СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КОЖНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Российский патент 1997 года по МПК A61K35/78 

Изобретение относится к органической химии, в частности к способам получения биологически активных соединений и препаратов из растительного сырья, которые могут быть использованы в качестве противовоспалительных, противозудных, рассасывающих, редуцирующих, смягчающих, антивирусных, бактерицидных средств в медицине, ветеринарии, в качестве добавок в парфюмерии, а также красящих и оттеночных средств и композиций.

Аналогом по составу и характеру биологической активности является хризаробин природный продукт, который накапливается в пустотах тропического дерева Andiza oraroba, культура которого в условиях нашей страны оказалась невозможной.

Показателем качества препарата является содержание в нем восстановленных форм антрахинонов. Лучшие аптечные образцы хризаробина, поступавшие из Индии и Китая в 50-60-е годы содержали до 80 суммы восстановленных форм. Известные способы получения аналогов природного хризаробина включают 3 стадии:
получение суммы антрахинонов из растений;
очистка суммы антрахинонов;
восстановление этой суммы (химическое, электрохимическое, каталитическое, В. Б. Омуркамзинова, Алматы, 1960; А. С. Романова и А.И. Баньковский. "Медицинская промышленность СССР". 1963, с. 26-31).

Способов выделения суммы антрахинонов из растительного сырья описано много. Все они сводятся к следующему: если в растениях содержатся антрагликозиды, сырье подвергают гидролизу кислотами (Романова А.С. Баньковский А.И. "Лекарственные растения". Сб. трудов ВИЛР. М. 1970; патент ФРГ N 115811, 1965; ГФ Х изд. с. 210-240).

Выход суммы антрахинонов зависит от сырья и, как правило, не превышает 70 от содержания антрахинонов в сырье. Кроме того, каждый из описанных методов экстракции имеет свои недостатки. Например, спирты, ацетон, смеси растворителей, максимально извлекая антрахиноны, извлекают и другие группы природных соединений, поэтому стадия очистки суммы, отделения от сопутствующих веществ часто бывает более сложной, чем собственно экстракция. Ацетон, хлороформ, эфир извлекают из растений смолы и липофильные вещества, их особенно много в хлороформенных и этилацетатных извлечениях. Органические растворители с т. кип. до 100^oC расходуются в больших количествах на стадии концентрирования и при очистке суммы антрахинонов. Экстракция смесями растворителей приводит к еще большим потерям, поскольку на стадии концентрирования они практически не возвращаются.

Наиболее близким по технической сущности является способ получения хризаробина (авт. св. N 248161), где ревень тангутский экстрагируют при нагревании изопропиловым спиртом, подкисленным соляной кислотой. Экстракт упаривают до небольшого объема и выливают в воду. Осадок отделяют и трижды обрабатывают хлороформом. Хлороформное извлечение концентрируют, сухой остаток кристаллизуют и подвергают восстановлению хлористым оловом в смеси ледяной уксусной и концентрированной соляной кислот при кипячении смеси и перемешивании. Общий выход 66,4 от содержания в исходном сырье. Известен аналогичный метод ("Лекарственные вещества из растений и способы их производства". Ташкент. 1980, с. 221). Здесь указан выход 63,2 от содержания в сырье, а выход целевого продукта хризаробина 41
Недостатками указанного способа является коррозия аппаратуры от действия агрессивных жидкостей, низкий выход целевого продукта, многостадийность процесса, загрязнение сточных вод кислотами и органическими растворителями.

Задачей изобретения является расширение сырьевой базы растений (культивируемые и дикорастущие), которые имеют промышленные запасы, и оптимизация процесса восстановления суммы антрахинонов до форм антроно-анронолей (действующие вещества препарата), не затрагивая ароматическую систему антрахинонов.

