вероятности интенсивной выработки цитокинов семейства ФНО, активированными олипифатом лимфоцитами и макрофагами, а последующий каскад взаимодействий цитокинов приводит к эктопическому образованию лимфоузлов (Переверзева Э.Р., 2002, 2007). Основными недостатками данного технического решения являются: а) инвазивный характер (внутримышечная инъекция) введения препарата; б) развитие местной воспалительной реакции; в) образование лимфоидного образования в нетипичном месте при нарушении закона локализации лимфатических узлов и затруднении их функционирования; г) фармакокинетика олипифата не может быть полностью охарактеризована, а действие на иммунологический статус может приводить к неожиданным эффектам, что нивелируется при использовании заявляемого изобретения.

Предлагается способ усиления неолимфоаденогенеза для повышения неспецифической резистентности в эксперименте в позднем периоде онтогенеза сочетанным применением озоно- и фитотерапии. Способ не является инвазивным методом и не связан с травматизацией тканей; не вызывает воспалительных местных тканевых реакций; не связан с наличием патологического процесса в организме (например, онкологическое, аутоиммунное заболевания и др.); улучшает морфологическую картину основного лимфатического узла; при этом новообразование лимфоидных структур происходит в типичных областях расположения основных лимфатических узлов, как внутри, так и за пределами их. Все это способствует повышению неспецифической резистентности организма, демонстрируя усиление неолимфоаденогенеза на этапе позднего онтогенеза после сочетанной озоно- и фитотерапии.

В доступной патентной и научно-медицинской литературе не было найдено сведений об известности возможности повышения неспецифической резистентности посредством усиления неолимфоаденогенеза сочетанной озоно- и фитотерапией на этапе позднего онтогенеза, что соответствует критерию «новизна».

Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является обеспечение неспецифической резистентности на позднем этапе онтогенеза путем повышения защитной и дренажно-детоксикационной функций лимфатических узлов при активации неолимфоаденогенеза посредством сочетанной фито- и озонотерапии.

Для решения поставленной задачи используется оригинальный фитосбор, включающий лекарственные растения Сибири 20 в мас. % (корень бадана - 4, красный корень (копеечник чайный) - 4, родиола розовая - 2, лист бадана - 2, лист черники - 1,6, лист брусники - 1,6, лист смородины - 1,6, шиповник майский - 1,6, чабрец - 1,6) и сорбционный компаунд пищевых волокон (отруби пшеничные - 60, толокно овсяное - 20). Все компоненты средства соответствуют требованиям ГОСТа, Госфармакопеи России. В лекарственных растениях, входящих в фитосбор, общим является наличие биофлавоноидов, разнообразие которых определяет их полифункциональное влияние на организм, основанное на антиоксидантных, адаптогенных и регенерационных свойствах, в том числе и лимфотропный эффект (Бородин Ю.И. и др., 1999, 2000). В заявляемом решении лекарственные растения и пищевые волокна известны, однако их применение в предлагаемом сочетании дает технический результат в виде усиления неолимфоаденогенеза на позднем этапе онтогенеза для повышения неспецифической резистентности организма. Фитосбор принимают в виде настоя: 5-10 г измельченного препарата, заливают стаканом кипятка и выпивают вместе с осадком 1-2 раза в день. Средняя суточная доза фитосбора до 0,15 мг/кг. Курс приема составляет один месяц.

Одновременно с приемом фитосбора проводят озонаппликацию на область лимфосбора паховых лимфатических узлов (область бедра и паховой области) посредством озонированного оливкового масла по 15-20 минут через день, на курс 14 процедур. Насыщение оливкового масла озоном производилось аппаратом ОП1-М с устройством для озонирования. Терапия путем аппликаций обеспечивает трансдермальный эффект озонидов, что дает право на использование аппликации в медицинской практике (Арефьева И.С.и др., 2007; Янова Н.А., 2009).

