СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО СРЕДСТВА Российский патент 1998 года по МПК A61K45/05 

Предлагаемое изобретение относится к области получения лекарственных препаратов, в частности к получению противоопухолевых препаратов, и может найти применение в практической онкологии.

Известен способ получения противоопухолевого средства (Авт.св. СССР N 1701323, кл. A 61K 45/05, опубл. 1991), в котором водный, содержащий ДНК и хлорид натрия раствор смешивают с водным раствором тетрахлоридплатинида калия. Перед смешиванием в последний добавляют хлорид аммония, хлорид калия и ацетат калия, при этом каждый раствор нагревают до температуры плавления ДНК. В раствор, содержащий ДНК и хлорид натрия, добавляют цитрат натрия. Способ позволяет получать средство, сочетающее высокую противоопухолевую активность с выраженным иммуномодулирующим действием.

Определенный интерес представляют препараты растительного происхождения. Такими препаратами являются, в частности, таксаны, получаемые из тиссов рода Taxus. Так, политаксел препарат растительного происхождения получен из коры тихоокеанского тисса (Вопросы онкологии, 1994, т.40, NN 9-12, с.259).

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа, позволяющего получать из сырья растительного происхождения эффективные препараты, обладающие противоопухолевой активностью.

Поставленная задача решается тем, что предложен способ получения противоопухолевого средства из сырья растительного происхождения, в котором медицинский лигнин в виде водно-щелочной суспензии после обработки ультразвуковым воздействием окисляют кислородсодержащим газом и после охлаждения реакционной массы и отделения твердой фазы из подкисленного раствора выделяют целевой продукт.

Ультразвуковое воздействие проводят при мощности излучения 40±0,5 Вт в течение 20-25 мин при частоте колебаний 22±0,5 кГц.

Окисление кислородсодержащим газом проводят при температуре 190-200^oC, давлении 2,0-2,5 МПа в течение 0,5-3 ч.

В качестве медицинского лигнина, продукта щелочного гидролиза лигнина, могут быть использованы энтеросорбенты на основе лигнина, такие как "Полифепан", "Лигносорб".

"Полифепан" неспецифический энтеросорбент (рег. N 80/1211/3) представляет собой порошок коричневого цвета без запаха и вкуса, влажностью 65% состоит в основном из лигнина и содержит не более 20% остаточных полисахаридов (гидроцеллюлозы).

"Лигносорб" (паста полифепана) ВФС 42-2203-93.

Все используемые в качестве исходного сырья вещества разрешены для приема внутрь организма.

Специальные исследования показали, что при окислительно-гидролитической деструкции медицинского лигнина в условиях предлагаемого способа не происходит образования вредных для организма веществ, таких как полиароматические углеводороды, нитрозоамины и полихлорированные дицикло-п-диоксины.

Изучение токсичности продукта, получаемого предлагаемым способом, на здоровых мышах SHR обоего пола массой 18-20 г показало, что доза в 300 мг/кг массы вызывает некрозы в месте введения препарата, а ЛД₅₀ составляет 640 мг/кг массы.

Противоопухолевая активность полученного продукта оценивалась по его влиянию на рост опухолей у различного рода мышей (солидная опухоль Эрлиха, карциносаркома Ca 755, спонтанная опухоль молочной железы, карциносаркома Уокер). Как показали экспериментальные данные, введение препарата мышам снижает рост опухолей на 60-70% (69,4-74,8% для опухоли Эрлиха, 50-62% для карциносаркомы Ca 755, от 50% до полного исчезновения опухоли для опухоли молочной железы, до 88% для карциносаркомы Уокер).

Нижеследующие примеры поясняют предлагаемый способ и свойства получаемого предлагаемым способом продукта.

Пример 1. В исходной водно-щелочной суспензии медицинского лигнина (марки "Полифепан", рег. N 80/1211/3) неспецифического энтерального сорбента создают процесс развитой акустической кавитации при мощности излучения 40±0,5 Вт/см², частоте колебаний 22±0,5 кГц в течение 23±2 мин с последующим окислением кислородом воздуха.

Состав суспензии г
Полифепан 500
Щелочь (гидроксид натрия) 10
Плотность суспензии 1:10.

Окисление проводят в реакторе с механическим перемешиванием в течение 3 ч. Условия проведения процесса:
Температура 195±5^oC
Давление 2,0-2,5 МПа
Расход воздуха 5 л/мин
Реакционную массу охлаждают до комнатной температуры и от раствора отделяют осадок фильтрованием. Фильтрат подкисляют серной кислотой до pH 2-3. Выпавший осадок отделяют фильтрованием, промывают водно-спиртовой смесью, затем дистиллированной водой до установления pH 7±0,5 и высушивают при 105^oC. Продукт представляет собой порошок темно-коричневого цвета, без запаха и вкуса, нерастворимый в воде.

Элементный состав выделенного продукта в пересчете на органическое вещество, мас. C 61,36, H 3,56, N -0,41, (S+0) 32,66 (рассчитано по разности). Вещество разлагается без плавления, начиная со 170^oC.