В соответствии с поставленной задачей предлагается способ получения средства для лечения кожных заболеваний, основанный на экстракции суммы антрахинонов из растительного сырья органическими растворителями полярными или неполярными в зависимости от вида сырья, который отличается от известного тем, что на стадии экстракции не используют кислоту, а восстановление ведут на катализаторе в среде экстрагента или диоксана при температурах 5-75^oC. Агрессивных жидкостей нет.

Метод каталитического восстановления водородом отличается от химических методов восстановления и от прототипа тем, что может быть управляемым и контролируемым, его можно остановить в любой нужный момент реакции, дозировать количество водорода, скорость его подачи, количество катализатора, температуру процесса, скорость перемешивания, иметь информацию о кинетике и механизме этой реакции.

Пример 1. 1 кг измельченного сырья (корни щавеля тянь-шанского) заливают изопропиловым спиртом в соотношении сырье:растворитель 1:5. Экстракцию ведут при температуре 70^oC в течение 2 ч. Спиртовый экстракт сливают, а корни вновь заливают изопропиловым спиртом и экстрагируют в тех же условиях еще 2 раза по 2 ч. Изопропиловые экстракты объединяют, концентрируют в вакууме при 60^oC до начала выпадения осадка. Остаток разбавляют 7-кратным избытком 2 водной соляной кислоты. Сумма антрахинонов выпадает в осадок, последний отфильтровывают, отмывают на фильтре водой и высушивают на воздухе. Выход суммы составляет 80-85 Сухую сумму антрахинонов направляют на восстановление, которое осуществляют водородом на катализаторе 10 PdCl в растворе диоксана при температуре 5-10^oC и скорости перемешивания 600 кач./мин. После установления монотонно убывающей скорости поглощения водорода, процесс останавливают, катализатор отфильтровывают, а целевой продукт высаживают водой и сушат. Выход субстанции составляет 95-97 т.е. потери на стадии восстановления и осаждения не превышают 3-5
Пример 2. 1 кг корней любого вида щавелей, ревеней, марен, измельченной коры крушины экстрагируют изопропиловым спиртом методом противотока 5 раз по 2 ч при температуре 70^oC. Экстракты объединяют, концентрируют, осаждают сумму антрахинонов 2-5 соляной кислотой. Выпадающий при этом осадок отфильтровывают, промывают водой, высушивают и передают на стадию восстановления, которую осуществляют аналогично примеру 1 с использование 1 PdCO₃ при температуре 40-50^oC. Выход целевого продукта составлял 90-96
Пример 3. 1 кг сырья заливают неполярным растворителем в соотношении 1:3 (бензол, толуол, ксилол, бензин, керосин, гексан, гептан и др.) и экстракцию ведут методом противотока при температурах на 20^o ниже температуры кипения выбранного растворителя, но не выше 100^oC. Полученный экстракт концентрируют досуха в вакууме и передают на стадию гидрирования, которое осуществляют в среде экстрагента или диоксана при температуре 30-60^oC, выход суммы антрахинонов от сырья составляет при этом 80-95 а целевого продукта 95-98
Пример 4. Экстракцию сырья проводят аналогично примеру 1 или 2, а восстановление осуществляют в среде диоксана на скелетном никелевом катализаторе при температуре 20-70^oC. При скорости перемешивания 600-800 кач/мин выход целевого продукта составляет 98-99
Пример 5. Экстракцию сырья проводят по примеру 3. После отгонки основного количества экстрагента суммы антрахинонов извлекают обработкой концентрата 5 водным раствором щелочи с последующим осаждением из щелочного раствора суммы антрахинонов 3-5 водной соляной кислотой. Осадок отмывают водой, сушат и восстанавливают на сплавных катализаторах, например никель алюминий
хромовый сплав. Целевой продукт с высоким выходом получают также при использовании смешанных катализаторов, таких, как CoAlCr, CoZn/Al₂O₃. Эти катализаторы используют в среде любого органического растворителя (полярного или неполярного) при температурах от 10 до 75^oC при скорости перемешивания 700-800 кач./мин. Выход при этом составляет 88-96
Таким образом, предлагаемый способ получения препарата позволяет использовать промышленно доступное культивируемое или дикорастущее сырье с содержанием антраценовых не менее 1 Независимо от качественного набора производных антрахинона предлагаемый способ обеспечивает максимальную экстракцию суммы антрахинонов. Значительно упрощается технология производства за счет возможности использования экстрагента или диоксана на стадии восстановления. Предлагаемый ассортимент катализаторов и способ восстановления делают процесс контролируемым, что обеспечивает высокое качество субстанции, т. к. катализаторы селективны при температурах от 5 до 75^oC. Выше указанного предела температуры препарат теряет внешний вид и активность, что подтверждено медико-биологическими исследованиями и методами стандартизации параметров подлинности.

