СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ НАПРАВЛЕННОЙ ДОСТАВКИ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА Российский патент 1997 года по МПК A61K47/48 A61K38/00 

Изобретение относится к медицине и биотехнологии, а более конкретно, к способам получения лекарственных форм, обеспечивающих селективную (направленную) доставку лекарства к органам больного за счет использования инертных носителей (компонентов), связанных и лекарственным средством, координационными, дисперсионными или иными химическими связями.

Известен способ получения препаратов для направленной доставки лекарства в печень больного, включающий выделение компонентов и синтез биполярных липидов, химическое коньюгирование, совмещение биполярных липидов с лекарственными препаратами и растворение в фосфатном буфере[1]
Известен способ получения препаратов для направленной доставки лекарства или контрастирующего вещества в кости (скелет) теплокровного животного (человека), включающий выделение компонентов и синтез биполярных липидных мембран сферической формы, химическое коньюгирование и хемосорбцию гидроксиапатита [2] Способ позволяет создать в костях локальную концентрацию лекарства, превышающую его содержание в печени в 25 30 раз.

Наиболее близким к предлагаемому является способ получения препаратов для направленной доставки противоопухолевого лекарства в раковую клетку, включающий обработку сыворотки из пуповинной крови человека, содержащей альфа-фетопротеин, путем ее фильтрации, центрифугирования и стерилизации, химическую конъюгацию противоопухолевого лекарства доксорубицина с арахидоновой кислотой в эквимолярном соотношении и прединкубацию путем смешивания обработанной сыворотки с содержанием альфа-фетопротеина до 80 мг с 20 мг коньюгата за 1 2 ч до внутривенного введения [3]
Недостаток известного технического решения ограниченная область применения способа, необходимость раздельного хранения компонентов и приготовления препарата за 1 2 ч до применения.

Задача, на решение которой направлено настоящее изобретение, расширение функциональных возможностей способа, выраженное расширенным ассортиментом препаратов с направленной доставкой лекарственных средств, а также возможность заблаговременного приготовления препарата и длительного его хранения.

Поставленная задача решена тем, что в способе получения препарата для направленной доставки лекарства сыворотку крови человека обрабатывают гепарином и хлоридом кальция или хлоридом марганца с выделением липопротеина в виде водного раствора концентрацией 10±5 мг/мл, для совмещения с липопротеином используют лекарственное средство, выбранное из группы, включающей антибиотик, витамин, противоопухолевое средство и гормон, совмещение липопротеина с указанным лекарственным средством осуществляют при их массовом соотношении (2 50) 1, соответственно, и температуре 4±2^oC в течение 6 18 ч, в полученном препарате определяют содержание липопротеина иммунохимическим тестированием и по результатам тестирования добавляют к препарату липопротеин в количестве, необходимом для восстановления исходного массового соотношения компонентов (2 50) 1, с последующей стерилизацией и консервацией препарата.

При выделении в зависимости от режима обработки сыворотки донорской крови может быть получен липопротеин низкой или высокой плотности, различные свойства которого обеспечивают селективность доставки лекарства при применении препаратов. Липопротеин после выделения могут подвергать химической модификации путем ацетилирования, окисления, гликозирования или включения в иммунные комплексы.

Пример 1. Получают препарат для направленной доставки витамина E в очаги повреждения на поверхности кожи больного псориазом. Выделяют липопротеины из биологического материала сыворотки крови донора. К 100 л сыворотки донора добавляют 10 мл 0,5% раствора гепарина и 10 мл 20% раствора хлорида кальция. Смесь тщательно перемешивают и термостатируют при 4^oC 24 ч. После термостатирования смесь центрифугируют при 8000 g в течении 15 мин. Полученный осадок растворяют в 0,2 M растворе гидрофосфата натрия и разбавляют до концентрации липопротеинов низкой плотности 1 мас. (10 мг/мл). Раствор липопротеинов совмещают с витамином E в массовом соотношении 2 1 и термостатируют при 4^oC в бытовом холодильнике 12 ч.

Проводят тестирование смеси по методу двойной иммунодиффизии в агаровом геле с применением стандартных моноспецифических тест систем на сохранность антигенных детерминант ano белков и по результатам тестирования уточняют концентрацию липопротеинов. Концентрация липопротеинов в смеси после совмещения с лекарством составляет 90% от расчетной. Дополняют недостающий компонент 3,5 мл раствора липопротеина для восстановления расчетного массового соотношения компонентов в препарате для направленной доставки витамина липопротеин витамин E 2 1. Полученный препарат стерелизуют, разливают в ампулы и лиофилизируют.

Для использования в виде внутривенных инъекций препарат растворяют в стерильной дистиллированной воде.

Пример 2. Получают препарат для направленной доставки витамина A в очаги повреждения на поверхности кожи больного псориазом по примеру 1, но вместо витамина E липопротеины низкой плотности совмещают с витамином A в массовом соотношении 20 1.