Проведена морфофункциональная оценка воздействия сочетанной озоно- и фитотерапии на структурно-клеточную организацию лимфатического узла в разные возрастные периоды для подтверждения преимуществ технического результата, заявляемого в изобретении. Эксперимент проведен на 120 беспородных белых крысах-самцах разного возраста (3-5 месяцев и 1,5-2 года), исходя из существующего соотношения продолжительности жизни крыс и человека и целесообразности методического характера (Гелашвили О.А., 2008). Животные получали при свободном доступе к воде стандартную диету, которая включала экструдированный комбикорм ПК-120-1 для лабораторных крыс. Корм сбалансирован по аминокислотному составу, минеральным веществам и витаминам с гарантией изготовления из высококачественных компонентов. Сформированы две контрольные и две опытные группы животных разного возраста 3-5 месяцев и 1,5-2 года. В каждой группе не менее 30 крыс. Животные контрольной группы были без коррекции. В опытных группах животным разного возраста в течение месяца давали пить настой фитосбора (5-10 г измельченного фитосбора заливают стаканом кипятка) и одновременно на область бедра и паховой области накладывали повязку с озонированным оливковым маслом на 15-20 минут через день, на курс 14 процедур. Насыщение оливкового масла озоном производилось аппаратом ОП1-М с устройством для озонирования.

В эксперименте в качестве объекта исследования выбраны паховые лимфоузлы как соматические, регионарные для конечностей (опорно-двигательная система). Выбор их определен в соответствии с принципами экологической лимфологии (Бородин Ю.И., 2012). Лимфатические узлы изучали гистологическим методом с последующей морфометрией.

Сущность изобретения поясняется результатами экспериментального исследования, сопровождаемого таблицей и рисунками.

В сравнении с молодыми животными с возрастом происходит изменение площади структурно-функциональных зон пахового и брыжеечного лимфатических узлов, ответственных как за клеточный, так и за гуморальный иммунитет, что приводит к снижению резистентности (табл. 1). При этом формируется недостаточность клеточного звена иммунитета, судя по занимаемой площади Т-зонами в лимфатическом узле старых животных. При этом, если размер паракортекса остается на уровне контроля (как это имеет место в паховых лимфатических узлах), то снижается плотность клеток на единицу площади. Уменьшение площади и числа лимфоидных узелков с герминативным центром определяет снижение пролиферативных процессов в лимфатическом узле с возрастом. Очевидно, что лимфатический узел отражает состояние функциональной перегрузки при определенной морфологической картине, не позволяющей обеспечить неспецифическую резистентность к действию неблагоприятных факторов внешней среды на этапе позднего онтогенеза из-за склерозирования и снижения процессов лимфопоэза.

Анализ полученных данных указывает, что сочетанная озоно- и фитотерапия обладают иммуномодулирующим эффектом действия на структурно-функциональные зоны лимфатического узла. Сочетание озонаппликации с приемом фитосбора вносит свой вклад в изменение структурно-функциональных зон пахового лимфатического узла в изучаемый возрастной период. На фоне озоно- и фитокоррекции у старых животных в лимфатическом узле отмечено статистически значимое уменьшение в 1,3 раза площади коркового плато, в 1,8 раза площади мозгового синуса на фоне увеличенного размера отдельных мякотных тяжей и увеличение в 1,8 раза площади лимфоидных узелков с герминативным центром. Соотношение лимфоидных узелков с герминативным центром и без него имеет высокое значение, равное 1,94, что отражает степень активной лимфопролиферации в герминативном центре. Сочетанная озоно- и фитотерапия влияет на гуморальный иммунитет, судя по изменению В-зависимых зон. Отмеченное уменьшение средних показателей площади паракортекса сочетается с его гиперплазией в структуре лимфатического узла. Особенностью реализации эффекта сочетания приема фитосбора и озоноаппликации является увеличение площади лимфоидных узелков с герминативным центром с усилением лимфопролиферативных процессов, что обусловливает усиление иммунной и дренажно-детоксикационной функции лимфатического узла с повышением неспецифической резистентности в целом.

В условиях озоно- и фитотерапии на позднем этапе онтогенеза усиливаются процессы, приводящие к фрагментации лимфатического узла за счет обособления выступающих отделов коркового вещества (рис. 1). При этом вне лимфатического узла отмечаются отдельно лежащие лимфоидные (узелки) фолликулы с плотным расположением лимфоидных клеток (рис. 2). Они появляются в ответ на озоно- и фитотерапию, проведенные на позднем этапе онтогенеза. Их можно рассматривать как новообразованные лимфатические узлы, имеющие размер до 1 мм. В их структуре преобладают клеточные элементы коркового вещества. Артерий и вен, ворот, характерных для основного лимфатического узла, не обнаруживается. Чаще всего они располагаются возле полюса крупного лимфатического узла. В то же время зафиксирована эктопия лимфоидных узелков в мозговом веществе лимфатического узла после сочетанной озоно- и фитотерапии у старых животных (рис. 3). Образование на позднем этапе онтогенеза новых лимфоидных фолликулов как вне, так и внутри лимфоузла, следует рассматривать, как компенсаторную реакцию при изменении условий лимфотока в результате сочетанной озоно- и фитотерапии. Применение озоно- и фитотерапии обеспечивает активное лимфообразование и лимфоток через лимфоузел, что обеспечивает структурную целостность компартмента и повышение иммунной и дренажно-детоксикационной функций, не смотря на склеротические и атрофические процессы. Считаем, что для соматического пахового лимфатического узла обнаруженный факт неолимфогенеза на позднем этапе онтогенеза проявляется за счет фрагментации основного узла и эктопического расположения новообразованных лимфоидных структур (фолликулов), что важно для повышения неспецифической резистентности организма на позднем этапе онтогенеза.