Под названием "препарат ХПС-1" прошел все стадии предклинического и клинического изучения и решением Фармакологического комитета Минздрава России (приказ N 158 от 29 июля 1994) разрешен для медицинского применения и промышленного выпуска в виде субстанции и 2 мази для лечения псориаза и др. поражений кожи. Утверждена Инструкция по его применению, имеются Регистрационные удостоверения на порошок и 2 мазь. Приказом МЗ России препарат и мазь включены в Государственный реестр разрешенных к применению препаратов медицинского назначения (приказ тот же, N 158).

Результаты необходимых медико-биологических исследований приведены в Информации о препарате ХПС-1, которая подготовлена для Минздрава России.

Информация о препарате "ХПС-1".

Препарат из растения, предназначен для наружного применения при псориазе, экземе и других поражениях кожи. Может быть использован для лечения волосистой части головы с одновременным подкрашиванием в золотистый цвет или оттенки красного дерева в зависимости от pH среды. Пригоден для использования в составе лечебного мыла, шампуней, кремов, паст, золей, пластырей, карандашей и др.

Препарат обладает противовоспалительным, противозудным, рассасывающим, смягчающим, редуцирующим действием.

Препарат нетоксичен, хорошо всасывается в кожу, хорошо переносится больными, 7-летние клинические наблюдения не выявили противопоказаний к его применению у взрослых и детей. Препарат не обладает аллергизирующей активностью, ЛД/50 для мышей при внутрибрюшинном введении 230 мг/кг.

Возможна регенерация по истечении сроков его хранения или при неправильном его хранении, что позволит экономить растительное сырье для его получения.

Противозудный эффект наблюдается после 1-3-разового смазывания очагов поражения. На 2-4-й день наблюдается уменьшение гиперемии, рассасывание инфильтрата, значительное уменьшение или полное прекращение зуда, очаги поражения очищаются от псориатических бляшек. Излечивает герпес, особенно эффективен в начале процесса.

В отличие от синалара, флуцинара, лориндена C, H, локакортена, ультралана, оксикорта, нистатина, канестена, клотримазола не ингибирует кроветворную и ферментную системы человека.

Предполагаемый механизм действия препарата: участие в окислительно-восстановительных процессах организма и мембранный на пораженных участках кожи и в подклеточном слое.

При клиническом исследовании больные делились по давности заболевания в группе псориаза от 9 до 28 лет, в группе больных экземой от 3 месяцев до 10 лет, остальные от 1 до 17 лет. По возрасту больные были от 5 до 57 лет. Курс лечения длился 1-3 недели, в случаях рецидива повторялся. Концентрация мазей и раствором 1-10 Отмечена максимальная эффективность при нанесении мази после удаления бляшек термопроцедурами или механически. Через каждый 10 дней проводились анализы крови, мочи. Проверялась активность альдолазы и транскетолазы в крови и на поверхности кожи. Изучалась антитоксическая функция печени, углеводный (сахар в крови) и белковый обмен (общий белок, белковые фракции). Исследования, проведенные в динамике, не выявили отклонений от первоначальных величин. Все больные выписаны со значительным улучшением или полным клиническим излечением.