Из полученного препарата готовят мазь. В результате нанесения мази на поверхность эпидермиса витамин A накапливается в кератиноцитах базального слоя, что обеспечивает исчезновение шелушения эпидермиса.

Пример 3. Получают препарат для направленной доставки антибиотика - ловастатина в печень больного атеросклерозом, или ишемической болезнью сердца. Выделяют липопротеины из биологического материала сыворотки крови донора. К 100 л сыворотки донора добавляют 10 мл 0,5% раствора гепарина и 10 мл 20% раствора хлорида марганца. Смесь тщательно перемешивают и термостатируют при 4^oC 24 ч. После термостатирования центрифугируют при 8000 g в течение 15 мин. К полученному супернатанту добавляют 10% раствор декстрансульфата в объемном соотношении 10 1, перемешивают и ставят в холодильник (4^oC) на 2 ч. После этого центрифугируют при 8000 g в течении 30 мин, полученный осадок растворяют в 0,2 M растворе двузамещенного фосфата натрия. Дополнительно центрифугируют при 8000 g в течении 20 мин. Раствор диализуют против дистиллированной воды в течении 2 сут.

Инкубируют липопротеины высокой плотности с ловастатином в массовом соотношении 10 1 в течении 12 ч в холодильнике (4^oC).

Проводят иммунохимическое тестирование смеси на сохранность антигенных детерминант ano белков и по результатам тестирования уточняют концентрацию липопротеинов.

Концентрация липопротеинов в смеси после совмещения с лекарством составляет 85% от расчетной. Дополняют недостающий компонент 2,1 мл раствора липопротеина для восстановления расчетного массового соотношения компонентов в препарате (липопротеин: ловастатин) 10 1. Полученный препарат стерелизуют, разливают в ампулы и лиофилизируют. Для использования в виде внутривенных инъекций препарат растворяют в стерильной дистиллированной воде.

Пример 4. Получают препарат для направленной доставки циклоспорина в щитовидную железу больного с аутоимунным тироидитом Хашимото по примеру 1, но вместо витамина E липопротеины низкой плотности совмещают с циклоспорином в массовом соотношении 10 1.

Пример 5. Получают препарат для направленной доставки хризомалина в меланому больного по примеру 1, но вместо витамина E липопротеины низкой плотности совмещают с хризомалином в массовом соотношении 30 1.

Пример 6. Получают препарат для направленной доставки актиномицина D в клетки слизистой оболочки мочеполовых путей больного с хламидиозом по примеру 1, но вместо витамина E липопротеины низкой плотности совмещают с актиномицином D в массовом соотношении 40 1. Из полученного препарата готовят болтушку.

Пример 7. Получают препарат для направленной доставки рубомицина в очаги атеросклеротического повреждения сосудов больного с атеросклерозом или ишемической болезнью сердца по примеру 1, но перед совмещением с рубомицином к раствору липопротеинов низкой плотности добавляют 10 мл 5 мкМ сульфата меди и инкубируют 3 ч при температуре 20^oC. После этого диализуют против 0,2 M раствора двузамещенного фосфата натрия в течении 2 сут. После этого совмещают с рубомицином в массовом соотношении 20 1.

Пример 8. Получают препарат для направленной доставки эстрадиола в очаги псориатического повреждения эпидермиса больных псориазом по примеру 1, но вместо витамина E липопротеины низкой плотности совмещают с эстрадиолом в массовом соотношении 15 1.

Пример 9. Получают препарат для направленной доставки витамина E в очаги повреждения на поверхности кожи больного псориазом по примеру 1, но липопротеины низкой плотности совмещают с витамином E в массовом соотношении 10 1.

Пример 10. Получают препарат для направленной доставки витамина E в очаги повреждения на поверхности кожи больного псориазом по примеру 1, но липопротеины низкой плотности совмещают с витамином E в массовом соотношении 20 1.

Пример 11. Получают препарат для направленной доставки витамина E в очаги повреждения на поверхности кожи больного псориазом по примеру 1, но липопротеины низкой плотности совмещают с витамином E в массовом соотношении 50 1.

Пример 12. Получают препарат для направленной доставки витамина Е в очаги повреждения на поверхности кожи больного псориазом по примеру 1, но липопротеины низкой плотности совмещают с витамином E в течение 6 ч.

Пример 13. Получают препарат для направленной доставки витамина E в очаги повреждения на поверхности кожи больного псориазом по примеру 1, но липопротеины низкой плотности совмещают с витамином E в течение 18 ч.

Пример 14. Получают препарат для направленной доставки витамина E в очаги повреждения на поверхности кожи больного псориазом по примеру 1, но липопротеины низкой плотности совмещают с витамином E при температуре 2^oC.

Пример 15. Получают препарат для направленной доставки витамина E в очаги повреждения на поверхности кожи больного псориазом по примеру 1, но липопротеины низкой плотности совмещают с витамином E при температуре 4^oC.

