СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ СТРЕПТОКОККА ГРУППЫ Д Российский патент 1998 года по МПК A61K39/00 

Способ относится к микробиологии, а именно к получению препарата, необходимого для проведения иммунологического анализа с целью идентификации стрептококков группы D.

Указанный препарат необходим:
1. для выявления стрептококковой этиологии заболеваний у людей;
2. для контроля за протеканием лечения больных стрептококковыми заболеваниями;
3. для оценки санитарного состояния объектов окружающей среды.

Из аналогов известен способ, по которому возможно получение препарата для идентификации стрептококка группы D. Необходимый препарат получают путем иммобилизации антитела гамма-глобулина, иммунного к стрептококку группы D на поверхности частиц латекса, получаемого на основе полистирола и последующего отделения обработанных латексных частиц. Способ основан на реализации латексной агглютинации. Указанный способ является близким к заявляемому по своей технической сущности и принят авторами за прототип. Недостатком прототипа является сложность технологии получения препарата, заключающаяся в необходимости двукратной обработки латексных частиц составами, включающими антитела с целью их иммобилизации.

Техническая сущность заявляемого способа состоит в том, что целевой препарат получают путем иммобилизации гамма-глобулина, иммунного к стрептококку группы D. Процесс включает следующие операции:
1. Смешение антитела гамма-глобулина, иммунного к стрептококку группы D, разбавленного 0,01 М глициново-солевым буферным раствором с рН 8,2 с латексом, разбавленным тем же буферным раствором до содержания латекса в буферном растворе 1% в расчете на полимер. Применяемый латекс представляет собой смесь латекса полистирола с дисперсностью 0,20-0,22 мкм и латекса полистирола с дисперсностью 0,5-0,7 мкм, активированного метакрилатом цинка. Объемное соотношение указанных латексов в смеси равно 1:1.

2. Полученную по п. 1 смесь инкубируют при 56^oC в течение 30 мин.

3. Смесь, полученную по п. 2, охлаждают до 4-6^oC.

4. Охлажденную смесь смешивают с бычьим сыворотным альбумином, разбавленным 0,01 М глициново-солевым буферным раствором.

5. В полученную смесь вводят полиэтиленгликоль ПЭГ-6000 и концентрат.

6. Компоненты, необходимые для приготовления целевого препарата, берут в следующем соотношении, г/л:
Гаммаглобулин, иммунный с стрептококку группы D 0,12-0,13
Смесь латексов 2,50-2,55
Бычий сыворотный альбумин 0,50-0,55
Полиэтиленгликоль 55,00-65,00
Консервант 0,10-1,00
0,01 М Глициново-солевой буферный раствор с рН 8,20-8,22 Остальное
Предлагаемый способ несложен и обеспечивает получение высокочувствительного препарата.

Авторы утверждают, что способ соответствует критерию изобретательского уровня, т. к. на основании ознакомления с научно-технической и патентной информацией, а также в силу своих опыта и знаний вся совокупность технических признаков предлагаемого способа явным образом не вытекает из уровня техники, имеющей отношение к предлагаемому объекту.

1. Гамма-глобулин, иммунный к стрептококкам группы D, разводят 0,01 М глициново-солевым буферным раствором с рН 8,2 до концентрации 0,8 мг/л.

2. Полистирольный латекс с размером частиц 0,2 мкм разводят 0,01 М глициново-солевым раствором с рН 8,2 до концентрации 1% полимера.

3. Полистирольный латекс с размером частиц 0,6 мкм, активированный метакрилатом цинка, разводят 0,01 М глициново-солевым буферным раствором с рН 8,2 до концентрации 1% полимера.

4. Подготовленные по пп. 2 и 3 полистирольные латексы смешивают в объемном соотношении 1:1.

5. 10 мл рабочего раствора гамма-глобулина, полученного по п. 1, смешивают с 10 мл 1%-ной латексной смеси, полученной по п.4.

6. Смесь, полученную по п. 5, подвергают инкубированию в водяной бане при 56^oC и при 140 колебаниях в 1 мин в течение 30 мин.

7. Смесь, полученную по п. 6, охлаждают. К охлажденной до 4-6^oC смеси латекса с гамма-глобулином добавляют 20 мл 0,1%-ного раствора бычьего сывороточного альбумина в 0,01 М глициново-солевом буферном растворе с рН 8,2, содержащего 6% полиэтиленгликоля-6000. В полученную смесь добавляют 0,004 г мертиолята-консерванта.

Препарат группы D, изготовленный вышеописанным способом, обладает высокой специфичностью, проявляющейся в отсутствии перекрестных реакций в отношении антигенов гетерологичных групп этих микроорганизмов.

Чувствительность препаратов группы D проверяли по реакции латексной агглотипации (РЛА) на стекле с разведениями 18-24-часовых культур стрептококков этой группы, выращенных в жидкой питательной среде и обработанных 1%-ным раствором химопсина для снятия спонтанной агглютинации.

Результат исследования чувствительности препарата представлен ниже:
РЛА на стекле с культурами стрептококков группы D, обработанных химопсином, 10⁴-10⁵ КОЕ.

Примечания:
1. КОЕ колониеобразующие единицы стрептококка.

2. Чувствительность препарата представлена в соответствующем показателе, соответствующем одной пробе испытуемого материала (0,05 мл).

Способ получения препарата для идентификации стрептококков группы D. Использование: в медицине, в частности, в микробиологии. Сущность: получение препарата осуществляют путем иммобилизации гамма-глобулина, иммунного и стрептококку группы D, на поверхности полистирольного латекса, представляющего собой смесь латексов с различной дисперсностью. Стабилизируют в присутствии бычьего альбумина, полиэтиленгликоля и консерванта при условии определенного соотношения всех компонентов, представленных в г/л, а процесс проводят в 0,01 М глициново-солевом буферном растворе с рН 8,20-8,22. Способ прост в исполнении.

Способ получения препарата для идентификации стрептококка группы D, отличающийся тем, что гамма-глобулин иммунный к стрептококку группы D, иммобилизуют на поверхности частиц полистирольного латекса и полученный препарат стабилизируют раствором бычьего сывороточного альбумина в присутствии полиэтиленгликоля и мертиолята, причем в качестве полистирольного латекса используют смесь, составленную из равных объемов полистирольного латекса с дисперсностью 0,20 0,22 мкм и полистирольного латекса с дисперсностью 0,50 - 0,70 мкм активированного метакрилатом цинка и процесс проводят в 0,01 М глициново-солевом буферном растворе с pH 8,20 8,22 при следующем соотношении компонентов, г на 1 л буферного раствора:
Гамма-глобулин, иммунный к стрептококку группы D 0,12 0,13
Смесь полистирольных латексов 2,50 2,55
Бычий сывороточный альбумин 0,50 0,55
Полиэтиленгликоль 55,0 65,0
Мертиолят 0,10 0,120