Способ обеспечивает повышение неспецифической резистентности за счет реорганизации структуры и функции лимфатического узла с усилением неолимфоаденогенеза после сочетанной озоно- и фитотерапии, что проявляется повышением иммунного статуса лимфатического узла и образованием лимфоидных структур (фолликулов) как внутри, так и вне основного лимфатического узла на этапе позднего онтогенеза.

ЛИТЕРАТУРА

Арефьева И.С. Эффективная терапия заболеваний, передающихся преимущественно половым путем (ЗППП) в амбулаторных условиях / И.С. Арефьева, А.В. Байбаков // Материалы III Международного конгресса «Эндоэкологическая медицина» и Первой международной школы «Эндоэкологической медицины». Республика Кипр, 21-28 октября 2007 г. - М.: ОАО «Щербинская типография», 2007. - С. 29-30.

Банул Н.В. Структура стенки тонкой кишки и ее лимфатического региона в условиях применения химиотерапевтических средств с последующей коррекцией экстрактом курильского чая в эксперименте. Автореферат дисс. … канд. мед. наук. - Новосибирск, 2005. - 18 с.

Бородин Ю.И., Асташова Т.А., Асташов В.В., Горчаков В.Н., Савицкая И.В. Биостимулирующее средство и способ лечения соматических заболеваний. Патент на изобретение №2149013. Приоритет от 15.02.1999 г.

Бухман В.М., Переверзева Э.Р., Бодягин Д.А., Трещалин И.Д., Филов В.А., Беркович A.M., Кривошеев С.Е. Научное открытие: «Свойство продуктов глубокого гидролиза лигнина, содержащих гуминовые кислоты, вызывать эктопический неогенез лимфатических узлов в мышечных тканях животных». Приоритет открытия от 23 июля 2002 г. Диплом №233. (Российская академия естественных наук, Международная академия авторов научных открытий и изобретений, Международная ассоциация авторов научных открытий). Научные открытия (Сборник кратких описаний научных открытий, научных гипотез - 2003 г.). - Москва, 2004. - Вып. 2. - С. 20-22.

Ганцев Ш.Х. Способ моделирования неолимфогенеза в эксперименте. Патент на изобретение №2422914. Начало действия патента: 17 февраля 2010 г., дата публикации: 27 июня 2011 г.

Гелашвили О.А. Вариант периодизации биологически сходных стадий онтогенеза человека и крысы // Саратовский научно-медицинский журнал, 2008. - Т. 4. - №22. - С. 125-126.

Майбородин И.В. Дистопия лимфоидных фолликулов в лимфатических узлах после полихимиотерапии как возможный показатель их регенерации / И.В. Майбородин, В.И. Майбородина, С.В. Позднякова, О.Р. Грек, Н.В. Банул // Клиническая онкология: журнал «Ассоциации онкологических организаций Сибири», 2004. - №2. - С. 4-7

Майбородина В.И. Общие и специфические закономерности реакции лимфатических узлов различных регионов на неоадъювантную терапию при раке (экспериментально-клиническое исследование). Автореферат дисс. … докт. мед. наук. - Барнаул, 2009. - 32 с.

Минаева Е.В. Неспецифическая иммунологическая резистентность у крыс с различной прогностической устойчивостью к стрессорным воздействиям: Специальность 03.03.01 - физиология. Автореферат дисс. … кандидата биологических наук. - Казань, 2011. - 23 с.

Переверзева Э.Р. Патоморфологические аспекты прогнозирования побочного действия и специфической активности новых противоопухолевых препаратов и средств сопровождения цитостатической терапии в доклинических исследованиях. Автореферат дисс. … доктор биол. наук: специальность: 14.00.14 онкология 14.00.25 фармакология. - Москва, 2007. - 36 с.