Острая и хроническая токсичность изучены на белых мышах, крысах и кроликах. В течение 10 дней после введения соответствующих доз наблюдали состояние животных.

Изучены дозы 40, 80, 120, 160, 200, 220, 240, 280, 320 мг/кг веса животного.

При введении препарата в дозах от 220 до 320 мг/кг отмечено повышение рефлекторной возбудимости, появление одышки, иногда клиникотонические судороги и 3 случая (около 1) гибели мышей от остановки дыхания.

После 6-кратного повторного введения препарата кроликам по 40 мг/кг в течение суток наблюдался слабительный эффект. При 30-кратном повторном применении 10 мази существенных изменений со стороны общего состояния животных не наблюдалось. После 40-кратного применения мази в дозе 30 мг/кг животных забивали и подвергали макро- и микроскопическому исследованию. Гистология внутренних органов (сердце, легкие, печень, почки, селезенка, желудок, тонкий и толстый отделы кишечника) и кожи, на которую втирали мазь, показала отсутствие патологических изменений.

Аллергизирующая активность изучена на 24 морских свинках весом 12-150 г. Выстриженные участки кожи до и после сенсибилизации сывороткой крупного рогатого скота смазывали 2 мазью в течение 10 дней. Для контроля одна группа животных подвергалась сенсибилизации подкожным введением 0,25 мл сыворотки крупного рогатого скота и введению разрешающей дозы препарата, другая только введению разрешающей дозы. Через 14 дней после сенсибилизации всем группам животных внутрибрюшинно вводили разрешающую дозу (0,5 мл) сыворотки. Реакция у трех первых групп начиналась через 5 мин и продолжалась в течение 30-40 мин. У четвертой группы животных реакция по продолжительности была короткой. Продолжительность и степень реакции животных, сенсибилизированных до и после смазывания мазью, не отличалась от контрольных.

Токсикологические испытания в лаборатории промышленной токсикологии проводили при внутрижелудочном введении 20 раствора препарата на крахмальном геле, малотоксичное вещество, ЛД/50 для мышей 9870 (9055+10758) мг/кг, для крыс 6520 мг/кг. Препарат оказывал слабое раздражающее действие на кожу и слизистые оболочки. Кожно-резорбтивный эффект не установлен. При статическом ингаляционном методе затравки не выявлено раздражающего и токсического действия и случаев гибели животных. ОБУВ аэрозоля препарата в воздухе рабочей зоны производственных помещений составляет 5 мг/м³ (расчетный метод по показателям токсичности) 3 класс опасности ("вещества умеренно опасные").

Фармакокинетика препарата изучена на крысах-самцах линии Вистар массой 140-190 г. Проведено 10 серий опытов, в которых на каждый срок забора биопроб использовали по 6-9 крыс. Для расчета доз препарата животные взвешивались до и после опытов. Варианты опытов: 2 мазь втирали ежедневно в течение 15 суток из расчета 1 г на 1 кг веса на участке 2 х 2 см через каждые 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 6, 9, 12, 24, 48 ч проводился забор мочи и крови. 2 ежедневные аппликации в течение 15 суток с последующей экспозицией в течение 4 ч. В контрольной группе при методе смазывания и аппликаций использовали мазевую основу. Другие серии опытов проводили при однократной внутрижелудочном введении 5 масляной взвеси в дозах 100, 200 и 400 мг/кг веса. В контрольных группах животные получали подсолнечное масло в том же объеме, что и препарат.

Наличие препарата и его метаболитов в биопробах плазмы крови, гомогенатах печени, селезенки, почек, желудка, кишечника определяли во времени от 30 мин до 3 ч через 0,5 ч, а затем через каждые 3 ч до 24 ч и через 6 ч до 48 ч Для всех биопроб записаны хроматограммы, УФ- и ИК-спектры эфирных, толуольных и хлороформных растворов. Показана динамика накопления препарата по органам, пути выведения его из организма и время сохранения препарата до полного окисления.

Мутагенная активность изучена на бактериальных штаммах.