Результаты инфракрасных Фурье-спектров показывают, что в полученном продукте присутствуют близкие по интенсивности полосы 1700 и 1600 см^-1, характерные для карбоксильных групп, интенсивная полоса в области 1200 см^-1, широкая по структуре полоса с локальными максимумами 3400, 3200, 3100 и 2600 см^-1, а также полосы 2926, 2815, 1460 см^-1 и полосы 2955 и 2870 см^-1, характерные для метиленовых групп.

Полученный продукт обладает парамагнетизмом. В продукте наблюдаются симметричные сигналы ЭПР с q-фактором 2,000±0,001, близким к значению для свободного электрона (q=2,00) и шириной H=6,1±0,1 эрстед. Концентрация ПМЦ находится на уровне (2,5±0,4)•10¹⁸ на один грамм.

Продукт содержит 3,0-3,6 мг•экв COOH-групп и 6,0-6,5 мг•экв фенольных гидроксилов и по структуре может быть отнесен к классу полиоксикарбоновых кислот.

Пример 2. 200 мг продукта растворяли в 2 мл 0,2 М тетразамещенного пирофосфата натрия, нагревали на водяной бане до полного растворения и доводили объем до 10 мл физиологическим раствором, стерилизовали на водяной бане 10 мин. Для введения животным раствор разводили стерильным физиологическим раствором до необходимой концентрации.

Солидную опухоль Эрлиха перевивали беспородным мышам-самкам массой 18-20 г подкожно введением 10⁶ опухолевых клеток. При ежедневном внутримышечном введении в дозе 25 мг/кг в течение 5 дн продукта, полученного предлагаемым способом, наблюдается противоопухолевый эффект (см. табл. 1). К 19 дню у двух мышей опухоли исчезли. Однократное внутримышечное введение продукта в дозе 100 мг/кг мышам с солидной опухолью Эрлиха вызывает значительное торможение роста опухолей (см. табл. 2).

Пример 3. Мышам C₅₇BI введением подкожно взвеси 10⁶ опухолевых клеток перевивали карциносаркому 755. В течение 5 дн, начиная с третьего после трансплантации внутримышечно или внутрибрюшинно или однократно внутримышечно на третий день после трансплантации опухолей, вводили продукт, полученный предлагаемым способом, в дозе 100 мг/кг. Пятикратное введение продукта вызывает умеренное торможение роста опухолей 62% (см. табл. 3).

При внутрибрюшинном введении продукта максимальный противоопухолевый эффект обнаруживается на 14 день, а при внутримышечном на 7 день после трансплантации опухолей. Эффективность однократного, внутримышечного введения продукта близка к эффективности его при многократном введении.

Пример 4. Мышам со спонтанной опухолью молочной железы однократно вводился продукт, полученный заявляемым способом, в дозе 25 и 50 мг/кг. Влияние продукта на рост спонтанной опухоли молочной железы у мышей представлено в табл. 4.

Однократное внутримышечное введение продукта в дозе 25 мг/кг мыши N 1 привело к двукратному уменьшению опухоли на 5 день после введения. Однократное введение продукта внутримышечно в дозе 50 мг/кг мыши N 2 привело к уменьшению объема опухоли и к 12 дню опухоль исчезла.

Пример 5. Крысам-самцам массой 100-150 г с опухолью карциносаркомы Уокер вводили продукт внутримышечно ежедневно в течение 5 дн в дозе 50 мг/кг. Наиболее эффективное угнетение роста опухолей карциносаркомы Уокер наблюдалось на 7 день после их трансплантации (см. табл. 5).

Использование: в практической онкологии. Сущность изобретения: медицинский лигнин в виде водно-щелочной суспензии подвергают ультразвуковому воздействию и окисляют кислородсодержащим газом. После охлаждения реакционной массы и отделения твердой фазы из подкисленного раствора выделяют целевой продукт. Ультразвуковое воздействие осуществляют при мощности излучения 40±0,5 Вт, частоте колебаний 22±0,5 кГц в течение 20-25 мин, а окисление кислородсодержащим газом проводят при температуре 190-200^oC, давлении 2,0-2,5 МПа в течение 0,5-3 ч. Технический результат: снижение роста опухолей. 1 з.п. ф-лы, 5 табл.

1. Способ получения противоопухолевого средства путем обработки растительного сырья, отличающийся тем, что медицинский лигнин в виде водно-щелочной суспензии после обработки ультразвуковым воздействием окисляют кислородсодержащим газом и после охлаждения реакционной массы и отделения твердой фазы из подкисленного раствора выделяют целевой продукт. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что обработку ультразвуковым воздействием проводят при мощности излучения 40,0 ± 0,5 Вт, частоте звуковых колебаний 22,0 ± 0,5 кГц в течение 20 25 мин, а окисление кислородсодержащим газом при температуре 190 200^oС, давлении 2,0 2,5 МПа в течение 0,5 3,0 ч.