СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ СТРЕПТОКОККОВ ГРУППЫ В Российский патент 1998 года по МПК A61K39/00 G01N33/543 

Способ относится к микробиологии, а именно к получению препарата, необходимого для проведения иммунологического анализа с целью идентификации стрептококков группы В.

Указанный препарат необходим:
1. для выявления стрептококковой этиологии заболеваний у людей;
2. для контроля за эффективностью лечения больных стрептококковыми заболеваниями;
3. для оценки эффективности профилактики стрептококковых болезней.

Из аналогов известен способ получения препарата для идентификации стрептококков группы В, изложенный в статье периодического издания, который основан на использовании в качестве носителя антител стафилакоккового А-прототипа, что усложняет технологию приготовления препарата и не обеспечивает получения препарата высокого качества.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому является способ, который описан в заявке на изобретение Японии N 63-52708, согласно которому возможно получить препарат для идентификации стрептококков группы В. Указанный способ принят авторами за прототип.

По прототипу необходимый препарат получают путем иммобилизации антитела
гамма-глобулина, иммунного к стрептококку группы В, на поверхности частиц латекса, получаемого на основе полистирола и последующего отделения обработанных латексных частиц. Прототип основан на реакции латексной агглютинации. Недостатком прототипа является сложность технологии получения препарата, заключающаяся в необходимости двукратной обработки латексных частиц составами, включающими антитела, с целью их иммобилизации.

Сущность способа состоит в том, что целевой препарат получают путем иммобилизации гамма-глобулина, иммунного к стрептококку группы В. Процесс включает следующие операции:
1. Смешение антитела гамма-глобулина, иммунного к стрептококку группы В, разбавленного 0,01 М глициново-солевым буферным раствором с рН 8,22, с латексом, разбавленным тем же буферным раствором до содержания латекса в буферном растворе 1% в расчете на полимер. Применяемый латекс представляет собой смесь латекс полистирола с дисперсностью 0,20-0,22 мкм и латекса полистирола с дисперсностью 0,50-0,70 мкм. Объемное соотношение указанных латексов в смеси равно 1:1.

2. Полученную по п.1 смесь инкубируют при 56^oC в течение 30 мин.

3. Смесь, полученную по п.2, охлаждают до 4-6^oC.

4. Охлажденную смесь смешивают с бычьим сыворотным альбумином, предварительно разбавленным 0,01 М глициново-солевым буферным раствором с рН 8,2.

5. В смесь, полученную по п.4, вводят полиэтиленгликоль ПЭГ-6000 и консервант.

6. Компоненты, необходимые для приготовления целевого препарата, берут в следующем соотношении, г/л:
Гамма-глобулин, иммунный к стрептококку группы В 0,24-0,26
Смесь латексов 2,50-2,56
Бычий сыворотный альбумин 0,50-0,55
Полиэтиленгликоль 6000 55,0-65,00
Консервант 0,10-1,00
0,01 М Глициново-солевой буферный раствор с рН 8,20-8,22 Остальное
Предлагаемый способ несложен и обеспечивает получение высокочувствительного препарата.

Авторы утверждают, что способ соответствует критерию изобретательского уровня, т.к. на основании ознакомления с научно-технической и патентной информацией, а также в силу своих опыта и знаний вся совокупность технических признаков предлагаемого способа явным образом не вытекает из уровня техники, имеющей отношение к предлагаемому объекту.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом:
1. Гаммаглобулин, иммунный к стрептококкам группы В, разводят 0,01 М глициново-солевым буферным раствором с рН 8,20 до концентрации 0,8 мг/мл.

2. Полистирольный латекс с размером частиц 0,2 мкм разводят 0,01 М глициново-солевым буферным раствором с рН 8,20 до концентрации 1% полимера.

3. Полистирольный латекс с размером частиц 0,6 мкм, активированный метакрилатом цинка, разводят 0,01 М глициново-солевым буферным раствором с рН 8,2 до концентрации 1% полимера.

4. Подготовленные по пп. 2 и 3 полистирольные латексы смешивают в объемном соотношении 1:1.

5. 10 мл состава, полученного по п.1, смешивают с 10 мл латексной смеси, полученной по п.4.

6. Смесь, полученную по п.5, подвергают инкубированию в водяной бане при 56^oC при 140 колебаниях в 1 мин в течение 30 мин.

7. Смесь, полученную по п.6, охлаждают до 4-6^oC. К охлажденной смеси добавляют 20 мл 0,1%-ного раствора бычьего сывороточного альбумина в 0,01 М глициново-солевом буферном растворе с рН 8,20, содержащего 6% полиэтиленгликоля 6000. В полученную смесь добавляют 0,004 г мертиолята (консерванта).

В результате проведенных операций получен препарат для идентификации стрептококка группы В.

Препарат группы В, изготовленный вышеописанным способом, обладает высокой специфичностью, проявляющейся в отсутствии перекрестных реакций, в отношении антигенов гетерологичных групп этих микроорганизмов.

Результаты исследования чувствительности полученного препарата в реакции латексной агглютинации (РЛА) представлены по следующим тестам:
1) РЛА на стекле с культурами, обработанными химопсином, - 10⁴-10⁵ КОЕ.

2) РЛА на стекле с групповыми полисахаридами, экстрагированными из стрептококков, взятых путем мазка, 10⁴ КОЕ.

3) РЛА на стекле с экстрактами группового полисахарида из отдельных колоний 1 колония.

4) РЛА на стекле с очищенным групповым полисахаридом 2,0 мг 4,0 мг.

Примечание:
1) КОЕ колониеобразующие единицы стрептококка.

2) Чувствительность препарата представлена в соответствующих показателях, содержащихся в одной пробе испытуемого материала (0,05 мл).

Способ получения препарата для идентификации стрептококков группы В. Использование: в медицине, в частности, в микробиологии. Сущность: получение препарата осуществляют путем иммобилизации гамма-глобулина, иммунного к стрептококку группы В, на поверхности частиц полистирольного латекса в присутствии бычьего сыворотного альбумина, полиэтиленгликоля и консерванта и проведении процесса в 0,01 М глициново-солевом буферном растворе с рН 8,20-8,22. Используемый латекс представляет собой смесь полистирольного латекса с дисперсностью 0,20-0,22 мкм и полистирольного латекса с дисперсностью 0,50-0,70 мкм, активированного метакрилатом цинка. Компоненты для получения препарата берут в определенном массовом соотношении. Способ позволяет упростить получение препарата для идентификации стрептококков группы В.

Способ получения препарата для идентификации стрептококков группы B, отличающийся тем, что гамма-глобулин, иммунный к стрептококку группы B, иммобилизуют на поверхности частиц полистирольного латекса и полученный препарат стабилизируют раствором бычьего сывороточного альбумина в присутствии полиэтиленгликоля и мертиолята, причем в качестве полистирольного латекса используют смесь, составленную из равных объемов полистирольного латекса с дисперсностью 0,20 0,22 мкм и полистирольного латекса с дисперсностью 0,50 - 0,70 мкм, активированного метакрилатом цинка, и процесс проводят в 0,01 М глициново-солевом буферном растворе с pH 8,20 8,22 при следующем соотношении компонентов, г на 1 л буферного раствора:
Гамма-глобулин, иммунный к стрептококку группы B 0,24 0,26
Смесь полистирольных латексов 2,50 1,55
Бычий сывороточный альбумин 0,50 0,55
Полиэтиленгликоль-6000 55,0 65,0
Мертиолят 0,10 0,12х