Пример 16. Получают препарат для направленной доставки рубомицина в очаги атеросклеротического повреждения сосудов больного с атеросклерозом или ишемической болезнью сердца по примеру 1, но производят химическую модификацию липопротеинов низкой плотности путем ацетилирования белка. Перед совмещением с антибиотиком к раствору липопротеинов низкой плотности добавляют 10 мл 0,1 M раствора уксусного ангидрида и инкубируют 2 ч при температуре 20^oC. После этого диализуют против 0,2 M раствора двузамещенного фосфата натрия в течении 2 сут. После этого совмещают с рубомицином в массовом соотношении 20 1.

Пример 17. Получают препарат для направленной доставки хризомалина в меланому больного по примеру 1, но вместо витамина E липопротеины низкой плотности совмещают с хризомалином в массовом соотношении 40 1.

Источники информации:
1. Пат. США N 4.603.044, кл. 428/402.2, 1986.

2. Пат. США N 4.942.036, кл. 424/425, 428/402.2, 1990.

1. Пат. РФ, 2026687, кл.A 61 K 38/00, 1995 прототип.

Использование: в медицине, для направленной доставки лекарственного средства. Сущность изобретения: способ получения препарата для направленной доставки лекарственного средства включает обработку сыворотки крови человека гепарином и хлоридом кальция или марганца с выделением липопротеина в виде водного раствора концентрацией 10±5 мг/мл. Выделенный липопротеин совмещают с лекарственным средством, выбранным из группы, включающей антибиотик, витамин, противоопухолевое средство и гормон. Совмещение липопротеина с лекарственным средством осуществляют при их массовом соотношении (2 - 50) : 1, соответственно, температуре 4±2^oC в течение 16 - 18 ч. В полученном препарате определяют содержание липопротеина иммунохимическим тестированием и по результатам тестирования добавляют к препарату липопротеин в количестве, необходимом для восстановления исходного массового соотношения компонентов (2 - 50) : 1, с последующей стерилизацией и консервацией препарата. После обработки гепарином и хлоридом марганца сыворотку крови дополнительно обрабатывают декстрансульфатом. Липопротеин после выделения может быть химически модифицирован путем ацетилирования, окисления, гликозирования или включения в иммунные комплексы. 9 з.п. ф-лы.

1. Способ получения препарата для направленной доставки лекарственного средства, включающий обработку сыворотки крови человека и совмещение протеина с лекарственным средством, отличающийся тем, что сыворотку крови человека обрабатывают гепарином и хлоридом металла, выбранным из хлорида кальция и хлорида марганца, с выделением липопротеина в виде водного раствора с концентрацией 10 ± 5 мг/мл, для совмещения с липопротеином используют лекарственное средство, выбранное из группы, включающей антибиотик, витамин, противоопухолевое средство и гормон, совмещение липопротеина с указанным лекарственным средством осуществляют при их массовом соотношении (2 50) 1 соответственно и температуре 4 ± 2^oС в течение 6 18 ч, в полученном препарате определяют содержание липопротеина иммунохимическим тестированием и по результатам тестирования добавляют к препарату липопротеин в количестве, необходимом для восстановления исходного массового соотношения компонентов (2 50) 1, с последующей стерилизацией и консервацией препарата. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что сыворотку крови человека после обработки гепарином и хлоридом марганца дополнительно обрабатывают декстрансульфатом. 3. Способ по по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что после выделения липопротеин подвергают химической модификации путем ацетилирования. 4. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что после выделения липопротеин подвергают химической модификации путем окисления. 5. Способ по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что после выделения липопротеин подвергают химической модификации путем гликозирования. 6. Способ по любому из пп. 1 и 2, отличающийся тем, что после выделения липопротеин подвергают химической модификации путем включения в иммунные комплексы. 7. Способ по любому из пп. 1 6, отличающийся тем, что для совмещения с липопротеином используют антибиотик, выбранный из группы, включающей хризомалин, циклоспорин, бензилпенициллина новокаиновую соль, бицилин-1, тетрациклин, левомицетин, эритромицин, актиномицин-Д, рубомицин, ловастатин, симвастатин, правастатин. 8. Способ по любому из пп. 1 6, отличающийся тем, что для совмещения с липопротеином используют витамин, выбранный из групп А, D, Е, К. 9. Способ по любому из пп. 1 6, отличающийся тем, что для совмещения с липопротеином используют противоопухолевый препарат, выбранный из группы, включающей асалин, хлорбутин, этимидин, миелобромол, хризомалин, рубомицин гидрохлорид, фосфоэстрол, медротестерона пропионат. 10. Способ по любому из пп. 1 6, отличающийся тем, что для совмещения с липопротеином используют гормон, выбранный из группы, включающей кортизон, гидрокортизон, преднизолон, эстрон, эстрадиол бензоат, синэстрол, прогестерон, прегнин, тестостерон пропионат, метилтестостерон.