Переверзева Э.Р. Патоморфологическое изучение местно-тканевых реакций и состояния центральных и периферических иммунокомпетентных органов при внутримышечном введении олипифата / Э.Р. Переверзева, Д.А. Бодягин, И.Д. Трещалин, В.М. Бухман [и др.] // В кн.: Опыт доклинического исследования на примере олипифата / под ред. В.А. Филова, A.M. Берковича. - СПб.: Ника, 2002. - С. 200-205.

Переверзева Э.Р., Препарат олипифат - индуктор неогенеза лимфоузлов / Э.Р. Переверзева, Д.А. Бодягин, И.Д. Трещалин, В.А. Филов [и др.] // Материалы X Международного Съезда «ФИТОФАРМ 2006». - СПб., 2006. - С. 25.

Преображенская М.Н., Бухман В.М., Переверзева Э.Р., Королев А.М., Резникова М.И., Трещалин М.И., Трещалин И.Д., Мирчинк Е.П., Бодягин Д.А., Садовников С.В., Соснов А.В. Способ повышения неспецифической резистентности организма / Патент РФ №2235543 от 10 сентября 2004 г.

Филов В.А. Изучение отдаленных эффектов олипифата / В.А. Филов, Т.А. Гуськова, В.В. Худолей, Ю.А. Ревазова // Экспериментальная онкология, 2003. - №4. - С. 256-259.

Янова Н.А. Экспериментально-клиническое обоснование применения радиохирургии и местной озонотерапии в комплексном лечении больных с предраковыми заболеваниями слизистой оболочки полости рта. Автореферат дисс. … канд. мед. наук. - Нижний Новгород, 2009. - 23 с.

Mazzucchelli L. ВСА-1 is highly expressed in Helicobacter pylori-induced mucosa-associated lymphoid tissue and gastric lymphoma / L. Mazzucchelli, A. Blaser, A. Kappeller [et al.] // J. Clin. Invest. - 1999. V. 104. - P. R49-R54.

Okamoto N. Artificial lymph nodes induce potent secondary immune responses in naive and immunodeficient mice / N. Okamoto, R. Chihara, C. Shimizu, S. Nishimoto and T. Watanabe // J. Clin. Invest., 2007. Apr. - V. 117(4). - P. 997-1007. Epub 2007 Mar 15. RU 2220459 C1, 27.12.2003. RU 2178294 C2, 20.01.2002. US 6037520 A, 14.03.2000.

Ruddle N.H. Lymphoid neo-organogenesis - Lymphotoxin′s role in inflammation and development // Immunol. Res. - 1999. - V. 19. - №2-3. - P. 119-125.

Weyand C.M. Ectopic lymphoid organogenesis. A fast track for autoimmunity / C.M. Weyand, P.J. Kurtin, J.J. Goronzy // Am. J. Pathol. - 2001. - V. 159. - P. 787-793.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для повышения неспецифической резистентности организма. Для этого вводят фитосбор лекарственных растений Сибири в суточной дозе 0,15 мг/кг в течение месяца в составе в мас.% лекарственные растения: корень бадана - 4, красный корень (копеечник чайный) - 4, родиола розовая - 2, лист бадана - 2, лист черники - 1,6, лист брусники - 1,6, лист смородины - 1,6, шиповник майский - 1,6, чабрец - 1,6) и сорбционный компаунд пищевых волокон (отруби пшеничные - 60, толокно овсяное - 20) и одновременно проводят аппликацию на область бедра и паховой области посредством озонированного оливкового масла по 15-20 минут через день, на курс 14 процедур. Способ обеспечивает повышение иммунного статуса лимфатического узла и образование лимфоидных структур как внутри, так и вне основного лимфатического узла на этапе позднего онтогенеза за счет реорганизации структуры и функции лимфатического узла. 3 ил., 1 табл.

Способ усиления неолимфоаденогенеза для повышения неспецифической резистентности организма, отличающийся тем, что используют фитосбор лекарственных растений Сибири в суточной дозе 0,15 мг/кг в течение месяца в составе в мас.% лекарственные растения: корень бадана - 4, красный корень (копеечник чайный) - 4, родиола розовая - 2, лист бадана - 2, лист черники - 1,6, лист брусники - 1,6, лист смородины -1,6, шиповник майский - 1,6, чабрец - 1,6) и сорбционный компаунд пищевых волокон (отруби пшеничные - 60, толокно овсяное - 20) и одновременно проводят озоноаппликацию на область бедра и паховой области посредством озонированного оливкового масла по 15-20 минут через день, на курс 14 процедур.