В качестве питательной среды и реактивов использовали ампициллин, ДМСО, Д-биотин, L-гистидин, Д-глюкозо-6-фосфат, НВДФ, фенобарбитал, МПБ, среда М-9, 1,5 минимальный агар с глюкозой, 0,6 минимальный агар. Химические мутагены-N-метил-N-нитрозометилмочевина, 2,6-диамино-4,9-диокси-4,5-9,10-тетрагидро-5,9-диазоперин. Негативным контролем служили варианты с растворителем. Супернатант (С9-фракция) готовилась по специальной методике при 4^oC непосредственно перед опытами. Опыты проводили по известной методике (Амес В и др. 1975) в трех повторностях. Токсичность препарата и его составных частей определяли на 9-дневных куриных эмбрионах в 5-повторностях. Обработка данных показала отсутствие мутагенной активности.

Микробная обсемененность мази 2 изучалась методом высева в 3 повторностях на чашки Петри с питательной средой МПА из серийных разведений исходной лекарственной формы и 100 мл стерильной воды. Содержимое посевов культивировали в термостате при 37^oC в течение 48 ч с последующим подсчетом колоний микроорганизмов в чашках. Микробная обсемененность исследованной 2 мази на ланолиновой основе составляла 4.5.10 на 1 г.

Микробиологическую чистоту субстанции и лекформы проверяли также по методике Государственной фармакопеи СССР ХI издания. Лекарственное средство изучено в концентрациях от 2 до 0,00001 и в 3 повторностях. Показано, что субстанция в концентрации 0,07-0,14 ингибирует рост кишечной палочки, стафилококка и псевдомонад, а в дозах 0,016-0,047 задерживает рост этих культур. Более устойчивы к препарату культуры спорообразующих бактерий и дрожжей, минимальная подавляющая концентрация для них 0,14-0,28 2 мазь полностью ингибирует рост всех использованных тест-культур, МДП 0,2 Лекарственная форма на ланолине ниже 0,2 концентрации антимикробным действием не обладает.

Результаты клинических испытаний представлены в таблице.

В отчетах клиник отмечено, что преимуществом препарата перед традиционными средствами является уменьшение инфильтрации очагов поражения в более короткие сроки (5-10 дней), регресс псориатических высыпаний диссемированных и ограниченных форм. К недостаткам препарата отнесено стойкое окрашивание белья.

На пастбищах препарат был испытан на молодняке крупного рогатого скота и оказался эффективным при повреждениях роговицы глаз и вымени животных (противовоспалительное и ранозаживляющее средство).

По данным института глазных болезней 2 мазь, 1 и 0,5 мазь изучены на кроликах породы шиншилла, у которых моделировали ожоги роговицы средней тяжести кислотой и щелочью, 0,5 мазь изучена на группе больных людей (12 человек). Видимых признаков раздражения слизистых оболочек не отмечено. Морфологическими и цитологическими методами подтверждено положительное влияние препарата на репаративную регенерацию роговицы, ускорение сроков эпителизации роговицы, повышение остроты зрения на 0,1-0,2.

Изобретение относится к медицине, а именно к химико-фармацевтической промышленности, и касается способа получения средства для лечения кожных заболеваний. Сущность способа заключается в экстракции любого антраценсодержащего растительного сырья органическими растворителями, концентрировании, очистки концентрата и восстановлении антрахинонов в присутствии катализатора в среде экстрагента или диоксана при температуре 5-75^oC. Технический результат заключается в получении средства, обладающего широким спектром действия при лечении кожных заболеваний. 1 табл.

Способ получения средства для лечения кожных заболеваний из растительного сырья путем экстракции суммы антрахинонов органическими растворителями, концентрирования и очистки концентрата с последующим восстановлением суммы антрахинонов, отличающийся тем, что восстановление суммы антрахинонов осуществляют в присутствии катализатора в среде экстрагента или диоксана при 5 75^oС.